Del extracto etanólico del tallo de Piper chiadoense Junker (Piperaceae) fueron aislados por métodos cromatográficos la aristolactama identificada como lactama del ácido 10-amino-3,4-dimetoxifenantreno-l carboxílico (cepharanone B); campesterol; estigmasterol y B-sitosterol. Sus estructuras fueron determinadas por métodos espectroscópicos y por comparación con datos reportados en la literatura

P de Diaz., Aura M.

Peña O., Luz Angela

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REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA BOGOTÁ (COLOMBIA). VOLUMEN 24. No I DE 1995 ARISTOLACTAMA Y ESTERÓLES DEL TALLO DE Piper chiadoense Luz Angela Peña O. y Aura M. P. de Díaz*. *Departamento de Química, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia, Santafé de Bogotá, Colombia. Keywords: Piper chiadoense; Piperaceae; aristolactam alkaloid; sterols. RESUMEN Del extracto etanólico del tallo de Piper chiadoense Junker (Piperaceae) fueron aislados por métodos cromatográficos la aristolactama identificada como lactama del ácido 10-amino-3,4-dimetoxifenantreno-l-carboxílico (cepharanone B); campesterol; estigmasterol y B-sitosterol. Sus estructuras fueron determinadas por métodos espectroscópicos y por comparación con datos reportados en la literatura. ABSTRACT From the ethanolic extract of Piper chiadoense Junker (Piperaceae) stem, were isoiated by chromatographic methods an aristolactam characterized as 10-amino-3,4-dimethoxyphenanthrene-l-carboxilic acid lactam (cepharanone B); campesterol; stigmasterol and 6-sitosterol. Their structures were elucidated by spectroscopic methods and by comparison with literature. INTRODUCCIÓN El género Piper comprende un gran número de arbustos y hierbas antófilas, gimnantas, angiospermas y dicotiledóneas que crecen en forma silvestre en regiones tropicales y subtropicales (1); en el territorio colombiano se en-cuentran entre 5 y 3800 m de altitud (2) y son utilizadas en ornamentación y en medicina popular (3). El estudio químico del tallo de P, chiadoense, arbusto trepador localizado en las riberas del Río Chiadó (Antioquia), muestra la presencia de esteróles 17 REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA, BOGOTÁ (COLOMBIA), VOLUMEN 24, No, I DE i 995 identificados como campesterol 1 reportado en este trabajo por primera vez en Piperaceae, estigmasterol 2 y B-sitosterol 3 y de derivados del ácido chiquímico de los cuales se aisló una aristolactama caracterizada como lactama del ácido 10-amino-3,4-dimetoxifenantreno-1-carboxílico (cepharanone B) 4 aislada recientemente de Piper longum (6) siendo esta la segunda vez que se registra dentro de la familia Piperaceae. Las aristolactamas son un pequeño grupo de alcaloides de algunas familias de Magnoliales (4-8, 11) y son interesantes por su actividad selectiva contra bacterias Gram-positivas y por su acción citotóxica contra HeLa (carcinoma cervical en humanos) (9). PARTE EXPERIMENTAL Material Vegetal El arbusto P. chiadoense fue colectado en la región denominada Tapón del Darién cerca de Apartado. Antioquia, Colombia e identificado botánicamente por el Dr. Jorge Brand. Un espécimen reposa en el Herbario de la Fundación "Jardín Botánico Joaquín Antonio Uribe" de Medellín. Colombia (JAUM 7063). Extracción y Aislamiento de los Metabolitos Secundarios El tallo (1.7 Kg) seco y molido fue sometido a extracción en soxhlet con etanol; el extracto etanólico (18.5 g) fue fraccionado por extracciones sucesivas con éter de petróleo [40-60"C (3.8 g)], tolueno (3.0 g) y clorofor-mo (3.5 g). El extracto en éter de petróleo fue sometido a fraccionamiento sobre columna cromatográfica usando silica gel (70 g) como adsorbente; elución con éter de petróleo-acetato de etilo (95:5) dio una mezcla de esteres de ácidos grasos (250 mg); por elución con éter de petróleo-acetato de