Objetivou-se otimizar a reação de amplificação e selecionar primers RAPD (Random Amplified Polimorfic DNA) para análises de variabilidade genética em 10 acessos de angico de bezerro que compõem o Banco Ativo de Germoplasma de Forrageiras Nativas da Embrapa Meio-Norte

DANTAS, I. M. S.

LIMA, P. S. da C.

MENDES, R. F. de M.

NASCIMENTO, M. P. S. C. B. do

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal

Otimização e seleção de Primers RAPD para caracterização molecular de acessos de Angico de Bezerro (Piptadenia moniliformis Benth.).

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OTIMIZAÇÃO E SELEÇÃO DE PRIMERS RAPD PARA CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE ACESSOS DE ANGICO DE BEZERRO (Piptadenia moniliformis Benth.) Ionne Martins Soares Dantas1; Raul Ferreira de Miranda Mendes 2; Maria Perpetuo Socorro Cortez  Bona do Nascimento3 ; Paulo Sarmanho da Costa Lima3 1 Faculdade de Saúde, Ciências Humanas e Tecnológicas do Piauí – NOVAFAPI; ionnezinha@hotmail.com2 ; Universidade Estadual do Piauí – UESPI;  raul-mendes@hotmail.com 3Embrapa Meio Norte – msbn13@yahoo.com.br; sarmanho@cpamn.embrapa.com.br    Palavras – chave: Reação, PCR, marcadores,polimorfismo  O angico-de-bezerro (Piptadenia moniliformis Benth) é uma espécie de Papilionoideae (Leguminosae) adaptada a terrenos secos, de elevada dispersão no Nordeste brasileiro e de notável valor por seu potencial forrageiro, apícola e madeireiro, além de fixadora de nitrogênio atmosférico.  Entretanto, são poucos os conhecimentos quanto à caracterização dessa espécie. Objetivou-se otimizar a reação de amplificação e selecionar primers RAPD (Random Amplified Polimorfic DNA) para análises de variabilidade genética em 10 acessos de angico de bezerro que compõem o Banco Ativo de Germoplasma de Forrageiras Nativas da Embrapa Meio-Norte. Na otimização foram testados quatro concentrações de MgCl2 (1,5mM, 2,0mM, 2,5mM e 3,0mM) e duas concentrações de Tampão ( 1,1X e 1,2X ). As reações foram realizadas com duas etapas de desnaturação, sendo a primeira de 1 min a 92°C,seguida de 45 ciclos de 40 seg a 92°C para desnaturação, 1 min a 34°C para anelamento, 2 min a 72°C e uma extensão final de 5 min a 72°C, em um Termociclador Applied Biosystems modelo Veriti. Após otimização, a reação de amplificação foi definida e realizada com as seguintes concentrações: 15ng de DNA molde, 0,75 mM de dNTP, 1U de Taq Polimerase (Cenbiot), 0,2µM de  primer, 3,0mM de  MgCl2, 2,4µl de Tampão 1,2X e  água miliQ, em um volume final de 20µl, proporcionando assim um bom padrão de bandas. Foram testados 68 primers RAPD do grupo B, verificando-se a amplificação e o polimorfismo dos primers testados. Dos 68 primers testados, 29 se revelaram polimórficos para os genótipos de angico de bezerro.  Fonte Financiadora: EMBRAPA.   

NASCIMENTO, M. do P. S. C. B.

VEGETAIS201OTIMIZAÇÃO E SELEÇÃO DE PRIMERS RAPD PARA CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE ACESSOS DE ANGICO DE BEZERRO (Piptadenia moniliformis Benth.)Ionne Martins Soares Dantas1; Raul Ferreira de Miranda Mendes 2; Maria Perpetuo Socorro Cortez  Bona do Nascimento3 ; Paulo Sarmanho da Costa Lima31 Faculdade de Saúde, Ciências Humanas e Tecnológicas do Piauí – NOVAFAPI; ionnezinha@hotmail.com2 ; Universidade Estadual do Piauí – UESPI;  raul-mendes@hotmail.com 3Embrapa Meio Norte – msbn13@yahoo.com.br; sarmanho@cpamn.embrapa.com.br   Palavras – chave: Reação, PCR, marcadores,polimorfismo O angico-de-bezerro (Piptadenia moniliformis Benth) é uma espécie de Papilionoideae (Leguminosae) adaptada a terrenos secos, de elevada dispersão no Nordeste brasileiro e de notável valor por seu potencial forrageiro, apícola e madeireiro, além de fixadora de nitrogênio atmosférico.  Entretanto, são poucos os conhecimentos quanto à caracterização dessa espécie. Objetivou-se otimizar a reação de amplificação e selecionar primers RAPD (Random Amplified Polimorfic DNA)para análises de variabilidade genética em 10 acessos de angico de bezerro que compõem o Banco Ativo de Germoplasma de Forrageiras Nativas da Embrapa Meio-Norte. Na otimização foram testados quatro concentrações de MgCl2 (1,5mM, 2,0mM, 2,5mM e 3,0mM) e duas concentrações de Tampão ( 1,1X e 1,2X ). As reações foram realizadas com duas etapas de desnaturação, sendo a primeira de 1 min a 92°C,seguida de 45 ciclos de 40 seg a 92°C para desnaturação, 1 min a 34°C para anelamento, 2 min a 72°C e uma extensão final de 5 min a 72°C, em um Termociclador Applied Biosystems modelo Veriti. Após otimização, a reação de amplificação foi definida e realizada com as seguintes concentrações: 15ng de DNA molde, 0,75 mM de dNTP, 1U de Taq Polimerase (Cenbiot), 0,2µM de  primer, 3,0mM de  MgCl2, 2,4µl de Tampão 1,2X e  água miliQ, em um volume final de 20µl, proporcionando assim um bom padrão de bandas. Foram testados 68 primers RAPD do grupo B, verificando-se a amplificação e o polimorfismo dos primers testados. Dos 68 primers testados, 29 se revelaram polimórficos para os genótipos de angico de bezerro. Fonte Financiadora: EMBRAPA.  

Otimização e seleção de primers RAPD para caracterização molecular de acessos de Angico de bezerro (Piptadenia moniliformis Benth.).

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/858639/1/OtimizacaoSelecao-24396.pdf

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