COSTA, W. A.

MARRIEL, I. E.

OLIVEIRA, A. C.

PAIVA, E.

SELDIN, L.

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Influência de Paenibacillus Azotofixans Sobre a Morfologia eCrescimento do Sistema Radicular do Milho (Zea mays L.), emSubstrato Hidropônico._____________________________________________________________________________XXIV Congresso Nacional de Milho e Sorgo - 01 a 05 de setembro de 2002 - Florianópolis - SC_____________________________________________________________________________IVANILDO E. MARRIEL1; WANESSA A. COSTA 1; ANTÔNIO C. de OLIVEIRA1;EDILSON PAIVA1, LUCY SELDIN, L. 21Embrapa Milho e Sorgo, CP 151, 35700-970, Sete Lagoas, MGe-mail: imarriel@cnpms.embrapa.br3 UFRJ, Depto de Genética Microbiana, Ilha do Fundão, RJPalavras-chave: bactéria diazotrófica, inoculação, fixação biológica, gramínea.INTRODUÇÃOOs sistemas agrícolas sustentáveis dependem de alternativas inovadoras de manejo que otimizem a eficiência da utilização de nutrientes pelas culturas. Para o caso do nitrogênio, que responde por parcela significativa do custo da produção de cereais, além de seus impactos negativos sobre o ambiente, a exploração de associações biológicas que contribuam com parte desse nutriente, para a nutrição adequada da cultura do milho, torna-se importante do ponto de vista ecológico e econômico. Inúmeras pesquisas, conduzidas sob variadas condições edafoclimáticas, relatam ganhos em produção de massa seca e de grãos em cereais, inclusive milho, inoculados com bactérias diazotróficas associativas (Bashan & Levanony, 1990; Okon & Labandera-Gonzales; Dobbelaere et al., 2001). Em geral, os benefícios da inoculação com essas bactérias envolvem mecanismos múltiplos, incluindo a contribuição da fixação biológica e alteração do sistema radicular, dentre outros (Garcia de Salomone et al., 1996; Okon & Kapulnik, 1986).Paenibacillus azotofixans são bactérias fixadoras de nitrogênio encontradas em alta diversidade genética na rizosfera de milho (Seldin et alli., 1998), cuja interação bactéria-planta ainda é pouco estudada. Neste trabalho, procurou-se avaliar o impacto da inoculação com uma mistura estirpes de P. azotofixans, isoladas de milho, sobre o sistema radicular de diferentes genótipos de milho.MATERIAL E MÉTODOSUtilizou-se como inóculo uma suspensão de células obtida da mistura das estirpes CRIP15, CRIP125 e CRIP165 de P. azotofixans da coleção do Depto de Genética Microbiana - UFRJ. As estirpes foram crescidas em meio TBN líquido e ajustada para uma concentração final de 107 UFC mL-1. No bioensaio 1, as plântulas de duas linhagens de milho crescidas em ágar-água, placas de petri, foram avaliadas aos quatro dias após o início da germinação das sementes. No bioensaio 2, as plântulas de duas linhagens de milho crescidas em 50 mL de solução nutritiva, em tubos de vidro, foram avaliadas aos seis dias após a germinação. No bioensaio 3, as plântulas de seis linhagens de milho, crescidas em nove litros de solução nutritiva, com dois níveis de N (10 e 100 mg L-1 ), em bandejas de plástico, foram avaliadas aos 14 dias após a germinação. Nos três casos, as plântulas foram crescidas na presença e ausência da bactéria. Para as estimativas de área e do comprimento radicular, as raízes foram coradas com cristal violeta, digitalizadas e analisadas, utilizando-se um software para análise de imagens (     ).RESULTADOS E DISCUSSÃOAs linhagens utilizadas nesse estudo, quando cultivadas no campo em solo com baixa disponibilidade de N, apresentaram comportamento diferencial em relação à eficiência no uso de N, produção de grãos por unidade de N aplicado (Marriel et al., 2000). Os mecanismos envolvidos nesse processo não estão ainda bem entendidos. Os resultados mostraram que, nas avaliações efetuadas aos quatro (dados não mostrados) e seis dias após a germinação, a massa e morfologia radicular das plantas não foram afetadas significativamente pela inoculação com Paenibacillus azotofixan (Tabela 1), embora tenha sido observados acréscimos de 20,70% e 26,1% para área e comprimento de raízes, respectivamente, em relação às plantas não-inoculadas. Nessas duas épocas, houve influência significativa do genótipo em relação ao comprimento radicular. Tabela 1. Massa seca, área e comprimento radicular de duas linhagens de milho com e sem inoculação com P. azotofixans e cultivadas em substrato hidropônico, aos seis dias após a germinação. Valores médios de 5 plantas.Médias seguidas das mesmas letras maiúsculas (colunas ) e minúsculas (linhas) não diferem entre si pelo teste de Tukey ( P>0,05).Aos 14 dias após a