AGUIAR, O. J. R.

GUILHON, G. M. S. P.

SANTOS, A. S.

SOUZA, R. F. de

AGUIAR, O. J. R. de

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CONCENTRADOS DE METABÓLITOS OBTIDOS DAS FOLHAS DA TECA (TECTONA GRANDIS (L.F)) PARA USO COMO CORANTE   Ronilson Freitas de Souza Curso de licenciatura plena em Química – Universidade federal do Pará – UFPA./LabISisBIO_QF  Giselle Maria Skelding Pinheiro Guilhon Pós Graduação em Química – Produtos Naturais; Universidade Federal do Pará – UFPA.  Osmar José Romeiro Aguiar Agroindústria (CPATU) - Embrapa Amazônia Oriental.  Alberdan Silva Santos * Pós Graduação em Química/Biotecnologia; Universidade Federal do Pará – UFPA./LabISisBIO_QF *autor para correspondência: alberdan@ufpa.br  RESUMO:Este trabalho descreve o uso potencial da espécie Tectona grandis L.F. para desenvolvimento de tecnologia  a partir do aproveitamento de seus metabólitos para a produção de corante natural para serem utilizadas na indústria de tintas e nas artes plásticas. Estudos químicos anteriores, realizados nesta espécie, mostraram a presença de substâncias pertencentes à classe das antraquinonas, à qual são atribuídas propriedades antifúngicas e repelentes a ataques de inseto, sendo por isso responsável pela durabilidade da madeira quando exposta ao tempo. Neste trabalho, foram utilizadas 93g da folha seca para uma extração a frio com éter etílico, o concentrado obtido foi submetido à análise espectrofotométrica UV- Visível e a analises fitoquímicas; também aplicadas análises de RMNH, RMNC13, DEPT e HETCOR. Obteve-se um concentrado com rendimento de 19,75 %m/m. Este conjunto de substâncias apresentou um comprimento de onda médio de 237nm. A investigação nesse extrato apresentou concentrados de substancias com potencial como fonte de metabólitos cromoindicador vegetal. Estão sendo realizados estudos, EMBRAPA AMAZÔNIA ORIENTAL em parceria com o PQ/UFPA, no desenvolvimento de métodos elucidação estrutural destes principio ativos, que além de fonte de corante natural, serão submetidas a ensaio biológico tais como: fungitóxico, bactericida, alelopáticos, inibidor de protease e antitumorais.  PALAVRA-CHAVE: Tectona Grandis, Potencial corante, Fonte de metabólitos.  INTRODUÇÃO:   Tectona grandis (L.f)-fig 01, pertencente à família botânica Verbenácea, conhecida popularmente como teca, e, nativa das florestas tropicais do subcontinente Indico e Sudeste asiático (ANGELI, 2003). E o seu cultivo vem crescendo bastante na Amazônia como espécie de plantios racionais de reflorestamento. E ao longo dos anos, estudos químicos da espécie Tectona  grandis, registraram a presença de uma variedade de substancias: 1-hidroxi-2-metilantraquinona, tectoquinona, tectol,5-hidroxilalapachol, lapachol, dihidro-α-lapachona, 2-metilquinizarina, pachibasina, β-sitosterol, obtusifolina, esqualato, acido betulinico, tectograndone  (RAMESH,1979;SINGH,JAIN & BHARGARA,1989;AGUINALDO, E AL,1993;GUPA  & SINGH,2004).Estudos realizados recentemente (MOREIRA,R.Y.O:2004) confirmaram a presença da maioria dessas substâncias no caule dessa espécie. No entanto,com a necessidade de se ter fontes de corante natural que possam futuramente substituir os corantes sintéticos, procurou-se estudar as folhas novas da Teca, visto que, essa apresenta substancias com alta variedades e diversidades de tonalidade. Assim, objetiva-se o desenvolvimento tecnológico de uma nova fonte corante natural para tintas no uso industrial e, principalmente, em artes plásticas.    1 Figura 01: Embrapa Amazônia Oriental   2-MATERIAL E METODOS:   2.1-INSTRUMENTOS E REAGENTES:  • Espectrômetro de ressonância magnética nuclear- VARIAN modelo MERCURY-300 (300MHz). • Evaporador rotativo QUIMIS  • Câmara de análise de fluorescência por luz ultravioleta-SPECTROLINE modelo CM-10, com o apoio de luz tipo SPECTROLINE modelo ENF-260C. • Balança analítica-SARTORIUS modelo BP210S. • Solventes utilizados no desenvolvimento do trabalho-destilados e/ou PA (SYNTH e NUCLEAR).  