BORGUINI, R. G.

GODOY, R. L. de O.

PACHECO, S.

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COMPARAÇÃO ENTRE COLUNAS CROMATOGRÁFICAS DE DIFERENTESTAMANHOS DE PARTÍCULA NA ANÁLISE DE AFLATOXINAS EM AMENDOIMCOMPARISON OF CROMATOGRAPHIC COLUMNS OF DIFFERENT PARTICLE SIZES INAFLATOXINS ANALYSIS IN PEANUTSRenata Galhardo Borguini1, Ronoel Luiz de Oliveira Godoy1, Sidney Pacheco21Pesquisador – Embrapa Agroindústria de Alimentos.2Analista - Embrapa Agroindústria de Alimentos.IntroduçãoO amendoim é um grão importante para alimentação humana, tanto no consumo innatura, quanto em alimentos processados. No entanto, é um dos cultivos predispostos àcontaminação por aflatoxinas, que pode ocorrer no campo e também durante o transporte earmazenamento do produto (BARRETO et al., 2006). As aflatoxinas são metabólitosfúngicos secundários, que provocam grandes perdas econômicas na cadeia produtivaagrícola, representando, atualmente, risco potencial para o agronegócio brasileiro e parasaúde humana e animal. Dentre as micotoxinas, as aflatoxinas recebem maior atenção,devido à sua propriedade marcadamente hepatocarcinogênica e altamente toxigênica,quando comparada a outros contaminantes (SCUSSEL, 1998).A demanda por análise de micotoxinas em alimentos é crescente, uma vez que amaioria dos países estabeleceu limites legais com o objetivo de restringir a ingestão dessastoxinas. Entretanto, o monitoramento de micotoxinas nos produtos agropecuários dependeda disponibilidade de métodos analíticos sensíveis, eficientes e rápidos. A detecção debaixos níveis de micotoxinas em produtos agrícolas torna-se cada vez mais importante.Vários métodos têm sido publicados com relação à quantificação das micotoxinaspor Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Estes variam, principalmente, quanto aos tiposde solventes utilizados para extração e na fase móvel, colunas para a separação edetectores, dependendo do tipo de amostra e toxina a ser analisada (SCUSSEL, 1998). Oobjetivo deste trabalho foi comparar o desempenho de duas colunas cromatográficas dediferentes tamanhos de partícula da fase estacionária na detecção de aflatoxinas B1, G1, B2e G2 em amendoim. Tais colunas apresentavam diferentes tamanhos e especificidade deuso, sendo uma própria para uso em High Performance Liquid Cromatography (HPLC) eoutra para duas técnicas: HPLC e Ultra Performance Liquid Cromatography (UPLC).Material e métodosAmostras de 25g de amendoim in natura naturalmente contaminadas por aflatoxinas(conforme análise prévia realizada no Laboratório de Micotoxinas da ESALQ/USP, quedisponibilizou a amostra) foram extraídas com 100 mL de acetonitrila:água (84:16 v/v) emshaker Marconi® por 30 minutos. Após filtração, os extratos foram purificados em colunaMycosep®. A detecção foi realizada em HPLC acoplado ao detector de fluorescência emcomprimento de onda 364 nm de excitação e 440 nm de emissão, com derivatização pós-coluna utilizando-se uma célula eletroquímica denominada Kobra cell®. A quantificação foirealizada por padronização externa, com base em curva de calibração de 8 pontos. Asseguintes colunas cromatográficas foram utilizadas para a separação das aflatoxinas:Coluna A: C18, 250 mm x 4,6 mm; partícula de 5,0 µ (XBridge® da marca Waters).Coluna B: C18, 100 mm x 4,6 mm; partícula de 2,4 µ (BDS Hypersil da marca ThermoScientific).As condições cromatográficas comuns para ambas as colunas testadas foram: fasemóvel composta de acetonitrila, metanol e água ultra-pura 15:20:65 (v/v/v) eluindo em modoisocrático. As colunas foram mantidas em forno a 40°C. Os parâmetros que variaram paraas duas colunas foram:a) coluna A: fluxo de 0,8 mL/minutos, volume de injeção 40 µL e tempo de corrida de 25minutos;b) coluna B: fluxo de 1,1 mL/minutos, volume de injeção 5 µL e tempo de corrida de 10minutos.Resultados e discussãoCom base na comparação dos cromatogramas (Figura 1) obtidos a partir dasanálises pelas colunas A e B, pode-se observar que o tempo de retenção dos 4 picosdiminuiu 10 minutos, em média. A diminuição do tempo de corrida, de 25 minutos na colunaA para 10 minutos na coluna B, resultou na redução de 55% do volume de fase móvelutilizada para cada corrida. Pode-se verificar ainda a qualidade cromatrográfica compatívelobtida por meio de ambas as colunas.Figura 1. Cromatogramas de análise de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em amendoim por CLAEem diferentes colunas (A = 5,0 µ e B = 2,4 µ).Considerando-se a quantificação das aflatoxinas por meio da análise das amostrasde amendoim naturalmente contaminadas, os níveis de aflatoxinas totais foram muitopróximos, de 16,74 e 16,42 µg/kg obtidas pelas colunas A e B, respectivamente (Tabela 1).Tabela 1. Níveis de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 (expressos e µg/kg) em amostra deamendoim analisado nas colunas A e B.A transição da técnica de HPLC para UPLC é uma tendência na área analítica.Conforme os resultados obtidos nesse trabalho, o uso de colunas de partículas menores 3 µ,destinadas a ambas as técnicas, resultou em economia de tempo e de reagentes, o quesignifica otimização do trabalho do analista e redução de custos e de uso de recursosambientais para a produção de insumos, além de diminuir o descarte de resíduos geradosna análise.Referências BibliográficasBARRETO, A. N.; VALE, D. G.; FERREIRA, D. S.; ALBUQUERQUE, F. A.; ALVES I.; SILVA,J. C. A.; OLIVEIRA, J. M. C.; SOUSA, M. F.; SUASSUNA, N. D.; SILVA, O. R. R. F.;PEREIRA, R. M. P. G.; FREIRE, R. M. M.; SANTOS, R. C.; SUASSUNA, T. M. F.; GONDIM,T. M. S.; CARTAXO, W. V.; COUTINHO, W. M. Cultivo do Amendoim. Sistemas deProdução n° 7. Embrapa Algodão, 2006.SCUSSEL, V.M. Micotoxinas em alimentos. Florianópolis: Insular, 1998. 144 p.Autor a ser contactado: Renata Galhardo Borguini, Embrapa Agroindústria de Alimentos, Rio de Janeiro/RJ – e-mail: renata@ctaa.embrapa.br

Comparação entre colunas cromatográficas de diferentes tamanhos de partícula na análise de aflatoxinas em amendoim.

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Comparação entre colunas cromatográficas de diferentes tamanhos de partícula na análise de aflatoxinas em amendoim.

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