CERVELATTI, E. P.

FERNANDES, F. T.

PACCOLA-MEIRELLES, L.D.

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PRODUÇÃO DE ESTRUTURAS REPRODUTIVAS SEXUADAS EASSEXUADAS DE Phyllosticta sp (f.p. Phaeosphaeria maydis) EMLABORATÓRIO. Eliane Patrícia Cervelatti(1); Luzia Doretto Paccola-Meirelles(2) & FernandoTavares Fernandes(3). (1) - Aluna do curso de mestrado em Genética e Melhoramento daUEL/Embrapa/Iapar, Londrina-PR, (2) - Docente da Universidade Estadual de Londrina (UEL).Depto. de Biologia Gera, Londrina-PR, (3) - Pesquisador da Embrapa Milho e Sorgo, Sete Lagoas-MG.Palavras-chave: Phyllosticta sp,  Phaeosphaeria maydis,  Zea mays,  mancha foliar, estruturasreprodutivasA mancha por phaeosphaeria é uma doença de ocorrência generalizada e de importânciapara a cultura do milho. Apesar de ter sido relatada pela primeira vez no Brasil em 1966, comosendo causada pelo fungo Phyllosticta sp (f.p. Phaeosphaeria maydis) (Fantim, 1994), muitopouco é conhecido sobre a biologia deste agente. Esse trabalho teve como objetivo adequar ascondições de cultivo para a produção de picnídios, exsudação de conídios e produção deascosporos “in vitro”, bem como monitorar, através de microscopia óptica, a formação do picnídionesse fungo. Duas metodologias de inoculação foram utilizadas para a obtenção de picnídios: 1)discos de micélio (tratamentos com e sem a raspagem da colônia no quarto dia de crescimento) e2)  suspensão de conídios (104ml-1). A produção de picnídios e a exsudação de conídios foramavaliadas através de notas de 0 a 4, em três meios de cultura, BDA, Meio Completo dePontecorvo (MC)( Pontecorvo et al., 1953)  e Meio de Extrato de Folhas de Milho (MF), em trêstemperaturas (22º +/- 2º, 25º e 27ºC ), 12h claro / 12h escuro, presença e ausência completa deluz. Embora as duas metodologias de inoculação para produção de picnídios tenham mostradoresultados positivos, a utilização de suspensão de conídios  foi mais eficiente, produzindo grandequantidade de picnídios nos diferentes meios de cultura e temperaturas após sete dias de incubação(Tabelas 1 e 2). A metodologia de inoculação por discos de micélio produziu picnídios somenteapós 32 dias de incubação. Independentemente da temperatura, a exsudação de conídios foi maiorem meio de BDA, na ausência de luz, quando se usou como inóculo suspensão de conídios, comcrescimento em  presença de luz  a 27 oC. A produção de ascosporos foi avaliada  através de notasde 0 a 3, inoculando-se disco micélio de Phaeosphaeria maydis em (MF) e MC, e suspensão deascosporos em MF e BDA e cultivo na temperatura de 22º +/- 2ºC. A produção de ascosporos  foimaior em MF,  nas duas metodologias avaliadas enquanto  que em BDA a produção só ocorreuquando se utilizou suspensão de esporos como inóculo (Tabela 3) (Figura 1).  Não foi observada aprodução de ascosporos  em MC. Para o monitoramento da formação do picnídio, inoculou-sesuspensão de esporos (104ml-1) sobre membrana de diálise em meio BDA; as amostras foramlevadas à câmara de crescimento a 22ºC, e retiradas com 18h, 24h, 30h, 42h e 54h de germinação.As mesmas foram coradas com lactofenol azul para melhor visualização e observadas emmicroscópio óptico. O início do enovelamento hifal para formação do picnídio ocorreu  por voltade 18h após o início da germinação e se completou com 54h.Tabela 1: Avaliação da produção de picnídios (notas de 0 a 4) a partir da inoculação de discos demicélio de Phyllosticta sp., em seis diferentes meios de cultura,  temperaturas 22º (+/-2º), 25º e 27ºC, em presença e ausência de luz, após sete dias de incubação.  