艰难梭菌粘附的研究进展厦门大学生物系厦门361005王隽，苏文金“艰难梭菌（ClOSTrIdIuMdIffICIlE）是重要的肠道致病厌氧菌。它是抗生素疗法所引起的伪膜性结肠炎的致病菌，并且是引起抗生素相关的腹泻的最主要病原菌之一，同时还与一些非抗生..

王隽

苏文金

Xiamen University Institutional Repository

5 0 中国微生态学 杂志 9 9 1 6年第 8卷第 2期艰难梭菌粘附的研究进展厦门大学生物系 厦门 3 6 10 0 5王隽 苏文金.艰难梭菌 ( C lo str i dium di f fiei l e )是重要的肠道致病厌氧菌。它是抗生素疗法所引起的伪膜性结肠炎的致病菌,并且是引起抗生素相关的腹泻的最主要病原菌之一,同时还与一些非抗生素疗法引起的疾病相关 tl,’ 」. 由于在健康成年人的肠道菌群中一般不存在艰难梭菌,所以艰难梭菌要实现 其致病作用需要二个步骤:首先是在肠道中繁殖生成毒素,其次是毒素对肠道粘膜发挥病理作用.艰难梭菌的毒素已有较为深入的研究,其中毒素 A (肠毒素 )和毒素B (细胞毒素 ) 已被克隆、测序,并经过碱基突变技术 对毒 素的 结构 与功能关 系进 行 了研究 a[ 一, 0J 。 粘附 (Ad h es ion) 是细菌肠道定植的第一步。由于实验模型方面的原因,过去对艰难梭菌的肠道定植研究仅仅停留在群体水平,已了解到艰难梭菌的肠道定植能力与菌株的性质相关 1[l 」.且肠道正常菌群可拮抗艰难梭菌的肠道定植,但机理未明2l[ 〕.最近,由于培养细胞技术的应用,使艰难梭菌的肠道粘附在细胞和分子层次上的研究取得显著进展.现将有关研究进展介绍如下。C ac。一 2 细胞上 的细菌数达最大值 ; 而 当热刺激温度为 10 ℃时,细菌全部死亡,则无粘附现象发生,这表明只有活细菌细胞才可能实现粘附过程.这些现象充分证实了艰难梭菌的确存在粘附于人肠道细胞的能力。1.艰难梭菌对肠道细胞粘附的证明早在 1 9 7 9 年,玫 r eil ol 就发现在人肠道洗脱物中存在有艰难梭菌 [l J,随后,他又发现艰难梭菌可结合于仓鼠盲肠的上皮组织,且强毒株对肠道粘膜的粘附明显优于弱毒或无毒株 l[` ] ,但尚缺乏直接证据证明艰难梭菌能粘附于人的结肠组织.直到 一9 9 3 年,E v e i lla rd 发现在细菌培养基中添加血液和对艰难梭菌细胞进行加热处理能提高艰难梭菌对人结肠上 皮细 胞 C ac。一 2 和 人 粘液 分 泌 细 胞 H T 29 一M T X 的粘附能力 [, ’ 〕 . 对细菌进行 6 0`C,1 0 分钟的热刺激,虽然只 有 10 肠的细菌能存活下来,但此时细菌的粘附能力要 比未处理的细菌细胞 ( 37 ℃ ) 的粘附力高 n 倍,从而使粘附在2.艰难梭菌对肠道细胞粘附的特点人 结肠 上皮细胞 C ac 。一 2 分离自人结肠腺癌 [l`〕 , 由于在培养过程会出现 自发的分化,并经历成熟的肠细胞所具有的形态学功能分化特征,因而被广泛应用于致病菌的肠道粘附研究 l[’一 .Jl.H T 29 一M T X 细胞来源于人结肠癌细胞 H T一 29,但经过培养和筛选后,已具有正常肠细胞的特征,且可分泌粘液 [,0 〕,因而适用于艰难梭菌粘附肠细胞的研究。研究表明,艰难梭菌对 Ca oc 一 2 细胞的粘附随时间的延长而逐步增强,在加入艰难梭菌1 2。 分钟后,粘附在细胞上的细菌数达到最大值,之后趋于稳定。扫描电镜观察结果表明,艰难梭菌对 C ac 。一2 细胞的粘附始于粘膜表面:细菌先与微绒毛紧密接触,随之 出现明显的胞外聚纤维 网的合成,最后才出现艰难梭菌与C ac 。一 2 细胞的相互粘连.新合成的胞外聚合物还可促进细菌与细菌的接触,从而有利于形成细菌簇,因此,在 Ca oc 一 2 单层培养细胞的凹处可看到不少细菌簇 1[’ 〕 . 而在 H T 29 一M T x培养细胞,其表面覆盖有一层粘液层,艰难梭菌的粘附则以分散或成簇的方式出现。艰难梭菌的粘附力随 C ac。一 2 细胞的培养时间而变化,提示了细胞艰难梭菌受体的表达与细胞的生长相关。通过对 Ca oc 一 2 细胞的刷状缘蔗糖酶一异麦芽糖酶进行免疫标记来观察细胞的生长分化状况,发现当细胞未出现分化而缺乏刷状缘和 刷状缘水解酶时,艰难梭菌无法粘附于 该细胞;而在细胞培养 9 天后,出现了顶端蔗糖酶一异麦芽糖酶的免疫反应,同时也伴随中国徽生态学杂志 1 9 9 6年第 8卷第 2期着艰难梭菌的细胞粘附,表明艰难梭菌的粘附力与培养细胞的分化程度直接相关.3.