CUNHA, C. P. da

GODOY, R. L. de O.

PACHECO, S.

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Ensaio comparativo para extração de carotenóides.

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Anais da XX Jornada de Iniciação Científica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro CD-ROM, 2010. ISSN 1809-1342. Ensaio comparativo para extração de carotenóides  Carolina Passos da Cunha1; Sidney Pacheco2 &  Ronoel Luiz de Oliveira Godoy2  1. Discente do curso de Química Industrial da UFRRJ; 2. EMBRAPA Agroindústria de Alimentos.  Palavras-chave: CLAE, espectrofotometria, pigmentos.  Introdução  Os carotenóides pertencem a uma família de mais de 600 pigmentos lipossolúveis abundantes na natureza (KRINSKY & JOHNSON, 2005). São de grande importância nutricional por serem precursores da vitamina A, cuja carência está associada à cegueira noturna, morte prematura de crianças e xeroftalmia. O interesse por estes pigmentos tem aumentado muito nos últimos anos devido à de sua atividade antioxidante, reduzindo o risco do desenvolvimento de doenças degenerativas como o câncer, doenças cardiovasculares e formação de cataratas (KRINSKY, 1994; RIBEIRO & SERAVALLI, 2004). A exigência por métodos de extração e quantificação destes compostos mais rápidos, econômicos e eficientes é crescente, portanto o objetivo deste trabalho é a comparação do método de extração convencional de carotenóides (RODRIGUEZ-AMAYA, 2001) que demanda grande consumo de solventes e tempo de extração, com a microextração, onde estes fatores são reduzidos, utilizando duas matrizes diferentes, cenoura e farinha de batata doce de polpa alaranjada e posterior análise por espectrofotometria e pelo método de cromatografia líquida otimizado e validado com redução no tempo de corrida por PACHECO (2009).   Material e métodos  Extração convencional: Foram pesados 0,5g de amostra para extração da farinha de batata doce de polpa alaranjada e 2g para extração da cenoura, macerados em graal de porcelana com 3g de celite e 50mL de acetona utilizando pistilo,  a mistura foi filtrada a vácuo em funil de vidro com placa sinterizada, até que a matriz não apresentasse coloração característica de carotenóides. O extrato líquido foi transferido para funil de separação contendo 50mL de éter de petróleo. A mistura foi então lentamente lavada com 1500mL de água ultrapura. O extrato etéreo foi filtrado em sulfato de sódio anidro, e recolhido em balão volumétrico de 100mL e avolumado com éter de petróleo. A absorvância da solução foi lida em Espectrofotômetro Modelo UV-1800 – Shimadzu®, para o cálculo de carotenóides totais. Foi evaporado 1mL da solução e ressuspendido com 100µL de acetona para obtenção do perfil cromatográfico e a quantificação de β-caroteno, α-caroteno e luteína.  Microextração: Foram pesados 10mg de amostra para extração da farinha de batata doce de polpa alaranjada e 100mg para extração da cenoura, macerados em  tubo para microcentrífuga (eppendorf) de 2mL  com 100mg de celite e 500µL de acetona utilizando bastão de vidro, a mistura foi centrifugada a 8000 rpm por 1 minuto e o sobrenadante transferido para bureta de 25mL contendo de 5 a 10mL de solução 5% de éter etílico em éter de petróleo até que a matriz não apresentasse coloração característica de carotenóides. O extrato foi então lentamente lavado com 60mL de solução aquosa 5% de NaCl e o volume final do extrato etéreo lido na bureta. Foram adicionados 10mg de sulfato de sódio anidro ao extrato. A absorvância da solução foi lida em Espectrofotômetro Modelo UV-1800 – Shimadzu®, para o cálculo de carotenóides totais. Foi evaporado 1mL da solução e ressuspendido com 100µL de acetona para obtenção do perfil cromatográfico e a quantificação de β-caroteno, α-caroteno e luteína.  Condições cromatográficas: A análise cromatográfica baseia-se na metodologia validada por PACHECO (2009). Foi utilizado cromatógrafo líquido modular Waters composto por bomba 600, com degaseificador, injetor automático 717 plus e detector de arranjo de fotodiodos 996. Coluna YMC C30 Carotenoid (250 x 4,6mm x 3µm), a 33ºC, com eluição em gradiente de éter metil terc-butilico:metanol, fluxo 0,8mL/min, volume de injeção de 15µL e o tempo total de analise de 28 minutos.  Anais da XX Jornada de Iniciação Científica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro CD-ROM, 2010. ISSN 1809-1342. Resultados e Discussão  As análises foram realizadas em triplicata utilizando o método convencional e o método da microextração. Os resultados foram submetidos ao Teste Grubbs para exclusão de valores aberrantes. Os resultados dos ensaios estão listados na Tabela 1.  Tabela 1. Teor de carotenóides (µg/100g) em cenoura e farinha de batata doce de polpa alaranjada.  Matriz Extração β-caroteno α-caroteno Luteína Totais CV (%) Microextração 11620 5162 246 17097 1,37 Cenoura Convencional 9764 4343 200 14395 0,98 Microextração 102739 8582 - 125090 3,48 Farinha de Batata Doce Convencional 91040 7227 - 108871 2,81  Verificou-se que os teores de carotenóides totais foram de 15 a 16% maiores nos resultados obtidos utilizando a microextração nas duas matrizes, portanto esta apresentou-se mais eficiente que a convencional. O coeficiente de variação apresentado pelo método da microextração foi maior que o da convencional, porém esta diferença não é significativa e é conseqüência da alíquota de amostra pesada ser menor para a microextração. O tempo requerido para a microextração foi de 30 minutos por extração e para a extração convencional foi de 50 minutos por extração, portanto houve uma redução 40 % do tempo de análise e 92 % em volume de solvente. O perfil cromatográfico manteve-se semelhante utilizando ambas extrações (Figura 1).  Figura 1. Cromatograma de extrato de cenoura da extração convencional (A) e microextração (B).   Conclusão  A microextração de carotenóides mostrou-se mais eficiente que a convencional e economicamente mais viável, devido a redução de gastos com solventes e tempo de extração, ideal para laboratórios analíticos que utilizem a análise rotineiramente. No entanto são necessários estudos mais profundos e validação da metodologia.  Referências Bibliográficas  KRINSKY, N.I. The biological properties of carotenoids. Pure & Appl. Chem. v. 66, p. 1003-1010,1994.  KRINSKY , N. I. & JOHNSON, E. J. Carotenoid actions and their relation to health and disease. Molecular Aspects of Medicine, v. 26, p. 459-516, 2005.  PACHECO, S. Preparo de padrões analíticos, estudo de estabilidade e parâmetros de validação para ensaio de carotenóides por cromatografia líquida. Seropédica, RJ, 2009. 117 p. Dissertação (Mestrado em Ciências-Ciência e Tecnologia de Alimentos) – Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro.  RIBEIRO, E.P. & SERAVALLI, E. A. G.. Química de Alimentos. 1. ed. São Paulo: Editora Edgard Blücher Ltda, 2004, p 155-157.  RODRIGUEZ-AMAYA, D. B. A Guide to Carotenoid Analysis in Foods, 2001. 64 p.  1- Luteína 2-α-caroteno 3-β-caroteno  1 2 3 0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25 1- Luteína 2-α-caroteno 3-β-caroteno 1 2 3 A B

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