2.2 COLETA E IDENTIFICAÇÃO DO MATERIAL BOTÂNICO:  A coleta do material botânico foi feita na área da Embrapa/PA na cidade de Belém do Pará, pelo responsável da plantação, Dr. Osmar José Romeiro de Aguiar.  2.3 OBTENÇÃO DO EXTRATO BRUTO DAS PARTES AÉREAS DA TECTONA GRANDIS  As partes aéreas da Tectona grandis “in natura” foram cortadas manualmente obtendo-se 491,86g de material botânico e após secas em estufa de circulação de ar forçada, obtendo-se 92,02g de massa seca. A partir deste material, foi preparado o extrato hidroalcoólico, através de percolação por 48 horas a temperatura ambiente. Foi feito duas extrações obtendo-se 18,09 g de extrato bruto.  2.3 FRACIONAMENTO DO EXTRATO BRUTO:  O extrato etílico foi submetido a uma Coluna Cromatográfica Por Via Úmida (CCVU)-Fig 02, utilizando-se sílica gel retificada como fase estacionária, submetendo-a aos seguintes sistemas de eluição de 200 mL cada (Tab 01). Após análise espectral de RMN de 1H foram selecionadas as frações 2F, 3F e 4F, pois até então, estas se mostraram bastantes promissoras para serem refracionadas, visto que mostraram sinais referentes a hidrogênios aromáticos. Assim, a fração 2F (20mg) foi recristalizada com hexano, obtendo-se assim duas frações que após análise espectral de RMN 1H evidenciou a presença de graxas.    Fiura 02:CCVU  2Tabela01: Sistemas de eluição que foi submetido o extrato bruto da Tectona grandis Sistema de Eluentes Frações Obtidas Hexano 100 % 1F Hexano/acetato de etila 2,5% 2F Hexano/acetato de etila 5% 3F Hexano/acetato de etila 7,5 % 4F Hexano/acetato de etila 10 % 5F Hexano/acetato de etila 12,5%, 6F Hexano/acetato de etila 20%, 7F Hexano/acetato de etila 50% 8F Acetato de etila 100% 9F   As placas cromatográficas foram preparadas com camadas de 0,25 mm de gel de sílica, eluídas em hexano/ AcOEt e AcOEt/MetOH e adição de uma gota de acetato etílico, havendo mudança de cor imediatamente, variando concentrações a medida que houve-se separação de cores. Os cromatogramas foram observados no visível antes e após as placas serem borrifadas com solução de sulfato cérico seguido de aquecimento. A fração 3F(445.5mg ) foi refracionada em coluna de sílica gel nos sistemas, também de 200 ml cada: 1 - hexano/AcOEt 2.5%; 2 - hexano/AcOEt 7,5%,3 - hexano/AcOEt12,5%, 4 - hexano/AcOEt 15%, 5 - hexano/AcOEt 20%,6 - hexano/AcOEt 30%,7 - hexano/AcOEt 50%,8 - AcOEt 100%.Após isto, através de cromatografia em camada delgada (CCDC), as amostras foram reunidas, assim denominadas de 3a, 3b, 3c e 3d.E, novamente, após análise espectral de RMN 1H, visto que evidenciava a presença de sinais aromáticos, sendo que a amostra 3c não evidenciou. Novamente foi feito o refracionamento da fração 4F (1, 6924g) em coluna de sílica gel nos sistemas também de 200 mL cada: 1 - hexano/AcOEt 100%, 2 - hexano/AcOEt 5%, 3 - hexano/AcOEt 7,5%, 4 - hexano/AcOEt 10%, 5 - hexano/AcOEt 12,5%,6 - hexano/AcOEt 20%, 7 - hexano/AcOEt 50%, 8 - hexano/AcOEt 80%, 9 - AcOEt 100%, 10 – AcOEt/MeTOH 5%, 11 - AcOEt/MeTOH 10% e 12 - MeTOH – 100%. Através de cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC), a amostra 4c mostrou-se mais promissora de sinais referentes ao lapachol, mas não sendo ainda comprovado, pois esta se apresentou mais purificadas em relação às demais. O refracionamento da fração 4c obteve-se 16 frações e, através de cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC), as amostras foram reunidas e feitas análises de RMN 1H, onde ainda mostravam-se ainda em estado de mistura.  Todos os procedimentos descritos sobre o fracionamento do extrato bruto e os refracionamentos estão descritos no fluxograma da figura 03, abaixo.                    