以微滴定盤三明治式DNA雜交法及聚合�t鏈鎖反應檢測食品中之沙門氏菌

Abstract

依微滴定盤三明治式DNA雜交法的研究結果，使用紫外線照射確實有助於捕捉探 針固定於微滴定盤孔洞上。而以由1.8 Kb DNA經EcoR Ⅱ 切割所得之不重疊之0.5 ▔▔ kb和1.3 kb DNA分別充當捕捉探針及偵測探針，進行沙門氏菌的檢測專一性探討裡 ，九株不同血清型的沙門氏菌之OD410 值均高於0.4 ，而三種非沙門氏菌，包括 E.coli，Citrobacter 及Shigella均低於0.2 ，因此，應用此系統於沙門氏菌之檢 ▔ ▔▔ ▔▔▔▔▔▔ ▔▔▔▔ 測，具有相當高的專一性。而檢測靈敏度的研究結果顯示，純菌只要10cells/ml 即可檢出，而食品中之沙門氏菌則需１０6 - １０cells/g foods 才可檢出。 以PCR檢測沙門氏菌之實驗結果，TS11/TS5, TS11/TS4兩組引子均具有檢測專一 性，用TS11/TS4當作PCR 引子進行純培養及食品（包括雞肉，豬肉，牛肉，鴨肉， cheese）中沙門氏菌之檢測時，其靈敏度均高達10°cells/ml或g食品，而進一步 控制短時間增殖培養及稀釋倍數，以PCR 可區分沙門氏菌之10cells/ml非生菌與 10°cells/ml生菌。為了縮短聚合鏈鎖反應的時間，以TS11/TS5這組引子在94℃ /1.5 min, 68℃/2.0 min的條件下進行二階段PCR ，其專一性甚佳，五株當做檢測 菌株之不同血清型的沙門氏菌均有375 bp的PCR 產物，而五株Citrobacter 與其他 五株非沙門氏菌則無此PCR 產物。 ▔▔▔▔▔