SeteLagoas, MG. 1998.Meio de cultura Presença de luz Ausência de luz  22º+/-2 25º 27º   22º+/-2 25º 27ºMeio Completo (1) 0,0 1,5 2,0 0,0 1,0 0,0Meio Completo(R) (2) 1,0 0,0 2,0 0,0 0,0 0,0Meio de extrato folha de  milho 0,0 0,3 0,0 0,0 0,0 0,0Meio de extrato de folha de milho  (R) (3) 0,0 1,5 0,0 0,0 1,0 0,0Meio de BDA 0,3 2,0 0,0 0,3 0,0 0,0Meio de BDA  (R) (4) 2,0 1,5 0,0 2,0 2,0 0,0(1) - Meio Completo de Pontecorvo(2) - Meio Completo de Pontecorvo, colônia raspada após quatro dias de incubação.(3)- Colônia raspada após  quatro dias de incubação(4) - Colônia raspada após quatro  dias de incubação.Tabela 2: Avaliação da produção de picnídios, exsudação de conídios, distribuição de picnídiosno meio de cultura (Individual- I ou em Grumos- G), quantidade de micélio produzidoe tamanho dos picnídios, utilizando-se uma suspensão de esporos (104ml-1), seis meiosde cultura, três temperaturas, na presença e ausência de luz, após sete dias deincubação. Sete Lagoas, MG. 1998.Meio deculturaTemperatura(ºC)Produção depicnídios(0 a 4)Exsudaçãodos conídios(0 a 4)Distribuiçãodos picnídios(I e G)Quantidadede micélio(1 a 3)Tamanho dopicnídio(1 a 3)MC    (P) 1 22 4,0 2,6 I 2,8 1,0MC    (A) 2 22 4,0 3,0 I 2,0 1,0MC    (P) 25 4,0 2,0 I 2,5 1,0MC    (A) 25 4,0 3,0 I 1,0 1,0MC    (P) 27 4,0 2,3 I 2,6 1,0MC    (A) 27 4,0 3,0 I 1,3 1,0BDA  (P) 3 22 4,0 2,0 G 2,0 3,0BDA  (A) 4 22 4,0 4,0 I 1,0 3,0BDA  (P) 25 4,0 2,6 G 2,3 3,0BDA  (A) 25 4,0 4,0 I 1,0 3,0BDA  (P) 27 4,0 4,0 G 2,0 3,0BDA  (A) 27 4,0 4,0 G 1,0 3,0MF    (P) 5 22 4,0 3,0 G 2,0 2,0MF    (A) 6 22 4,0 3,0 I 1,0 2,0MF    (P) 25 4,0 3,0 I 1,6 2,0MF    (A) 25 4,0 3,0 I 1,0 2,0MF    (P) 27 4,0 3,0 G 1,5 2,0MF    (A) 27 4,0 3,0 I 1,0 2,01 MC    (P) = Meio Completo de Pontecorvo; presença de luz.2MC    (A) = Meio Completo de Pontecorvo; ausência de luz.3BDA  (P) = Batata Dextrose Ágar, presença de luz.4BDA  (A) = Batata Dextrose Ágar; ausência de luz.5MF     (P) = Meio de extrato de folhas de milho; presença de luz.6MF     (A) = Meio de extrato de folhas de milho; ausência de luz.Tabela 3: Produção  de ascosporos (notas de 0 a 3 ) a partir da inoculação com discos de micéliode Phaeosphaeria maydis, e suspensão de ascosporos, em três meios de cultura, após20 dias de incubação. Sete Lagoas, MG. 1998.Meio de cultura Suspensão de ascosporos Disco de micélioBatata dextrose agar 2,0 ----Extrato de folha de milho 3,0 3,0Meio completo 1 ----2 0,01- Meio completo de Pontecorvo2- inoculação não realizadaFigura 1: A: Pseudotécios de Phaeosphaeria maydis (f.imp. Phyllosticta sp), produzidos emmeio de extrato de folhas de milho; B: Pseudotécios de Phaeosphaeira maydis(f.imp. Phyllosticta sp) mostrando massa de ascos em seu interior.BibliografiaFantim, G.M. Mancha de Phaeosphaeria, doença do milho que vem aumentando sua importância.Biológico, v.56,  p. 39. 1994.Pontecorvo, G; Roper, J. A; MacDonald, K.D.&Bufton, AW.J. The genetics of Aspergillusnidulans. Adv. Genet., v.5,  p. 141-238. 1953.A B

Produção de estruturas reprodutivas sexuadas e assexuadas de Phyllosticta sp. (f.p. Phaeosphaeria maydis) em laboratório.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/480655/1/Producaoestruturas.pdf

Produção de estruturas reprodutivas sexuadas e assexuadas de Phyllosticta sp. (f.p. Phaeosphaeria maydis) em laboratório.

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