艰难梭菌粘附的影响因素早期研究表明,艰难梭菌的粘附与培养基成分和细菌有无经物理处理有关 s[l 3.在添加血的细菌培养基中培养后不对细菌进行热刺激,仅有相对少数细菌细胞表现出粘附能力,但如果在与 C ac 。一 2 细胞混合前不洗涤细菌细胞,粘附能力则会明显提高。不管细菌在与C ac。一 2 细胞混合前有无被洗涤,60 ℃ 10 分钟的热刺激均可明显提高细菌的粘附。这提示 了细菌在血液存在生长时可生成一与细菌粘附力密切相关、而 又对热刺激敏感的物质,热刺激使该物质对粘附的贡献成为不可逆。然而,进一步的研究表明,细菌培养基成分对粘附影响不大,热刺激则是重要的条件z[l 」.艰难梭菌的粘附究竟有无细胞类型的特异性呢 ?有人对此进行了研究 t[l 〕.结果表明,艰难梭菌对不同类型的组织培养细胞的粘附能力有所不同,经热刺激处理的细菌可粘附于V er 。 细胞 (猴肾上皮细胞 )、H el a 细胞 (人子宫颈 癌上皮 细胞 )、K B 细胞 (人舌上皮细胞 )、M l兀K 细胞 (狗肾上皮细胞 ),但程度不同 (表l ),估计与不同细胞表达的艰难梭菌受体量不同有关。在粘附前,用抗艰 难梭苗的抗血 清 (1:l 。。0) 与艰难梭菌混合培养一小时,可有效地抑制细菌的粘附,来自无菌小鼠粘液成分也能破坏细菌的粘附.此外,有些糖类对细菌的粘附具有抑制作用,其抑制效果按顺序排列如下:荀萄糖 > 蜜二糖> 蜜三糖> 半乳糖 > 乳糖> 核糖 (表 2).明胶和 N 一乙酞半乳糖胺对粘附也有部分抑制作用。4.艰难梭菌粘附因子的性质研究艰难梭菌中的何种成分为粘附介导物,即粘附因子,该方面研究已取得较大进展.已有证据表明,艰难梭菌的粘附因子为蛋白质成分。在添加血液的培养基上生长的艰难梭菌细胞在 6。℃热刺激后用胰蛋白酶处理,粘附可完全 被破坏,表 明粘 附因子 为一蛋 白质成分〔】, 〕 .经热刺激处理的艰 难梭菌细胞表面有较大量的粘附因子,而 未处理的艰难梭菌的粘附力弱.即表面粘附因子少,所以,用经热处理的细 菌来吸收抗 60 ℃热刺激处理细菌的抗血清就可得到较纯的抗粘附因子抗体.免疫电镜观察结果表明,如此制备的抗体能很疏松地结合位于细菌表面的蛋白。在 w es et nr 一 b lot 中,抗体能识别艰难梭菌裂解物和培养上清液中的大量蛋白,能识别后者可能是因其含有细菌裂解物成分2[l 〕。用 SDS 分别抽提不同培养条件下艰难梭菌 CD 7 9 6 8 5 的表面结合蛋白 (有血或无血培养,经热刺激或未经 热刺激 ),再进行 SDS 一P A G E 电泳,电泳图谱表明:在无血培养基中生长,未受热刺激的细菌有两种主要蛋 白质,分子量分别为 4 8K Da和 31 K Da ,受热刺激的细菌,上述两种蛋白质消失.在添加血液的培养 基 中生 长、未 受热 刺激 的细菌,不 仅 含4 8K D a 和 3l K L地 的蛋 白质,还增 加了一种12 K Da的蛋白;受热刺激的细菌,无 4 8K Da和3 l K Da蛋白,但有 1 2K Da和 2 7K Da的蛋白。为证 实该 现 象是 否为 C d 7 9 6 8 5 所特有,又 对w ilk in s菌株,F D 菌株和 Cd 4 7 8 9 菌株做 T 同样的试验,结果与 Cd 7 9 6 8 5 的结果相同.因血液培养基或热刺激都会提高艰难梭菌的粘附力,因此推测 1 2K Da 和 27 K Da 蛋白与粘附有关.应用这两种蛋白的多克隆抗体 P A b1 2 和P A b 27 来分析 1 2K Da 和 27 K Da 在粘附中的作用,结果发现任一种抗体都能强烈抑制细菌(有含血培养基中培养,受热或未受热刺激 )对C ac。一 2 细 胞的 粘 附,而 P A bl Z 仅 能检 测1 2K Da蛋 白,P A b 2 7 只能识别 2 7K L地,说明12 K Da与 27 K D。为两种抗原异质性蛋白,且它们在艰难梭菌中起相同作用.为确证粘附力的降低不是因为抗体介导的细菌聚集所致,又用木瓜蛋白醉处理抗体.得到的结果与未用 蛋白酶处理的结果相同娜」。