O objetivo deste trabalho foi a expressão do gene da proteína capsidíca do ASPV em bactérias e a produção do antissoro policlonal contra a proteína expressada.Resumo

ECKERT, C.

FAJARDO, T. V. M.

NICKEL, O.

VANNI, M. F.

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   Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Embrapa Uva e Vinho Ministério da Agricultura, Pecuária e do Abastecimento    9º Encontro de Iniciação Científica e  5º Encontro de pós-graduandos da Embrapa Uva e Vinho   24 e 25 de novembro de 2011 Embrapa Uva e Vinho Bento Gonçalves, RS   Resumos  Editores César Luís Girardi Henrique Pessoa dos Santos Lucimara Rogéria Antoniolli Luís Fernando Revers Marcos Botton     Bento Gonçalves, RS 2011Exemplares desta publicação podem ser adquiridos na:  Embrapa Uva e Vinho Rua Livramento, 515 95700-000  Bento Gonçalves, RS, Brasil Caixa Postal 130 Fone: (0xx)54 3455-8000 Fax:   (0xx)54 3451-2792 http://www.cnpuv.embrapa.br sac@cnpuv.embrapa.br  Comitê de Publicações  Presidente: Mauro Celso Zanus Secretária-Executiva: Sandra de Souza Sebben Membros: Alexandre Hoffmann, César Luís Girardi, Flávio Bello Fialho, Henrique Pessoa dos Santos, Kátia Midori Hiwatashi, Thor Vinícius Martins Fajardo e Viviane Zanella Bello Fialho  Produção gráfica da capa: Luciana Elena Mendonça Prado  1ª edição 1ª impressão (2011): 200 exemplares  Todos os direitos reservados. A reprodução não-autorizada desta publicação, no todo ou em parte, constitui violação dos direitos autorais (Lei nº 9.610).  Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP) Embrapa Uva e Vinho   Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Uva e Vinho (9. : 2011 : Bento  Gonçalves, RS). Resumos  /  9º Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Uva e Vinho e 5º Encontro de Pós-graduandos da Embrapa Uva e Vinho, Bento Gonçalves, RS, 24 a 25 de novembro de 2011 ; editores-técnicos, César Luis Girardi ... [et al.]  –  Bento Gonçalves : Embrapa Uva e Vinho, 2011.  50 p.  Editores técnicos: César Luis Girardi, Henrique Pessoa dos Santos, Lucimara Rogéria Antoniolli, Luís Fernando Revers e Marcos Botton.  1. Pesquisa. 2. Embrapa Uva e Vinho. 3. Iniciação científica. 4. Ensino superior. 5. Agricultura. I. Girardi, César Luis, ed. II. Encontro de pós-graduandos da Embrapa Uva e Vinho (5. : 2011 : Bento Gonçalves, RS). IV.Título.  CDD 630.72 (21. ed.)                                                                                                 Embrapa 20119º Encontro de Iniciação Científica e 5º Encontro de pós-graduandos da Embrapa Uva e Vinho  41 Expressão de proteína capsídica recombinante do Apple stem pitting virus e produção de antissoro policlonal  Camila Eckert¹, Marcos Fernando Vanni², Osmar Nickel3, Thor Vinícius Martins Fajardo3  Apple stem pitting virus (ASPV) pertence à família Betaflexividae, gênero Foveavirus.  Ele ocorre na maioria das cultivares comerciais de macieiras (Malus spp.) e pereiras (Pyrus spp.) em todo o mundo,  causando perdas de rendimento e danos na qualidade dos frutos. O vírus induz amarelamento das nervuras de folhas da pereira, causa o declínio de porta-enxertos Malus sieboldii e M.sieboldii var. arborescens e caneluras no tronco de cultivares de macieiras suscetíveis, mas é, geralmente, latente em cultivares comerciais de macieiras. O objetivo deste trabalho foi a expressão do gene da proteína capsidíca do ASPV em bactérias e a produção do antissoro policlonal contra a proteína expressada. O gene da proteína capsídica de ASPV (1131 bp) foi previamente amplificado via RT-PCR, a partir de RNA viral extraído de folhas de pereira cv. Abate Fetel. O fragmento amplificado foi clonado no vetor pGEM-T Easy, sequenciado (acesso GenBank número AY572458) e subclonado, em sítio de restrição EcoRI do vetor de expressão pRSET-B. O plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da proteína capsídica em células de E. coli estirpe BL21:DE3. A proteína capsídica (44 kDa), ligada a uma cauda de seis histidinas, de ca. de 3 kDa, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot, utilizando antissoro gentilmente cedido por W. Jelkmann (Julius Kühn Institut, Alemanha). A expressão in vitro da proteína capsidial recombinante apresentou massa molecular esperada de cerca de 47 kDa.  A proteína foi quantificada e utilizada na imunização de um coelho. O antissoro policlonal obtido mostrou-se específico para a detecção de ASPV em extratos de pêra cv. Abate Fetel e de maçã cv. Fuji Select em ensaios de Western blot. Considerando-se a dificuldade de purificação e transmissão mecânica para indicadoras herbáceas, além da baixa concentração do vírus em plantas infectadas, a produção da proteína capsídica recombinante oferece uma alternativa importante para o diagnóstico confiável de ASPV. Acresce que até o momento não há antissoros comerciais de ASPV disponíveis.  ¹Graduanda, Universidade Estadual do Rio Grande do Sul, Rua Benjamin Constant, 229, 95700-000, Bento Gonçalves, Brasil. Bolsista do CNPq, Estagiária da Embrapa Uva e Vinho. camieckert@hotmail.com. ²Assistente, Embrapa Uva e Vinho, C.P. 130, 95700-000 Bento Gonçalves, RS. vanni@cnpuv.embrapa.br 3Pesquisadores, Embrapa Uva e Vinho, C.P. 130, 95700-000 Bento Gonçalves, RS. nickel@cnpuv.embrapa.br; thor@cnpuv.embrapa.br 

Expressão de proteína capsídica recombinante do Apple stem pitting virus e produção de antissoro policlonal.

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