BETTIOL NETO, J. E.

CHAGAS, E. A.

CHAGAS, P. C.

COSTA, F. C.

MARO, L. A. C.

PASQUAL, M.

PIO, R.

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COMPOSIÇÃO DO MEIO DE CULTURA E CONDIÇÕES AMBIENTAIS PARA GERMINAÇÃO DE GRÃOS DE PÓLEN DE PORTA-ENXERTOS DE PEREIRA  Luana Aparecida Castilho Maro1, Edvan Alves Chagas2, Rafael Pio1, Pollyana Cardoso Chagas1, Moacir Pasqual1, José Emílio Bettiol Neto3, Fernanda Carvalho Costa1  1Universidade Federal de Lavras (UFLA) luana_maro@yahoo.com.br rafaelpio@dag.ufla.br pc.chagas.love@hotmail.com mpasqual@dag.ufla.br fecostapur@yahoo.com.br; 2Empresa de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA Roraima) echagas@cpafrr.embrapa.br; 3Instituto Agronômico (IAC, Centro de Frutas) bettiolneto@iac.sp.gov.br  Introdução Embora seja uma frutífera que necessita altas quantidades de frio hibernal, a pêra pode ser explorada em regiões de clima ameno em função da existência de espécies e híbridos adaptados. No entanto, verifica-se carência de porta-enxertos rústicos, totalmente testados e recomendados às condições climáticas brasileiras, ficando a mercê de somente dois porta-enxertos ‘Taiwan Nashi-C’ (Pyrus calleryana) e ‘Taiwan Mamenashi’ (Pyrus betulaefolia) (BARBOSA et al., 1998).  A técnica mais utilizada na obtenção de novos cultivares é a hibridação controlada no campo e posterior avaliação das progênies. Segundo BOLAT & PIRLAK (1999) existem uma relação entre a porcentagem de germinação e viabilidade do pólen. Vários fatores interferem na germinação in vitro e informações sobre viabilidade e desenvolvimento de grãos de pólen desses porta-enxertos de pereira são fundamentais para trabalhos de biologia reprodutiva e melhoramento genético, pois permitem obter maior sucesso nos cruzamentos controlados.  O objetivo deste trabalho foi ajustar os componentes básicos do meio de cultura e condições ambientais para a realização de testes de germinação in vitro e viabilidade de grãos de pólen dos porta-enxertos de pereira ‘Taiwan Nashi-C’ e ‘Taiwan Mamenashi’.  Material e Métodos               O pólen utilizado foi obtido de anteras provenientes de flores em estádio de balão. Em seguida, com auxílio de um pincel nº.2, os grãos de pólen foram espalhados sobre a superfície de placas de Petri, contendo 20 ml de meio de cultura de acordo com os seguintes experimentos: 1) concentrações de sacarose (0, 30, 60 e 90 g.L-1) e agar (4, 6, 8 e 10 g.L-1); 2) concentrações de nitrato de cálcio (0, 200, 400 e 800 mg.L-1) e ácido bórico (0, 400, 800 e 1200 mg.L-1); 3) valores de pH (4,0; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0 e 6,5); 4) temperaturas (20; 25; 30 e 35) e; 5) tempo de emissão do tubo polínico (1, 2, 3, 4, 5, 6 e 12 horas após a inoculação). As culturas foram mantidas a 27oC e fotoperíodo de 24 horas, exceção para o experimento de diferentes temperaturas. Com auxílio de lupa binocular com objetiva de 10 vezes, avaliou-se a porcentagem de grãos de pólen germinados, após 24 horas de incubação, exceção do experimento cinco (tempo de emissão do tubo polínico), que foi avaliado em intervalos pré-estabelecidos.  