关于艰难梭菌细胞表面蛋白的主要成分已有少量报道.Ma s u d a 等曾从 Cd G A I 4一3 1 中分离到两种钙敏感蛋白,分子量分别为 38 K Da·2 5·中国微生态学杂志 1 9 9 6年第 8卷第 2 期和 42 D Ka [, , ] 。 K a w a t a 等分析 T 多株艰难梭菌 3 2K Da和 4 5K L冶 两种主要蛋白〔, ` 〕。 上述这些表面蛋白,将其分为两组:一组含 38 K L抽 和 表面蛋 白与 E ve il lar d 所分离到的 31 K Da 和42 K Da蛋 白,另一组含 32 K Da和 47 K Da蛋 48 K Da蛋 白分子量相近,因而可能与粘附无白 t[ 幻。最近 又有人 报道 C l又二A l o 7 1 4 表面有 关.其作用 目前尚不清楚。表 1 不 同纽织培养细地和培养基对艰 难权菌拈附的形响培养荃川或细胞株 热 处理沮度 (℃ ) 粘附力 (菌数 /细胞 )培养基月了0叮Inér内I八0nJōh丹jùt6八右,C o lu m b i a e y s t e i n e + 血清 + 洗涤 ( , ’C o lu m b ia e y s t e in e + 血液C o lum b i a e y s t e i ne+ 血液 + 洗涤T G Y 肉汤脑心浸汁0.2 5士 0.122.7 0士 0.250.9 2士 0.0 32.3 4士 0.3 70.6 2士 0.3 12.7 0士 0.4 80.4 4士 0.0 62.1 4士 0.3 40.2 2士 0.0 61.3 4士 0.25细胞 株0.4 2士 0.081 3.7 0士 3.7 90.0 1士 0.0 04.4 0 工 1.8 40.0 1士 0.0 11 1.9 0士 5.1 30.18士 0.0 50.5 9士 0.2 9注:( l )培养基的影响均用 C ac o 一 2 细胞检测 , ( 2) 洗涤表示粘附实验前细菌均用 P BS 洗涤 2 次.表 2 碳水化合物对 p C L 6 克隆和艰难梭 菌拈附的影响` , )粘 附力 %H B l o l / p C L 6 6。℃热刺激的艰难梭 菌P 13S 对照糖类阿拉伯糖、果搪、半肌醉、荀萄糖胺、甘尽糖、木糖D 一 ( + )一葡塘o 一乳糖蜜二糖D 一 ( + )一 蜜三糖D 一 (一 )一 核搪粘液组分D 一 ( + )一 半乳糖N 一 乙酞半乳糖胺N 一 乙酞葡萄糖胺 + 里角荣糖其它明胶D 一阿拉伯糖酮、麦芽糖、蔗糖唾液酸、鼠李糖10 0 1 0 01 0 0 1 0 0亡Jg口攻ó0, In自匕口,竹jUd户ǹùOQ八JR`1njC,J工Jd3 07 01 0 05 84 41 0 0不确定 不确定注:(1 )艰难梭菌与待侧物共沮育一小时后再进行粘 附实验.中国微生态学杂志 1 9 9 6年第 8卷第 2 期Karja la i ne n运用 入 a Zp l表达载体建立了艰难梭菌的全基因文库,用上述抗体来筛选带有粘附因子的杂交克隆。在阳性杂交克隆中,命名为 p C L 6 的克隆能迅速凝集血红细胞且 有较强粘附 v er 。 细胞的能力.电镜观察 H B l o l /p C L 6,没发现菌毛,因此粘附因子不是菌毛,而是膜外蛋白质。用抗体检测该重组克隆所表达的蛋白质,可检测出两种蛋白质,分子量分别为2 7K Da 和 4 oK Da.这两种蛋白都能被 P A b 27 识别,推测 4 o K Da 的蛋白可能是 27 K Da 的前体,或是这两种蛋白质具有相同的抗原决定簇。另外一些 阳性杂交克隆不表达 27 K Da蛋白,可能这些克隆的粘附因子有别于 p C L 6z[, 〕。p C L 6 携带的插入 D N A 长度为 1 0.s K b,该插入 D N A 对几种比较常用的限制性内切酶有抗性,因此无法得到该插入 D N A 的酶切图谱.用 Sao l 酶切插入 D N A 得到一个 4.3K b 片段,将其克隆到 p Blu e s e 6 p 中,H B l o l / p 4.3K b具有比 H B l o l / p C L 6 更强的粘附力,且也能表达 2 7K Da蛋白 [川.6.艰难梭菌粘附的病理学愈义正常情况下,肠细胞被一层粘液保护着,而艰难梭菌在正常环境下低水平表达粘附因子,仅能微弱地与粘液相粘,且往往与肠粘液一起被洗脱至肠腔。