FORTI, L. A.

SOSA-GÓMEZ, D. R.

VILAS-BÔAS, G. T. F. L.

WISCH, L. N.

Repository Open Access to Scientific Information from Embrapa

Comissão de Entomologia 479EFEITOS SUBLETAIS DE Bacillus thuringiensis HD-73, QUE EXPRESSA A TOXINA CRY1AC, NA INFECÇÃO POR Nomuraea rileyi E NPVS DE NOCTUÍDEOSWISCH, L.N.1; FORTI, L.A.2; VILAS-BÔAS, G.T.F.L.3;SOSA-GÓMEZ, D.R.41Programa de Pós-Graduação em Agronomia. Universidade Estadual de Ponta Grossa - UEPG, CEP 84030-900 Ponta Grossa, PR,  wisch022@hotmail.com | 2Universidade Norte do Paraná – UNOPAR | 3Universidade Estadual de Londrina – UEL | 4 Embrapa Soja.Nos últimos anos, tem se expandido a área cultivada no Brasil, de 50,9 milhões para 53,4 milhões de hectares, um acréscimo estimado em 4,2% na safra 2012/13 (CONAB, 2013). Cerca de 44,6 milhões de hectares são cultivadas com as principais commodities soja [Glycine max (L.) Merrill], milho (Zea mays L.) e algodão (Gossypium hirsutum L.), sendo aproximadamente 37,1 milhões de hectares com plantas geneticamente modificadas. Dentre as tecnologias, a área com plantas resistentes a insetos é de aproximadamente 5,7 milhões e 0,2 milhões de ha para milho (verão e inverno) e algodão, respectivamente (GALVÃO, 2012). As plantas de soja-Bt, são capazes de produzirem níveis suficientes de proteínas cry, para controlar lepidopteros pragas, tais como as lagartas-falsas-medideiras, Chrysodeixis includens (Walker, [1858]) e Rachiplusia nu (Gueneé, 1852) (CTNBio, 2010). Entretanto não controla espécies de Spodoptera.No Brasil, há previsão da liberação comercial da soja Bt para a próxima safra 2013/14, expandindo as áreas com disponibilidade a toxina Cry1Ac. A exposição da toxina a espécies de lagartas tolerantes poderá afetar sua sensibilidade à infecção por entomopatógenos. Portanto, nosso objetivo foi avaliar o efeito subletal da bactéria HD-73 que expressa a toxina Cry1Ac sobre a atividade dos entomopatógenos, o fungo N. rileyi e os vírus de poliedrose nuclear (NPV), em três espécies de Noctuídeos, C. includens, R. nu e Spodoptera eridania.Lagartas de C. includens, R. nu e S. eridania obtidas da criação da Embrapa Soja foram inoculadas com N. rileyi, isolado CNPSo-Nr10, e os baculovírus de C. includens (PsinSNPV), de R. nu (RanuNPV) e S. eridania (S. eridania NPV). Os bioensaios foram realizados com a cepa HD-73 (Cry1Ac) de B. thuringiensis, liofilizada. Nomuraea rileyi foi cultivado “in vitro” em meio de cultura Smay (sabouraud, maltose, ágar e levedura) contendo hemolinfa a 2% das respectivas espécies em estudo, a 26 ± 1°C e fotofase de 14 horas. O delineamento utilizado foi inteiramente ao acaso com quatro repetições. A concentração de HD-73 foi de 6 µg.mL-1, 0,4 µg.mL-1, e 66,7 µg.mL-1 para C. includens, R. nu e S. eridania, respectivamente. As concentrações de NPVs foram de 5 x 103 OB.mL-1 para NPV de S. eridania e de 3 x 103 OB.mL-1, para PsinSNPV e RanuNPV. Os bioensaios foram compostos por seis tratamentos: 1) dieta artificial + bactéria HD-73 + NPV; 2) dieta artificial + bactéria HD-73 + N. rileyi; 3) dieta artificial + bactéria HD-73; 4) dieta artificial + NPV; 5) dieta artificial + N. rileyi; 6) dieta artificial controle. Em cada tratamento foram inoculadas 60 lagartas de cada espécie. Lagartas neonatas foram mantidas por 48 horas na dieta tratada com bactéria HD-73 e na dieta sem toxina. Após esse período, as lagartas foram submetidas à inoculação com os entomopatógenos. A inoculação dos vírus foi incorporada na dieta e a inoculação de N. rileyi foi realizada por contato, transferindo conídios da colônia do fungo, com o auxílio de uma alça de platina de 1 µL, aplicada sobre as lagartas. As lagartas foram incubadas em câmaras B.O.D. a 