etilo (7:3) se obtuvo una mezcla que dio positiva la prueba de Lieberman-Buchard [112 mg; EM 70 eV, m/z (int. reí.): 416(6.5), 415(17.5), 414(57.1), 412(56.8), 400(42.3). La separación e identificación de los compuestos presentes en la mezcla, fue realizada por CG-EM usando un cromatógrafo Hewlett Packard SERIES U, 5890, con columna CPSIL-5 (25 m x 0.32 mm), utilizando He como gas de arrastre, un programa de temperatura entre 50-300"C a 5"C/min, inyección "on column"; de esta forma fueron separa-dos el compuesto 1 [tiempo de retención (t̂ ) = 44.35 min.], compuesto 2 (t̂  = 44.85 min.) y compuesto 3 (t̂  = 45.55 min.) . Los extractos toluénico y clorofórmico fueron sometidos a fraccionamiento en columna sobre silica gel en proporción de 60 g y 70 g respectivamente. 18 REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA BQGOTA (COLOMBIA). VOLUMEN 24. No. 1 DE 1995 Además de las mezclas anteriores,la elución del extracto toluénico con éter de petróleo-acetato de etilo (7:3) y con cloroformo permitió la separación del compuesto impuro 4 (40 mg) el cual se purificó por sucesivos fraccio-namientos usando cromatografía en columna y éter de petróleo-acetato de etilo (7:3) como eluente, para dar finalmente 6 mg del compuesto puro. Del extracto clorofórmico se lograron separar 4 mg de 4 usando acetato de etilo como eluente. Campesterol 1. EM 70 eV, m/z(int. reí.): 402( 1 1.49)lM+2], 401(22.58)[M-i-l], 400(76.34)[M1, 385(21.24)[M* -Me], 382(30.38)[M*-H,0] . 367(M* -Me - H.O]. 315(30.91 )[M* -851, 289(30.65)[M* - 111], 273(19.89)[M* - R], 271(1.63), 255(28.23)[M* -R - H,0] . Estigmasterol 2. EM 70 eV. m/z(int. reí.): 4l4(3.28)[M-i-21, 4I3(8.01)[M-I-I ], 412(23.99)[M1, 397(2.14)|M* - Me], 394(3.93)[M^ -H,0] , 379(2.97)[M* -Me - H,0] , 327(1.56)[M* - 85| , 30I(6.55)[M* -111], 273(12.15)[M^ -R], 271(37.30), 255(36.49). B-Sitosterol 3. EM 70 eV, m/z(int. reí.): 416(8 .47)[M-H21, 415(26.84) [M+1], 414(80.37)[M*], 399(22.85)[M*- Me], 396(35.74)[M* - H,0], 329(44.79)|M* - 85], 303(41.72)[M* - 111], 273(34.97)IM* - R], 271(4.75), 255(44.17). Lactama del ácido 10-amino-3,4-dlmetoxifenantreno-l-carboxíl¡co (cepharanone B) 4. Cristales amarillentos, pf 258"C (CHCI,)[Lil. 257-258"C (11)]; IR(KBr) cm' : 3175, 3057, 3015,2954, 1717, 1655, 1616, 1499, 1441, 1379, 1270, 1183, 1 161, 1138, II 10, 1058, 966, 865, 742; UV >.̂ -;™'nm (log e): 232(4.27), 263(4.19), 276(4.24), 286(4.23), 316(3.65), 383(3.61); RMN 'H(CDC13 -H Piridina-d,, 200 MHz) 5: 4.05(3H. s, CH30-3), 4.I0(3H. s, CH30-4), 7.02(lH,s. H-9), 7.54(2H, m. H-6,7), 7.76(IH. d, J= 6.0 Hz, H-8), 7.80(1H, s, H-2), 8.8I(IH, m, H-5); RMN 'H(CDCI,, 90 MHz) 6: 4.08(3H, s, CH,0-3). 4.I0(3H, s, CH,0-4), 7.10(1H, s, H-9), 7.55(2H, m, H-6,7), 7.75(rH, m, H-8), 7.80(IH, s? H-2), 9.25(1 H, m, H-5); EM 70 eV, m/z(int. reí.): 280t I 8.9)[M-i-1 ]. 279( IOO)[M*], 278(3.2), 264( 13.7), 236(18.4), 221(18.0), 218(10.0), 209(12.3), 208(6.7), 193(23.4), 181(16.2), 165(19.5), 164(21.7), 138(8.7), 82(10.4); CCD Resolvente]: 0.30 [éter de petróleo-acetato de etilo (1:1)], 0.57 [cloroformo-acetato de etilo (7:3)]. Acetato de 4: Una solución de 4_(5 mg) en una mezcla de Ac,0 (0.5 mi) y C,H,N (0.5 mi) fue sometida a reacción a presión y temperatura normales, durante 24 horas y el producto acetilado 5, separado de la manera usual; IR (película) cm ': 2926, 2855, 1741. 1711; CCD R,[solvente]: 0.66 [clorofor-mo/acetato de etilo (7:3)]. 