3Figura 03: Fluxograma do fracionamento do extrato hidroalcoólico das folhas de Teca      RESULTADOS E DISCUSSAO:  Utilizando a extração á frio com éter etílico, partindo de 93,0g das folhas secas, obteve-se 18,36g de extrato (rendimento de 19,75% m/m), apresentando maior absorvância em 237 nm na região do visível. O refracionamento foi feito com 3F e 4F, com sistema hidroalcoólico, pois apresentam coloração intensa e foi observado o espectro destas frações observou-se sinais de hidrogênios aromáticos. A 3F gerou 4 frações com colorações distintas, porém, selecionou-se as frações 4C e 4D com massas de 658,8mg e 212,5mg respectivamente, que embora apresentam coloração similar, apresentam espectros de 1H e 13C diferentes. Nas literaturas consultadas apontam para uma substancia bastante conhecida o lapachol, mas comparando com um padrão no HPLC, dos concentrados obtidos, não verificou a presença dessa substância. Estes concentrados apresentam potencial como fonte de metabólitos cromo indicador vegetal.  Com a extração á frio, onde partiu de uma massa seca de 93g, obtendo um concentrado com 18,36g, atingindo um rendimento de 19,75% m/m, nesse extrato foi submetido a analise espectrais na região do ultravioleta-Visivel, apresentando um comprimento de onda máximo de 237 nm.      4CONCLUSÃO:   O método de extração de folhas de Teca com solução de éter etílico descrito neste trabalho conduziu a melhor extração, quando comparado à extração com água, álcool, hexano e éter ter-butílico à temperatura ambiente. O estudo do extrato hidroalcoólico da espécie Tectona grandis (L.F), levou ao isolamento de 6 concentrados com um grande potencial corante, com solubilidade maior a solventes polares, e apresenta estabilidade a luz visível; e nesses concentrados não encontrou traços da Tectograndone e de lapachol, pigmentos comuns nessa espécie. Estão sendo realizados estudos EMBRAPA AMAZÔNIA ORIENTAL em parceria com o FQ/UFPA, no desenvolvimento de método de isolamento e elucidação estrutural destes principio ativos, que além de fonte de corante natural, serão submetidas a ensaio biológico tais como: fungitóxico, bactericida, alelopáticos, inibidor de protease e antitumorais.      REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS:  1-AGUINALDO,A.M;O CAMPO,O.P.M.;BOWDEN,B.F.;GRAY,A.I. & WATERMAN,P.G.; Tectograndone,an anthraquinome-naphthoquinome pigment from the leaves of Tectona grandis,Phytochemistry,33,(4),933-935,1993.  2-ANGELI,A.Instituto de Pesquisas e Estudos Florestais-internet(2003).disponivel em:http://www.ipet.br/identificação/tectona grandis.html.acessoem 02 de junho de 2005.  3-GUPTA,K.P. & SINGH,P.A. Naphthoquinone Derivative from Tectona grandis(LINN.),Journal of Asian Natural Products Research, September 2004,vol.6 (3),pp 237-240.  4-MOREIRA,R.Y.O.Antraquinonas e naftoquinonas do Caule de um Espécime de Reflorestamento de Tectona grandis(Verbenaceae). Estado do Pará, 2004,47 pág. TCC (Produtos naturais), Centro de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Federal do Pará.  5-RAMESHWAR, J. & SESHADRI,T.R.J.Indian chem.soc.56,940-941,1979  6- SINGH,P.;JAIN,S. & BHARGARA,S.;A 1,4-anthraquinone,derivativefrom Tectona grandis,Phytochemistry,28,(4),1258-1259,1989.  7- ITOKAWA, I.; QIAO, Y. & TAKEYA, K.; Anthraquinones, naphthoquinones and naphthohydroquinones from Rubia oncotrichia, Phytochemistry, 30, (2), 637-640, 1991.  8-Khan, R. M. & Mlungwana, S. M.; 5-Hydroxylapachol: a cytotoxic agent from Tectona grandis, Phytochemistry, 50, 439-442, 1999.  9-RAO, E. V.; SRIDHAR, P; KUMAr ,J. R. & LAKSHMI, T. V.Anthraquinones and arnidiol from Barleria longiflora Linn F. Indian J. Pharm. Sciences., 61 (5), 282-286, 1999.  10-RUDMAN, P. & DA COSTA, E. W. B. Relationship of tectoquinone to durability in Tectona grandis, Nature, 181, 721-722, 1958.    5

Concentrados de metabólitos obtidos das folhas da teca (Tectona grandis (L.f)) para uso como corante.

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