26 ± 2ºC, com fotoperíodo de 14:10 (L:E) e umidade relativa de 60 ± 10%.A mortalidade foi registrada diariamente até os 11 dias após a inoculação dos entomopatógenos. Após nove e onze dias da inoculação, as lagartas vivas de Plusiinae e S. eridania, respectivamente, foram pesadas individualmente. Os dados de peso larval foram analisados pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis e a comparação múltipla das médias pelo teste de Dunn´s (p < 0,05). Os valores de mortalidade foram submetidos à comparação de médias pelo teste de Tukey (p < 0,05). Para as análises estatísticas Resumos da XXXIII Reunião de Pesquisa de Soja da Região Central do Brasil - Londrina, PR, agosto de 2013 Comissão de Entomologia48 49Figura 1. Peso médio ± EP de lagartas de Chrysodeixis includens (a), Rachiplusia nu (b) e Spodoptera eridania (c), após nove dias (Plusiinae) e onze dias (S. eridania) da inoculação com Nomuraea rileyi (CNPSo-Nr10) e os respectivos vírus, PsinSNPV, RanuNPV e Spodoptera eridania NPV. Londrina, PR, 2013. Médias seguidas pelas mesmas letras não são significativamente diferentes pelo teste de Dunn´s (p < 0,05). ns= não significativo. a a ab b c c ns ns ns ns ns ns a a ab ab ab b (a)(b)(c)usou-se o software SigmaPlot for Windows Version 11.0 © (2008 Systat Software, Inc., Chicago, IL, USA).A ingestão da dose subletal da toxina por C. includens e S. eridania não favoreceu uma maior incidência das doenças causadas por N. rileyi e os vírus de poliedrose nuclear (Tabela 1). Entretanto, as lagartas sobreviventes de C. includens provenientes dos tratamentos com a bactéria HD-73 isolada (Cry1Ac) e em conjunto com o fungo CNPSo-Nr10, apresentaram o menor peso larval, seguido pela interação da bactéria HD-73 com NPV, indicando que os patógenos na presença da toxina afetaram em maior medida o desenvolvimento larval, quando comparado com a ação do patógeno isolado (Figura 1).As comparações do peso das lagartas de S. eridania e R. nu indicam que a presença da toxina não alterou significativamente o desenvolvimento das lagartas inoculadas com vírus ou fungo (Figuras 2 e 3). Por outro lado, a mortalidade de R. nu foi maior quando as lagartas alimentadas com a dieta contendo a toxina e posteriormente inoculados com N. rileyi e seu NPV, RanuNPV (Tabela 1). Estudos mais detalhados devem estar voltados para esta interação, uma vez a disponibilização e expansão de cultivares que expressam mais de um evento Bt é inmimente, considerando a entrada da soja Bt no mercado nacional. Tornando imprescindível avaliar o impacto destas tecnologias na ação dos inimigos naturais dos insetos-pragas.    ReferênciasCONAB. Companhia Nacional de Abastecimento. Acompanhamento de safra brasileira: grãos, safra 2012/2013, sétimo levantamento, abr./2013. Brasília: Conab, 2013.COMISSÃO TÉCNICA NACIONAL DE BIOSSEGURANÇA – CTNBio.. Parecer técnico n° 2542/2010. Liberação comercial de soja geneticamente modificada resistente a insetos e tolerante a herbicida, soja MON 87701 x MON 89788. 2010.GALVÃO, A. ed. Relatório biotecnologia. 2º acompanhamento de adoção da biotecnologia agrícola para a safra 2012/13. Belo Horizonte: Céleres, dez. 2012. Disponível em: <http://celeres.com.br/wordpress/wp-content/uploads/2012/12/RelBiotecBrasil_1202_por.pdf>. Acesso em: 29 abr. 2013.Tabela 1. Mortalidade média (± EP) de lagartas Chrysodeixis includens, Rachiplusia nu e Spodoptera eridania pela bactéria HD-73 (Cry1Ac), Nomuraea rileyi (CNPSo-Nr10) e vírus (NPV). Londrina, PR, 2013.Médias seguidas pelas mesmas letras na linha não são significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p < 0,05).Espécies % Mortalidade CV (%) Testemunha HD-73 (Cry1Ac) NPV NPV+HD-73 Nr10 