BONGARO, G.

LEDUR, M. C.

PEIXOTO, J. de O.

PERI, E.

RIBEIRO, J. B.

TESSMANN, A. L.

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JINC – 4ª Jornada de Iniciação Científica Embrapa / UnC – 21 de outubro de 2010 – Concórdia,SCFREQUÊNCIA ALÉLICA E GENOTÍPICA DE POLIMORFISMO NO GENE RECEPTOR DALEPTINA (LEPR) EM DUAS LINHAGENS DE AVES (Gallus gallus)Fongaro, G.*1; Peri, E.1; Tessmann, A. L.2; Ribeiro, J. B.2; Peixoto, J. O.2; Ledur, M. C.21Graduanda do Curso de Ciências Biológicas, Universidade do Contestado, Campus Concórdia, Bolsista na EmbrapaCNPQ / PIBIC. E-mail: gislainefongaro@hotmail.com2Embrapa Suínos e AvesPalavras-chave: gene candidato; marcador molecular;   caracterização molecular.IntroduçãoA caracterização molecular das linhagens de avesexistentes, a relação genética entre elas, bem como oconhecimento de suas origens genéticas são importantespara obtenção de subsídios para programas deelhoramento, manejo e conservação das linhagens deaves utilizadas no Brasil.Uma importante forma de caracterização genética é acaracterização das linhagens para genes candidatosconhecidos associados a características de interesseeconômico. O gene receptor da leptina (LEPR) estáassociado à deposição de gordura em galinhas sendo,por esse motivo, considerado gene candidato (1). Dessaforma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar asfrequências alélicas e genotípicas de um marcador nogene receptor da leptina em duas linhagens de aves(Gallus gallus).Material e MétodosNo presente estudo foram utilizadas duas linhagens deaves sendo uma a linhagem de postura de ovoscastanhos GG pertencente ao Banco de Germoplasma daAves da Embrapa Suínos e Aves e outra a  linhagemhíbrida de corte Cobb 500. O sangue de 50 animais decada linhagem foi coletado para a extração de DNAgenômico com Kit DNAzolR (Invitrogen). Posteriormenterealizou-se quantificação do DNA por meio deespectrofotometria e diluiu-se o DNA para a concentraçãode uso: 25ng/l.Através da técnica já padronizada pelo Laboratório deGenética Animal – Embrapa Suínos e Aves realizou-se aReação em Cadeia da Polimerase (PCR), tendo umvolume final de 25L, amplificando-se o fragmento dogene do Receptor da Leptina com o seguinte conjunto deprimers: LEPR F: 5’ TCTGGAGTGAATGGAGCACA 3’ eLEPR R: 5’ GCTACGCTCTGGGTTTTGTT 3’. Ascondições de amplificação foram as seguintes: 95°C por 6minutos, seguido por 32 ciclos com as seguintescondições: 95°C por 1 minuto, 60°C por 1 minuto e 72°Cpor 1 minuto, e uma etapa de extensão final a 72°C por10 minutos.Para a clivagem utilizou-se a enzima BsrGI, quereconhece e cliva o polimorfismo A>G; Na reação foramutilizados 12,5 L do produto de PCR, 0,25 L da enzimaBsrGI (1U/L), 2,0 L de Buffer 10X e 5,5 L de águaultra-pura. Os padrões de bandas possíveis e seusrespectivos genótipos estão dispostos na Figura 1.A reação foi incubada a temperatura de 60° C por 2horas. Todo material da reação de clivagem foi submetidoa eletroforese em gel de agarose 1% e visualizado pormeio de luz UV. Os genótipos foram obtidos eposteriormente, calculou-se as freqüências (alélica egenotípica), dos genótipos possíveis nessas duaslinhagens industriais.Resultados e DiscussãoFoi possível amplificar o fragmento esperado deaproximadamente 940 pb do gene Receptor Leptina. NaFigura 1 está apresentado o padrão observado na técnicade PCR-RFLP.Figura 1. Padrão de bandas clivadas pela enzima BsrGI e seusrespectivos genótipos.As freqüências alélicas e genotípicas estão apresentadasna Tabela 1. Verificou-se que os animais avaliados para opolimorfismo LEPR A>G da Linhagem GG apresentaramos três genótipos possíveis (AA, GG e AG), já  a linhagemCobb 500 não apresentou variação genotípica, estando oalelo G fixado.Tabela 1. Freqüência genotípica dos indivíduos genotipadospara o Receptor da Leptina.LinhagemFreqüênciaAlélicaFreqüênciaGenotípicaGG 78% G 22% A 65% GG 7% AA 28% AGCobb 500 100% G 0% A100% GG 0% AA 0% AGO levantamento das frequências alélicas de genescandidatos é importante para se caracterizargeneticamente as linhagens em estudo a fim de auxiliarna manutenção da máxima variabilidade possível dentrode suas populações e o uso sustentável destes recursosgenéticos animais. Uma vez que a diversidade genética éfundamental para o melhoramento genético de aves.ConclusõesExiste variabilidade entre as linhagens para o marcadorno gene LEPR, estando esse polimorfismo segregandona linhagem GG e fixado na linhagem comercial Cobb500. A perspectiva é que esse trabalho se estenda afuturas análises caracterização genética utilizandodiversas linhagens de galinha buscando evidenciar opotencial das linhagens nacionais no melhoramentogenético.Referências1. NINOV, K., LEDUR, M. C., ALVES, H. J., ROSÁRIO,M. F., NONES, K., COUTINHO, L. L. Investigation ofleptin gene in broiler and layer chicken lines. ScientiaeAgrícola, v.65, n.2, p.214-219, 2008.940 pb674 pb266 pb

Frequência alélica e genotípica de polimorfismo no gene receptor da leptina (LEPR) em duas linhagens de aves (Gallus gallus).

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