BRAS, A. Le

GUIMARAES, L. J. M.

MENDES, F. F.

QUEIROZ, V. A. V.

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Efeito do Beneficiamento no Teor de Micotoxinas em Grãos de MilhoLauro J. M. Guimarães1, Flávia F. Mendes2, André Le Bras3 e Valéria A.V. Queiroz11Pesquisador, Embrapa Milho e Sorgo, CEP 35701-970, Sete Lagoas/ MG,guimaraes@cnpms.embrapa.br, valeria@cnpms.embrapa.br, 2Mestranda UFLA/ MG,flvmendes2001@yahoo.com.br,3ARVALIS, Boigneville/FR, a.lebras@arvalisinstitutduvegetal.fr.Palavras chaves: deoxynivalenol, fumonisinas, mesa gravitacional.O milho é um dos produtos alimentares que apresenta alta predisposição àcontaminação por micotoxinas produzidas, especialmente, pelos fungos Aspergillus, Fusarium ePenicillium. A presença de micotoxinas nos alimentos pode provocar intoxicações severas tantono homem quanto nos animais. Além disso, causam perdas econômicas importantes, seja peladiminuição da performance dos animais ou rejeição de produtos nos mercados, por apresentamteores de micotoxinas superiores aos limites de tolerância.Fungos do gênero Fusarium são comuns no solo e produzem micotoxinas daclasse dos tricothecenos, fumonisinas e zearalenonas. As micotoninas também são contaminantesnaturais dos cereais, sendo normal encontrá-las em pequenas concentrações. A contaminaçãopode acontecer no campo, antes da colheita, ou durante a estocagem. Em razão da estabilidade damaioria das micotoxinas, estes contaminantes podem ser encontrados nos produtos alimentaresmais elaborados, sendo que, as principais fontes de absorção por via alimentar são produtos abase de cereais, em particular o trigo e o milho.A intensidade de contaminação de grãos depende de varios fatores, dos quais,notadamente o clima é preponderante. Entretanto, existem outros fatores que são tambémimportantes para o desenvolvimento do fungo e que podemos manejar de forma a desfavorecer ainfestação. Dentre estes, podemos considerar, os resíduos culturais, que têm uma importânciaparticular por servirem de substrato para o fungo; a escolha de variedades resistentes; ascondições e data da colheita, que, quanto mais tardia, mais elevados serão os teores demicotoxinas; a presença de insetos-pragas nas espigas e o tratamento com fungicidas.A micotoxina deoxynivalenol, do grupo dos tricothecenos, é uma das menostóxicas, mas é uma das mais importantes em termos de exposição humana, tornando-se perigosapara a saúde de pessoas e de animais. A ingestão pelos animais, especialmente os suínos que sãomais sensi veis, pode causar vários problemas. Segundo Gutzwiller et al. (2005), a contaminaçãoda ração de suínos com 1000 ppb de deoxynivalenol pode reduzir o consumo, levar a umatendência ao canibalismo, provocar vômitos e deficiências do sistema imunológico, além dediminuir a fertilidade dos animais.As fumonisinas são micotoxinas sintetizadas principalmente por Fusariummoniliforme, fungo cosmopolita, encontrado nas regiões quentes e úmidas, temperadas esubtropicais. Ele parasita principalmente o milho, mas também o sorgo, o arroz, o milheto, acana-de-açúcar e o feijão (Hamerurt Fortineau, 1988). Pode ser encontrado igualmente em estadosaprofítico nos resíduos vegetais do solo, onde pode sobreviver 12 meses em temperaturas entre 5e 10 ºC, e umidade entre 5 e 35% (Dupuy, 1994). As fumonisinas foram caracterizadas edivididas em 16 tipos: Fumonisina B1, B2, B3, B4, A1, A2, A3, AK1, C1, C3, C4, P1, P2, P3,PH1A e PH1B (AH-SEO e WON LEE, 1999). A FB1, FB2 e FB3 ocorrem como contaminantesnaturais em milho, contrastando com os análogos derivados, que não têm sido naturalmentedetectados. A FB1 é considerada a mais tóxica e abundante, compreendendo de 70 a 80% dasfumonisinas totais (Rheeder, 2002). Em animais, ela provoca efeitos variáveis, mas, duas formasde evolução fatal são particularmente caracterizadas: Edema pulmonar em suínos e aleucoencephalomalacia eqüina. Em ratos, ela provoca hepatocarcinogenese. Em homens, apresença de fumonisinas na alimentação pode favorecer o surgimento de cânceres do esôfago e aformação de placas de aterosclerose.A melhor maneira de evitar a presença das micotoxinas é prevenir suaformação, neste sentido, a adoção de práticas culturais que evitem o desenvolvimento do fungo éde extrema importância. Entretanto, existem situações em que o desenvolvimento do fungo éinevitável e o controle das micotoxinas formadas se torna necessário, apesar dos procedimentosde eliminação de microrganismos serem, na maioria, ineficazes. Mendes et al. (2005) verificaramque