germinação, os fatores estudados, inoculação, nitrogênio e genótipo afetaram significativamente (P<0,05) e de forma independente a massa seca das raízes (Tabelas 2 e 3). Ao contrário da redução observada para o efeito de N, observou-se acréscimo da massa seca das raízes nas plantas inoculadas, independente do suprimento de N e do genótipo. Observou-se também efeito positivo e significativo da inoculação (P<0,05) sobre a relação massa seca da raiz/massa seca da parte aérea das plantas, na condição de baixo suprimento de N. Os aumentos observados no sistema radicular das plantas inoculadas sugerem a produção de metabólitos  por essas estirpes de bactérias, com atividade de fito-hormônios, alterando as características morfológicas e o crescimento de raízes de plantas de milho cultivadas sob condições controladas. Em diferentes pesquisas, aumentos em crescimento e produção de plantas não – leguminosas, na presença de batérias diazotróficas associativas, têm sido atribuídos ao aumento do sistema radicular e, consequentemente, maior absorção de nutrientes e de água pelas plantas (Okon & Kapulnik, 1986). De acordo com os dados obtidos, independente da idade das plantas e do tratamento de inoculação, observaram-se efeitos significativos de genótipos (P<0,05) sobre as variáveis estudadas.Tabela 2. Massa seca de raízes das plantas de seis linhagens de milho, com e sem inoculação com P.azotofixans,  crescidas em substrato hidropônico com dois níveis de N, aos 14 dias após a germinação. Valores médios de três repetiçõesMédias seguidas das mesmas letras maiúsculas (colunas ) e minúsculas (linhas) não diferem entre si pelo teste de Tukey ( P>0,05).Tabela 3. Relação entre a massa seca de raízes e da parte aérea das plantas de seis linhagens de milho, com e sem inoculação com P. azotofixans,  crescidas em substrato hidropônico com dois níveis de N, aos 14 dias após a germinação. Valores médios de três repetiçõesMédias seguidas das mesmas letras maiúsculas (colunas ) e minúsculas (linhas) não diferem entre si pelo teste de Tukey ( P>0,05). CONCLUSÕESA inoculação com Paenibacullus azotofixans e o genótipo influenciaram a morfologia e o crescimento radicular de milho cultivadas em solução nutritiva, sendo os efeitos da bactéria dependente da idade da planta.LITERATURA CITADABASHAN, Y ; LEVANONY, H.  Current status of Azospirillum inoculation technology: Azospirillum as a challenge for agriculture1. Canadian Journal of Microbiology, v.36, p.591-605, 1990.DOBBELAERE, S., et al..  Responses of Agronomically important crops to inoculation with Azospirillum. Australian Journal of Plant Physiology, 28,871-879 (2001).GARCIA DE SALOMONE, I. E.; DOBEREINER , J.; URGUIAGA, S.; BODDEY, R. M. Biological nitrogen fixation in Azospirillum strain-maize genotype associations as evaluated by the 15N isotope diluition technique. Plant and Soil, 23 (3):249-256. 1996.KAPULNIK, Y.; OKON, Y.;HEIS, Y.  Changes in root morphology caused by Azospirillum inoculation. Canadian journal of Microbiology, v.31, p.881-887. 1985.LIN, W.; OKON, Y.; HARDY, R.W.  Enhanced mineral uptake by Zea mays and Sorghum bicolor roots inoculated with Azospirillum brasilense.  Applied Environment Microbiology. v.45, p.1775-1779, 1983.MARRIEL, I.E.; ALVES, V.M.; VASCONCELLOS; C.A.; FRANÇA, G.E.; GOMES E GAMA, E.E.G.; SANTOS, M.X. E OLIVEIRA, A.C. Variabilidade e Potencial Produtivo de Linhagens da População CMS 28 sob Estresse de Nitrogênio In: CONGRESSO BRASILEIRO DE MILHO E SORGO, 23, 2000, Uberlândia, MG, Resumos... Uberlândia: CNPMS, SBMS, 2000. p 80..OKON, Y & LABANDERA-GONZOLEZ, C. A.  Agronomic aplications of Azospirillum: Evaluation of 20 years worlwide field inoculation. Soil Biology Biochemstry, v.26, p.1591-1601, 1994. OKON, Y.; KAPULNIK, Y.  Development and function of Azospirillum-inoculated roots. Plant and Soil, v.90, p.3-18, 1986. SELDIN, L., ROSADO, A.S., CRUZ, D.W., NOBREGA, A.,VAN ELSAS, J.D. & PAIVA, E. 1998. .Comparison of Paenibacillus azotofixans strains isolated from rhizoplane, rhizosphere and non-root-associated soil from maize planted in two different brazilian soils. Appl. Environ. Microbiol. 64: 3860-3868. _____________________________________________________________________________XXIV Congresso Nacional de Milho e Sorgo - 01 a 05 de setembro de 2002 - Florianópolis - SC_____________________________________________________________________________

Influência de Paenibacillus azotofixans sobre a morfologia e crescimento do sistema radicular do milho (Zea mays L.), em substrato hidropônico.

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