Nr10+HD-73 C. includens 13,7±4,1 ns 17,6±3,6 ns 15,2±3,2 ns 15,3±4,9 ns 34,9±11,1 ns 26,1±4,0 ns 53,7 R. nu 8,3±6,3 c 12,3±1,7 bc 29,7±4,5 ab 32,3±2,9 a 18,4±5,6 abc 31,9±3,1 a 37,5 S. eridania 3,33±3,33 b 10,0±1,9 ab 17,0±5,7 ab 16,7±3,3 ab 22,4±3,3 a 25,5±5,7 a 53,0  Resumos da XXXIII Reunião de Pesquisa de Soja da Região Central do Brasil - Londrina, PR, agosto de 2013 Comissão de Entomologia48 49Figura 1. Peso médio ± EP de lagartas de Chrysodeixis includens (a), Rachiplusia nu (b) e Spodoptera eridania (c), após nove dias (Plusiinae) e onze dias (S. eridania) da inoculação com Nomuraea rileyi (CNPSo-Nr10) e os respectivos vírus, PsinSNPV, RanuNPV e Spodoptera eridania NPV. Londrina, PR, 2013. Médias seguidas pelas mesmas letras não são significativamente diferentes pelo teste de Dunn´s (p < 0,05). ns= não significativo. a a ab b c c ns ns ns ns ns ns a a ab ab ab b (a)(b)(c)usou-se o software SigmaPlot for Windows Version 11.0 © (2008 Systat Software, Inc., Chicago, IL, USA).A ingestão da dose subletal da toxina por C. includens e S. eridania não favoreceu uma maior incidência das doenças causadas por N. rileyi e os vírus de poliedrose nuclear (Tabela 1). Entretanto, as lagartas sobreviventes de C. includens provenientes dos tratamentos com a bactéria HD-73 isolada (Cry1Ac) e em conjunto com o fungo CNPSo-Nr10, apresentaram o menor peso larval, seguido pela interação da bactéria HD-73 com NPV, indicando que os patógenos na presença da toxina afetaram em maior medida o desenvolvimento larval, quando comparado com a ação do patógeno isolado (Figura 1).As comparações do peso das lagartas de S. eridania e R. nu indicam que a presença da toxina não alterou significativamente o desenvolvimento das lagartas inoculadas com vírus ou fungo (Figuras 2 e 3). Por outro lado, a mortalidade de R. nu foi maior quando as lagartas alimentadas com a dieta contendo a toxina e posteriormente inoculados com N. rileyi e seu NPV, RanuNPV (Tabela 1). Estudos mais detalhados devem estar voltados para esta interação, uma vez a disponibilização e expansão de cultivares que expressam mais de um evento Bt é inmimente, considerando a entrada da soja Bt no mercado nacional. Tornando imprescindível avaliar o impacto destas tecnologias na ação dos inimigos naturais dos insetos-pragas.    ReferênciasCONAB. Companhia Nacional de Abastecimento. Acompanhamento de safra brasileira: grãos, safra 2012/2013, sétimo levantamento, abr./2013. Brasília: Conab, 2013.COMISSÃO TÉCNICA NACIONAL DE BIOSSEGURANÇA – CTNBio.. Parecer técnico n° 2542/2010. Liberação comercial de soja geneticamente modificada resistente a insetos e tolerante a herbicida, soja MON 87701 x MON 89788. 2010.GALVÃO, A. ed. Relatório biotecnologia. 2º acompanhamento de adoção da biotecnologia agrícola para a safra 2012/13. Belo Horizonte: Céleres, dez. 2012. Disponível em: <http://celeres.com.br/wordpress/wp-content/uploads/2012/12/RelBiotecBrasil_1202_por.pdf>. Acesso em: 29 abr. 2013.Tabela 1. Mortalidade média (± EP) de lagartas Chrysodeixis includens, Rachiplusia nu e Spodoptera eridania pela bactéria HD-73 (Cry1Ac), Nomuraea rileyi (CNPSo-Nr10) e vírus (NPV). Londrina, PR, 2013.Médias seguidas pelas mesmas letras na linha não são significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p < 0,05).Espécies % Mortalidade CV (%) Testemunha HD-73 (Cry1Ac) NPV NPV+HD-73 Nr10 Nr10+HD-73 C. includens 13,7±4,1 ns 17,6±3,6 ns 15,2±3,2 ns 15,3±4,9 ns 34,9±11,1 ns 26,1±4,0 ns 53,7 R. nu 8,3±6,3 c 12,3±1,7 bc 29,7±4,5 ab 32,3±2,9 a 18,4±5,6 abc 31,9±3,1 a 37,5 S. eridania 3,33±3,33 b 10,0±1,9 ab 17,0±5,7 ab 16,7±3,3 ab 22,4±3,3 a 25,5±5,7 a 53,0  

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