O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado e com quatro repetições. Os dados foram submetidos à análise de variância, as médias comparadas pelo teste de Tukey à 5% de probabilidade e os dados quantitativos submetidos a regressão.   Resultados e Discussão Para ‘Taiwan Mamenashi’, houve um aumento linear na % de germinação dos grãos de pólen à medida que se elevou a concentração de ágar (Fig.1A) e sacarose (Fig.1B). Efeitos semelhantes são observados na germinação dos grãos de pólen do ‘Taiwan Nashi-C’ quando submetidos às concentrações de ágar (Fig.1C). Porém, nas diferentes concentrações de sacarose, verificou-se um incremento do porcentual de germinação até 47,78 g.L-1 (Fig.1D). Possivelmente essa diferença de concentração pode ser explicada por se tratar de genótipos diferentes.                 Figura 1 – Porcentagem de grãos de pólen germinados in vitro do porta-enxerto ‘Taiwan Mamenashi’ (1A e 1B) ‘Taiwan Nashi-C’ (1C e 1D) quando submetidas à diferentes concentrações de agar e sacarose. Centro APTA Frutas/IAC, Jundiaí, SP, 2008.      y = 0,9485x + 7,878 R2 = 0,71051015204 6 8 10Concentrações de Agar (g.L-1)Germinação (%)Taiw an MamenashiLinear (Taiw anMamenashi)y = 0,1302x + 8,657 R2 = 0,9105101520250 30 60 90Concentrações de Sacarose (g.L-1)Germinação (%)Taiw an MamenashiC D y = 1,657x + 5,006  R2 = 0,8305101520254 6 8 10Concentrações de Agar (g.L-1)Germinação (%)Taiw an NashiLinear (Taiw anNashi)y = -0,0023x2 + 0,2198x + 13,803 R2 = 0,8605101520250 30 60 90Concentrações de Sacarose (g.L-1)Germinação (%)Taiw an NashiPolinômio(Taiw an Nashi)A B Observou-se que, tanto para ‘Taiwan Mamenashi’ (Fig. 2A) como ‘Taiwan Nashi-C’ (Fig. 2B), os melhores resultados para a % de grãos de pólen germinados foram obtidos quando se utilizou entre 795 e 838 mg.L-1 de ácido bórico, na ausência de nitrato de cálcio.          Figura 2 – Porcentagem de germinação in vitro de grãos de pólen de porta-enxertos de pereira ‘Taiwan Mamenashi’ (2A) e ‘Taiwan Nashi-C’ (2B) quando submetidas a diferentes concentrações de nitrato de cálcio e ácido bórico. Centro APTA Frutas/IAC, Jundiaí, SP, 2008.  A adição de nitrato de cálcio não foi essencial para a germinação de in vitro de grãos de pólen. Entretanto, verificou-se a essencialidade do ácido bórico. Esse resultado corrobora com os trabalhos que constataram a necessidade de adição de uma fonte de boro para o sucesso na germinação de grãos de pólen de pereira (ZHANG et al., 2005). Observa-se que o ajuste ideal de pH do meio de cultura situou-se entre 5,2 e 5,8 para os dois cultivares testadas (Fig. 3A). Tais resultados estão de acordo com RAMOS et al (2008), o qual observou que a melhor taxa de germinação de grãos de pólen de citros ocorre com pH entre 5,0 e 6,5.  O aumento da temperatura para os dois cultivares favoreceu a germinação dos grãos de pólen até o valor próximo de 28ºC. A partir dessa temperatura, observa-se um decréscimo na porcentagem de polens germinados (Fig. 3B).            Figura 3 – Porcentagem de germinação in vitro de grãos de pólen germinados de pereiras ‘Taiwan Mamenashi’ e ‘Taiwan Nashi-C’ quando submetidos a diferentes valores de pH (3A) e temperatura (3B). Centro APTA Frutas/IAC, Jundiaí, SP, 2008.   