但经抗生素或其它未知因子的刺激下,粘附因子过量表达,导致细菌能与粘液层受体牢固结合山 〕.或者抗生素使得肠道菌群平衡失调,而在正常情况下屏障菌群占据了艰难梭菌所需的同一粘附受体。或通过其它酶系的作用将粘蛋白降解,从而使艰难梭菌失去粘蛋白上的受体,不能大量定植 于肠上皮细胞。而抗生素破坏了屏障菌群,使艰难梭菌有机会与粘附受体结合 1[’ 〕 。 在其它细菌的降解作用下,粘液 层对艰难梭菌提供最初的营养,使其迅速增殖形成微菌落,分泌毒素,导致疾病。另还存在着在另一水平上进行的对胶原的粘附,它可能与持续感染有关,在破坏 了上皮细胞后,可向周围邻近组织扩散。5.艰难梭菌粘附受体的研究众所周知,人的胃肠 粘膜在 正常情况下都覆盖着一层粘液。很难想象细菌能不粘附于粘液层而直接粘附于肠 细胞。为此,Ka r词 ai n ne提出一模型,设想艰难梭菌的粘附因子有两个受体:一个在粘液层,一个在上皮细胞表面 [l ].艰难梭菌对细胞与粘液粘附的抑制归因于肠粘液蛋白中碳水化合物与细菌粘附因子的特异性结合,证据如下:热处理过的艰难梭菌能粘附于覆盖有一层粘液的 H T一 29 M T X 细胞株,镜检发现细菌存在于单层培养细胞的粘液层 s[l 〕.热处理过的艰难梭菌和克隆成 L 6 还可粘附分离 自无菌小鼠的粘液.该粘附能被乳糖、乙酞半乳糖胺部分抑制.将来自无菌小鼠的粘液粗提物分别与艰难梭菌和克隆 p C L 6 一起温育,能严重破坏艰难梭菌和 p C L 6 的粘附.表 明粘液中有粘附抑制因子存在。艰难梭菌对组织培养细胞的粘附能被半乳糖、葡萄糖以及由这些单糖组成的多糖部分抑制,这意味着粘液与上皮细胞的受体含有相同的糖基成分.细菌粘附没有完全被抑制,意味着粘附受体含一个以上 的糖残基。克隆 p C L 6能特异地使人类 A 型和 B 型血红细胞凝集,而人类 A、B 血型细胞的特异性是分别由寡糖链末端的 N一乙酞半乳糖胺和半乳糖决定的.细菌对组织培养细胞、上皮细胞、血细胞的粘附受体具有相同的糖残基 .2l[ 〕7.展望艰难梭菌是机会致病菌,且普遍存在于新生儿和 儿童的正常菌群.已有资料表明 24 %一岁以下的儿童携带艰难梭菌,且产毒菌株居多。而健康成年人中艰难梭菌的分离率远低于儿童且为非毒性菌株 Jl[.目前艰难梭菌粘附机理的研究才刚刚起步,有待解决的间题仍很多,如:艰难梭菌有多少种蛋白参与粘附,对体外组织培养细胞的粘附是否完全与正常肠 细胞的粘附机制相同,肠道内复杂的生理环境对粘附的影响.病理条件对艰难梭菌可能产生的刺激作用,粘附因子的 D N A 序列及调控机理如何等,这些均需更加广泛探入的研究才能解决.参 考 文 献仁1〕苏文金.中国徽生态学杂志, 1 9 9 2, 4 (4 ):5 7一 64[ 2〕 De lm e M,B u l l S o c F r M ie r o b i o l,1 9 9 5,1 0:1 0 5一10 8[ s〕氏v e C H e t a l,Infe c t Im mu n , 1 9 90,5 8: 4 8 0一 4 8 8[ 4〕 Ba r ,0 L A e t a l,N u e l A e l d R e ,, 1 9 9 0 , 1 8 : 4 0 0 4〔5〕 V o n E ie h e l一 S t r e ib e r C e t a l,M o l G e o G e n e t,1 99 2,2 3 3.2 60一 2 6 8[ 6〕 Bs r oso L A e t a l,M ie r o b i o l P a t h o l,19 9 4,1 6:2 9 7一 3 0 3[ 7〕 Bon g a e rt o G p A a n d L ye rly D M,M ie r o b io lP a rh o 】, 1 9 9 4 , 1 7 : 1一 1 2[ 8〕 J u s t 1 e t a l,J B io l C h e m, 1 9 9`,2 6 9 : 1 0 7 0 6一 10 7 1 2〔9」T u c k erK D a n d W i lk in ,T D,I n f e c t I m m u n,1 9 9 1,5 9:7 3一 7 8〔1 0 〕 R h i n B e t a l,G ao t r oen t e r o l C l in B i o l,1 9 8 8, 1 2 :A l l o(下转第 10 页 )。