Foram utilizados neste trabalho vinte isolados monopustulares de Puccinia polysora Underw, coletados nas regiões Sul e Sudeste do Brasil, os quais foram caracterizados quanto a agressividade, em um genótipo susceptível de milho (Zea mays L.) em casa-de-vegetação. Plântulas, no estádio de quatro a cinco folhas, foram pulverizadas com suspensões uniformes de uredosporos desses isolados. Foram avaliados o período latente médio, o período infeccioso, a produção de uredosporos, o número total de pústulas, o número de pústulas/cm2, o número de uredosporos/pústula e a possível relação entre agressividade e origem dos isolados. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, com oito repetições para cada tratamento. As análises de variância dos dados obtidos, baseando-se na produção de uredosporos, número total de pústulas, número de pústulas/cm2 e número de uredosporos/pústulas, indicaram diferenças significativas entre os isolados, evidenciando variação na agressividade dos mesmos