Y0Ca(NO3)2= -3E-05x2 + 0,0477x + 2,8616 R2 = 0,62Y200Ca(NO3)2 = -9E-06x2 + 0,0121x + 0,6743 R2 = 0,51Y400Ca(NO3)2= -4E-06x2 + 0,0039x + 0,9555 R2 = 0,55Y400Ca(NO3)2= -5E-06x2 + 0,0061x + 0,1298 R2 = 0,880510152025300 400 800 1200Concentração Ácido Bórico (mg.L-1)Germinação (%)0 200 400 800Y0Ca(NO3)2 = -3E-05x2 + 0,0503x + 25,573 R2 = 0,90Y200Ca(NO3)2 = -4E-05x2 + 0,0572x + 2,2176 R2 = 0,79Y400Ca(NO3)2 = -1E-05x2 + 0,0158x + 3,1183 R2 = 0,62Y800Ca(NO3)2 = -0,0018x + 1,959 R2 = 0,97-10010203040500 400 800 1200Concnetração de Ácido Bórico (mg.L-1)Germinação (%)0 200 400 800B A  yT. Mamenashi = -9,6607x2 + 100,75x - 207,96 R2 = 0,80yT. Nashi-C = -6,9607x2 + 81,528x - 195,87 R2 = 0,620102030405060704 4,5 5 5,5 6 6,5Valores de pHGerminação (%)Taiw an Mamenashi Taiw an Nashi-C YT. Mamenashi = -0,17x2 + 9,6387x - 113,94 R2 = 1YT. Nashi-C = -0,105x2 + 5,9064x - 62,969 R2 = 0,946051015202520 25 30 35Temperaturas (ºC)Germinação (%)Taiw an Mamenashi Taiw an Nashi-CA B             Conclusões A utilização de 10 g.L-1 de agar combinada com 90 g.L-1 de sacarose para o porta-enxerto ‘Taiwan Mamenashi’ e 47,78 g.L-1 para ‘Taiwan Nashi-C’, adicionados de 795 a 838 mg.L-1 de ácido bórico, na ausência de nitrato de cálcio, pH entre 5,2 e 5,8 e temperatura de 28ºC, proporcionam as melhores condições de germinação de grãos de grãos. A porcentagem máxima de polens germinados é obtida com oito horas após a inoculação para ‘Taiwan Nashi-C’ e com doze horas para ‘Taiwan Mamenashi’.  Referências BARBOSA, W. et al.. Formação rápida de mudas vigorosas de pêra com porta-enxerto oriental. O Agronômico, v.47, n.1, p.28-31, 1998. BOLAT, Y.; PIRLAK, L. An investigation on pollen viability, germination and tube growth in some stone fruits. Tukish Journal of Agriculture Forestry, v.23, p.383-388, 1999. RAMOS, J.D. et al. Receptividade do estigma e ajuste de protocolo para germinacão  in vitro de grãos de pólen de citros. Interciência, v.33, n.1, p.51-55, 2008.  ZHANG, S.L. et al. Effects of medium components and pH on pollen germination and tube growth in pear (Pyrus pyrifolia). Xibei Zhiwu Xuebao, v.25, n.2, p.225-230, 2005.  YT. Mamenashi = 2,7035x + 15,579 R2 = 0,61YT. Nashi-C = -0,4635x2 + 7,8481x + 7,9746 R2 = 0,8301020304050600 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12Tempo de emissão do tubo polínico (horas)Germinação (%)Taiw an Mamenashi Taiw an Nashi-CPara o ‘Taiwan Mamenashi’, houve aumento linear na porcentagem de grãos de pólen que emitiram tubo polínico até as 12 horas de avaliação. Entretanto, para o ‘Taiwan Nashi-C’, a porcentagem máxima de germinação (41,2%) foi obtida após 8 horas e 45 minutos. Em seguida, houve uma estabilização na porcentagem de grãos de pólen germinados (Fig. 5).   Figura 5 – Porcentagem de grãos de pólen germinados de pereira ‘Taiwan Mamenashi’ e ‘Taiwan Nashi-C’ avaliados durante o período de 12 horas após a inoculação. Centro APTA Frutas/IAC, Jundiaí, SP, 2008.   

Composição do meio de cultura e condições ambientais para germinação de grãos de pólen de porta-enxertos de pereira.

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