o beneficiamento de grãos de trigo, pela eliminação dos grãos mais leves, diminuiuconsideravelmente os teores de deoxynivalenol.A presença de fungos pode afetar as características naturais dos grãos. Aquelesinfestados por Fusarium são geralmente deformados e apresentam menor densidade, podendoconter micotoxinas (Wang, 1997; Paulitz, 1999). Assim, espera-se obter melhor qualidadesanitária de um lote pela eliminação desse tipo de grão. Existem várias tecnologias que podem serutilizadas para separar grãos por diferença de densidade, entre elas o uso da mesa gravitacional,que é um equipamento muito utilizado em estações de sementes. Neste contexto, o objetivo dessetrabalho foi verificar o efeito do beneficiamento, em mesa gravitacional, na qualidade sanitáriafinal de grãos de milho. O estudo foi realizado pelo ARVALIS – Intitut du Végétal, emcolaboração com a Sociedade Westrup.Os ensaios foram conduzidos no laboratório da Sociedade Westrup, em Notre-Dame-D’oé (37) – França, no período de 01/03/06 à 30/06/06, que dispunha de uma máquina dear, peneiras e uma mesa gravitacional. Em 25 de março de 2006 um lote de milho foi selecionadoe previamente homogeneizado. A partir deste, foram retiradas três amostras de 30 kg cada,perfazendo as três repetições. A divisão das amostras foi feita com ajuda de um divisor de grãos.De cada amostra foi retirada uma sub-amostra para posterior análise micotoxicológica.As três amostras de 30 kg foram submetidas à passagem pela mesagravitacional, na qual dispunha de cinco saídas: na primeira se concentravam os grãos menosdensos e na última os grãos mais densos. Todas as regulagens foram previamente fixadas. Após alimpeza dos grãos, foram coletadas amostras de 1 kg de cada saída para posterior avaliação.As características mensuradas foram: peso de mil grãos (PMG), feita pelacontagem direta de 1000 grãos inteiros; peso por hectolitro (phl) e porcentagem de água (u%). Aconcentração de micotoxinas foi determinada pelo laboratório CRCB Eurofins através do métodode cromatografia em fase gasosa.De posse dos resultados preliminares do primeiro ensaio, um segundoexperimento foi realizado, utilizando-se dois lotes com diferentes concentrações iniciais emmicotoxinas, como mostrado na Tabela 1. Três amostras de 20 kg de cada lote foram submetidaspreviamente à passagem pela máquina de ar e peneiras e em seguida pela mesa gravitacional,perfazendo, dessa maneira, três repetições. Todas as regulagens foram previamente fixadas. Ascaracterísticas avaliadas foram: peso de mil grãos e peso por hectolitro. Para avaliar o teor demicotoxinas as três repetições de cada tratamento foram reunidas e homogeneizadas paraconstituir uma amostra composta, para cada tratamento.   Tabela 1 – Teores de micotoxinas (ppb) para os dois lotes de milho analisadosLote Deoxynivalenol Nivalenol HT – 2 FumonisinasB1+B2Zearalenone OchratoxineA 1150 650 0 3800 64 0B 2300 140 40 6000 0 0Como pode ser observado na Tabela 2, a mesa gravitacional não separou osgrãos por diferença de densidade, pois os valores de peso por hectolitro das amostras dasdiferentes saídas não apresentaram diferença estatística pelo teste F. Entretanto, observa-se umaseparação visual de grãos quebrados (Figura 1), onde, na primeira saída da mesa gravitacional,concentrou a maioria desse tipo de grãos. Resultados semelhantes foram obtidos por Carvalho etal. (1993) que, estudando o efeito da limpeza na qualidade sanitária de sementes de milho, nãoencontraram diferença significativa de densidade de sementes nas diferentes saídas da mesagravitacional. A variável peso por hectolitro, que foi utilizada como medida de densidade, podenão ser a mais adequada, se considerarmos que os grãos quebrados preenchem melhor o espaçodo hectolitro (Figura 1).Em relação ao peso de mil grãos, pode-se observar um gradiente crescente nasdiferentes saídas da mesa gravitacional, havendo diferença estatística, a 5% de probabilidade,pelo teste F (Tabela 2).Tabela 2 – Peso por hectolitro, peso de mil grãos e teor em deoxynivalenol das amostras de milhoantes da limpeza e depois da passagem na mesa gravitacional, HTC – ARVALIS, 2006Peso por hectolitro Peso de Mil grãos deoxinevalenolFonte de variação---------kg/hl--------------------------------g-----------------------------------ppb-----------Amostra inicial 77.10 240.33 711 cSaída 1 77.21 238.70 951 aSaída 2 77.26 243.42 687 cSaída 3 77.10 243.98 799 bSaída 4 77.26 245.94 698 cSaída 5 - 249.73 588 cTest F 0.539ns 4.41* 7.94*CV (%) 0,246 1.33 10.28ns, *,  não