RESUMO – Bactérias do gênero Pseudomonas spp. pertencentes ao grupo fluorescente têm sido mencionadas como eficazes no controle de patógenos que atacam o sistema radicular de plantas. Desse modo, este trabalho se propôs a identificar isolados de Pseudomonas spp. fluorescentes sintetizadores de 2,4-diacetilfloroglucinol (2,4- DAPG), um antibiótico que apresenta atividade contra diversos patógenos radiculares de plantas, além de avaliar a diversidade genética desse gênero de bactérias utilizando a técnica de PCR-RFLP 16S RNAr. Pela técnica de PCR foi amplificado um fragmento do gene phlD, envolvido na síntese do 2,4-DAPG. Para o PCR-RFLP, o gene ribossomal 16S foi amplificado e o produto do PCR foi digerido com a enzima de restrição AluI. De um total de 1.274 isolados analisados, seis apresentaram o gene phlD, revelando que a incidência de Pseudomonas spp. produtoras de 2,4-DAPG é baixa nos solos do Paraná. A análise da diversidade genética, realizada em 50 isolados pela comparação dos padrões de restrição do gene 16S RNAr, revelou que bactérias isoladas de diferentes culturas vegetais apresentam elevada diversidade genética, sendo identificados 11 genótipos distintos