19 REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA. BQGQTA (COLOMBIA), VOLUMEN 24, No, 1 DE 1995 RESULTADOS Y DISCUSIÓN El compuesto 4 presenta carácter aromático por las absorciones en el espectro de IR (3057, I616-I44I cm' ) , por las señales entre 5 7.10 y 6 9.25 en el espectro de RMN 'H que integran para seis protones, por el intenso ion molecular en m/z 279(100%) y por las absorciones en el espectro de UV (232, 263, 276, 286, 316,383 nm) similares a las del cromóforo fenantreno (10). Este compuesto presenta además una absorción fuerte en el espectro de IR en 1717 c m ' (C=0) y una banda en 3175 c m ' que no corresponde a hidroxilo fenólico ya que en el espectro de UV no ocurre desplazamiento batocrómico al adicionar EtONa a la muestra. Los datos anteriores y el análisis del espectro EM con un ion molecular en m/z 279 y una secuencia de fragmentación 264(M* -Me), 236(M* -Me -CO), 221(M^ - 2Me -CO). 165(M* - 2Me - 3C0) y 138(M* - 2Me -3C0 -HCN), permiten clasificar el compuesto 4 como una aristolactama (11, 12) de fórmula condensada C|,H,,0,N. El espectro de RMN'H (CDCl, 90 MHz) de este compuesto presenta dos señales simples de grupos metoxilo (5 4.08 y 5 4.10) los cuales se pueden localizar sobre los carbonos C-3 y C-4 por comparación con datos reportados en la literatura (11,12). El efecto de desprotección ejerci-do por el metoxilo en C-4 sobre H-5 explica su aparición a campo bajo en 5 9.25 (11). En la región de los protones aromáticos se observan además dos señales simples correspondientes a los protones en C-2 (5 7.80) y en C-9 (6 7.10) y señales múltiples en 5 7.55 (H-6,7) y en 5 7.75 (H-8). La presencia del N-H en la molécula se evidencia por la reacción de acetilación de 4; el espectro de IR del derivado acetilado 5 muestra la desaparición de la banda en 3175 cm ' del compuesto original y la aparición de una absor-ción en 1741 c m ' (CO). Esta sustancia fue reportada en Stephania cepharantha (Menispermaceae), Schefferomitra subaequalis (Annonaceae), Aristolochia Argentina (Aristolochiaceae) (1 1) y Piper longum (Piperaceae) (6). El análisis de los espectros de masa de los esteróles 1, 2 y 3 permite proponer las fórmulas condensadas C,jH^jO. Cĵ jH^̂ O y C,^H5(|0 respectiva-mente. Los tres espectros de EM presentan la misma fragmentación a valores menores o iguales a m/z 273 indicando la existencia en estos compuestos del núcleo ciclopentanoperhidrofenantreno (13); los tres com-puestos presentan en su estructura un hidroxilo sobre el C-3 y un doble enlace sobre el C-5 corroborados por los fragmentos típicos en el EM en [M* -85] y [M* - 111) (13). La diferencia entre los compuestos 1, 2, y 3 radica en la cadena lateral R localizada en C-17 y cuya composicición respectiva es de C^H,,,, Ci^H^, y C|uH,|. La identificación de los compuestos 1> 2 y 3 como campesterol, estigmasterol y B-sitosterol respectivamente, se hizo tanto por el análisis de los espectros de EM como por comparación con espectros publicados para estas sustancias (14). REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA. BQGQTA (COLOMBIA), VOLUMEN 24, No. I DE 1995 1: R=-2: R= 3: R = ^ MeO Meo' N-R 21 REVISTA COLOMBIANA DE QUÍMICA. BOGOTÁ (COLOMBIA), VOLUMEN 24. No. I DE 1995 AGRADECIMIENTOS Al Programa COLCIENCIAS - UNIVERSDIAD NACIONAL DE COLOM-BIA (I 101-05-002-92). BIBLIOGRAFÍA 1. Wettestein, R. Tratado de Botánica Sistemática. Labor, Barcelona. 1944,594. 2. Franco. R. P. Mutisia (Acta Botánica Colombiana), 1985, 63. •• 3. García Barriga, H. Flora Medicinal de Colombia, Botánica Económica. Vol I. Talleres de la Imprenta Nacional de Colombia, Bogotá, 1974, 222. 4. 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Aristolactama y esteróles del tallo de piper chiadoense

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Del extracto etanólico del tallo de Piper chiadoense Junker (Piperaceae) fueron aislados por métodos cromatográficos la aristolactama identificada como lactama del ácido 10- mino-3,4-dimetoxifenantreno-l-carboxílico (cepharanone B); campesterol; estigmasterol y B-sitosterol. Sus estructuras fueron determinadas por métodos espectroscópicos y por comparación con datos reportados en la literatura

P. de Díaz, Aura M.

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