10。中国徽生态学杂志 1 99 6年第 8卷第 2 期P RL I E MI Y N A R R ES E A RCH O N TH E AI N T T U MO RF F E ECD I T A N M M U NO L O GLI F F C A E ECO F TF I BD IO B ACI T E R U MD AO L ES C E NI TS D M8O 5 4S T RI A NO N TH E MO US EWI TH H P E A TO C A RCI NO M A.Y i Qing, e t a l.D Pe t.of Micoerc o l o舒,D a l ia n M e d i c a l U n i ve r s i t夕,D a z ian 1 1 6 0 2 7A b s t r a c t T h e e f f e e t o f B i f id o b a e t e r i u m a d o l e s e e n t is D M 8 5 0 4 s t r a i n o n t h e g r o w t ho f t h e m o u s e w i t h t r a n s P l a n t a b l e h e P a t o e a r e i n o m a a n d i t s im m u n o l o g i e a l s y s t e mw a s s t u d ie d.T h e e f f e e t w a s ev a l u a t e d a e e o r d i n g t o f o l l o w in g in d ie a t o r: t h e m e a nt r a n s p l a n t a b le w e i g h t (M T W ) ; d e a t h r a t io n ( D R ) ; s u rv iv a l t im e ( S T ) a n d im m u n o-l o g ie a l t e s t.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h is D M 8 5 0 4 V a e e i n e in je e t e d b y s u b e u t a-n e o u s w a y e o u ld in h ib i t t h e g r o w t h o f t h e t r a n s P l a n t a b le m o u s e h e P a t o e a r e in o m aa n d a l s o p r o lo n g in g t h e S T a n d t h e l i v i n gr a t io,w h e t h er i t w a s in j e e t e d b e f or e o ra f t e r t h e i n o e u l a t io n o f t h e t u m o r e e l l s.B y t h i s in j e e t i n g w a y,w e f o u n d t h a tD M 8 5 0 4 V a e e i n e e o u ld e n h a n e e t h e m a e r o P h a g o e y t ie P h a g o e y t o s i s,t h e a e t iv i t y o fn e u t r a l k il le r e e l l,t h e r e p r o d u e in g r e s p o n s e o f t h e s p le e n l ym o p h o e y t e t o C o n A a n di n e r e a s e t h e e o n t e n t o f T N F 一 a i n s e r u m s t a t i s t ie a l l y.I t 15 s u g g e s t e d t h a t D M 8 5 o 4V a e e i n e p o s s e s s e s a e e