significativo, significativo a 5% pelo teste F.Médias seguidas pela mesma letra, não diferem entre si pelo teste Tukey a 5% de probabildade.A concentração em deoxinevalenol foi mais forte na primeira saída (951ppb) emais fraca na saída 5 (558ppb), uma diminuição de 40%, mas, em relação a amostra inicial nãohouve diferença. A correlação entre concentração de deoxinevalenol e peso de grãos de milho foialta e negativa, com estimativa de -0,93, podendo-se observar essa tendência no Gráfico1.Mendes et al. (2005) conduziram estudos similares para trigo, e encontraram correlação de -0,98entre a concentração de deoxinevalenol e o peso por hectolitro. Em trigo, os grãos mais leves(ardidos) foram responsáveis pela maior concentração dessa micotoxina num lote contaminado.Figura 1- amostras de grãos coletadas da mesagravitacional: saída 1 (esquerda) e saída 5 (direita)Gráfico 1- Concentração de deoxinevalenol, em ppb, emfunção do peso de 1000 grãos, em g.No segundo experimento, realizou-se uma pré-limpeza a fim de eliminar osgrãos quebrados e a poeira dos lotes contaminados antes de submetê-los à mesa gravitacional.Isso refletiu nos resultados do peso por hectolitro e houve um gradiente crescente na densidadedos grãos de acordo com as saídas da mesa gravitacional (Tabela 3).Não houve relação entre o peso de hectolitro e o teor em deoxinevalenol, comoobservado para o trigo, por Mendes et al. (2006). Os teores de deoxinevalenol não diminuíramcom processo de limpeza para ambos os lotes avaliados (Tabela 3). Aparentemente esse tipo demicotoxina não se concentra nos grãos mais leves, como observado para o trigo.Tabela 3- Valores de peso de hectolitro (phl), teor de deoxynivalenol e fumonisinas , em ppb, antes dobeneficiamento, apos a pré-limpeza e à cada saída da mesa gravitacional** significativo à 1% pelo teste FMédias seguidas pela mesma letra não diferem entre si a 5% pelo teste Tukey à 5% de probabilidade.Resultados diferentes foram observados para o teor de fumonisina. O teor dessamicotoxina reduziu notadamente à medida em que o peso específico aumentou (Tabela 3). Mas,por que, ao contrário do deoxynivalenol, a presença de fumonisinas é associada ao pesoespecífico, sendo a limpeza, mais eficaz? Uma explicação possível é a forma de desenvolvimentodo fungo Fusarium moniliforme, responsável pela produção de fumonisinas. Segundo Munkvold                          Lot A                                                      Lot B  phl deoxynivalenol Fumonisinas phl deoxynivalenol FumonisinasAmostra inicial 75.8 b 1150 3800 75.9 e 2300 6000Pré limpeza 74.3 c 1600 3500 76.9 c 1800 1540Saída 1 73.2 e 2600 2890 76.0 e 950 25400Saída 2 73.9 d 2300 555 76.1 e 330 775Saída 3 74.7 c 2500 328 76.5 d 1900 135Saída 4 76.8 a 1700 545 77.6 b 550 66Saída 5 - 900 413 78.8 a 150 135F 55.01** 264.3**CV 0,36 0.15y = -31,823x + 8520,8R2 = 0,8635006007008009001000238 240 242 244 246 248 250 252Peso de 1000 grãos (g)Deoxinevalenol (ppb)05101520253035porcentagem de grãos       .Lote A 20 34 31 14 1Lote B 11 23 31 27 6Saida 1 Saida 2 Saida 3 Saida 4 Saida 5(1997), esse fungo coloniza o milho pelas rachaduras nos grãos ou pela presença de insetos pragana espiga. Dessa maneira, os grãos se tornam mais leves. Já o Fusarium graminium, responsávelpela produção de deoxynivalenol, se desenvolve sobre a periferia dos grãos.As saídas 2, 3, 4 e 5 da mesa gravitacional permitiram recuperar cerca de 80%dos grãos de cada lote (Figura 2), com um teor em fumonisinas abaixo de 2000 ppb. Essesresultados refletem o efeito positivo da limpeza dos grãos a fim de diminuir o teor emfumonisina.Figura 2 – Rendimento de milho à cada saída da mesa gravitacionalFoi possível concluir que os grãos de milho contaminados com deoxynivalenol não apresentamcaracterísticas físicas que os diferenciam dos demais, sendo a separação dos grãos por diferençade densidade um processo ineficiente. No entanto, para fumonisinas, o processo de limpeza dosgrãos utilizando mesa gravitacional, foi eficaz em reduzir a concentração dessa micotoxina.Referências BibliográficasCARVALHO M. L. M ; BILIA D. A. C.; da SILVA W. R. Efeitos do beneficiamento na qualidade de sementes demilho infectadas por fusarium moliniforme Sheld. Sci. 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Efeito do beneficiamento no teor de micotoxinas em grãos de milho.

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Efeito do beneficiamento no teor de micotoxinas em grãos de milho.

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