r t a i n p r o m o t io n o n a n t i t u m o r e f f e e t a n d t h e im m u n o lo g ie a lm o d if in g e f f e e t.T h e r e s u l t s w e r e e f f ie ie n t.K e y w o r d s B i f id o b a e t e r i u m M a e r o p h a g e N a t u r a l k i l le r e e l l R e p r o d u e in g r e-s P o n s e t o C o n A T N F 一aA n t i t u m o r e f f e e t(上接第 53 页 )〔11〕 Se d d o n S V 。 n d 助r ri e l! 0 S P,J M ed M i e o b io l,1 9 9 2,3 6: 3 0 7一 3 1 1【12 〕 苏文金和 助盯 l io u x P,上海 实验动物科学,1 9 9 4 , 1 4 : 2 0 0一 20 3〔1 3 〕Bo 币e 110 5 P e t a l,R e c C l i n F o r u m, ,1 9 7 9,1:3 3一 3 5〔14 〕Bor r ie l lo 5 P e t 。 1,J M e d M i e o b i o l,1 98 8,2 5:1 9 1一 19 6[ 15 ] E, e i l la rd M e t a l,M o l M i e r o b io l, 1 9 9 3 , 7 : 3 7 1一3 8 1[ 16 ] Fo g h J e t a l,J N a t l C a n e e r R e s,2 9 7 7,5 9:2 2 1一2 2 6[ 17〕 Z w e ib a u m A e t a l,H a n d b加 ko f P h y s io l o g y VfBet h esda :A me 6 e a n P h ys io lo g y S 又 ie t y , 1 9 9 1 ,P P 2 2 3一 2 5 5[ 1 8〕 G a i l l a r d J L e t a l,C e l l,1 9 9 1,6 5;1 1 2 7一 1 1 4 -〔1 9〕 A u be l D e t a l,Inf ec t Im m u n, 1 99 1 . 5 9 : 1 2 90 一1 2 9 9[ 2 0 ] L e s u f f l e u r T e , a l,In t J C a o e e r, 1 9 9 1 , 4 9 : 7 3 1一7 3 7[ 2 1 ] Ka r sj la in e n T e : a l,I n f e e t I m m u n, 19 94 , 6 2:4 3 4 7一 4 35 5[ 2 2」Ma o u d a Ke t a l,M ie r o b i o l Im m u n, ,1 9 8 9,33 :2 8 7一 2 98[ 2 3 〕 K a w a t a T e t a l,F E M S M ie r o b i o l L e t t,1 9 8 4,24:3 2 3一 3 2 8[ 2 4 ] T ar e o k a A e t a l,J G e n M i e r o b io l,19 9 1,13 7:2 6 1一 2 6 7(收稿 日期: 9 5一 1 1一 7 )

艰难梭菌粘附的研究进展

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/119173/%e8%89%b0%e9%9a%be%e6%a2%ad%e8%8f%8c%e7%b2%98%e9%99%84%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6%e8%bf%9b%e5%b1%95.pdf?sequence=1&isAllowed=y

艰难梭菌粘附的研究进展

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository