刘广发

谭静

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云南大学学报 (自然科学版 )第 2 1卷 遗传学专辑盐生盐杆菌抗盐相关基因的随机克隆刘广发,谭 静(厦门大学 生物学系,福建 厦门 3 61 0 5)土壤盐渍化是限制农业生产的一个重要因素 ;据 统计全 世 界 约 有 盐碱地约 3.8亿 h澎,我 国1 亿 h时 耕地中约有 6 70 万 h时 是盐碱地,另外还有 33 3 万 hm Z 盐碱荒滩。在世界人 口剧增的今天,如何开发利用盐碱地受到各 国政府和科学家的高度重视,其中,加强对植物抗盐生理、生化研究,提高植物抗盐性,培育抗盐作物,已成为开发利用盐渍土壤的重要课题。我们用随机克隆的方法获得 了盐生盐杆菌抗盐相关的 D N A 片段,为今后研究植物的抗盐机理,培育能稳定遗传的抗盐作物新品种奠定 了良好的基础。粒经磷酸化后 与盐生盐杆菌的 D N A 片段 连接,获得重 组 质粒。以 重 组 质粒转化 感受态细胞E.ocl i JM I OI ; 然后 在含高盐 ( Na e l 浓度 > 0.9mo l/ L ) 平板和 An lp 一 X 一别一 IP T G 平板上分别筛选转化子,提取转化子 中的质粒。经 E通m H I酶切,电泳后初步判别插人 D N A 片段的分子量。1 材料与方法从饱和盐水中分离得到极端嗜盐的盐生盐杆菌 Y。提取该菌总 D N A,再经 Ba m H I 不完全酶切,获得随机 1)N A 片段。同时提取质粒 p uc gl,经 Ban 1H I 完全酶切后获得线性质粒 p uc gl,该质2 结果与讨论从数百个转化菌落中获得 了 3 个具有重组质粒的转化子。分别命名为 TSI,ST Z 和 5 1’3。它们中的盐生盐杆菌 Y D N A 的插入片段分别为 1.0,2.5和 3.S K b。这 3个转化子的最高耐盐性分别从 0.9 mo l / L NaC I提高到转化后 的 1.2,1.5 和1.4 mo l / L Na CI。上述结果初步表明,已克隆的 3个 D N A 片段中可能含有与抗盐相关的基因,进一步的研究正在进行中。霍乱毒素突变体和福氏 Za as d 基因缺失突变体的构建廖 翔,王恒梁,冯 尔玲,苏国富(军事医学科学院生物工程研究所,北京 1000 7 1)痢疾疫苗的研究是全世界都在关注的课题之一,目前痢疾疫苗研究的主要方向是构建减毒的活菌苗 ; 但作为活菌苗,其安全性与有效性 之间的矛盾很难协调,因此至今还没有很好的痢疾疫苗问世。至今普遍认为痢疾菌苗应该具有一定的侵袭力才行,本研究室曾用野生型福氏 Za 2457 T作出发菌株,构建 了a r o A 缺失突变体 ( R别 26 ) ;该突变体在豚鼠眼角膜试验中呈阴性,但仍具有侵袭 He la细胞的能力。本文在此基础上,构建其染色体a ds 基因全缺失的突变体,为用载体 /宿主平衡致死系统构建具有侵袭力的多价痢疾菌苗做好 了准备。首先,检定出有毒的野生型霍乱弧菌,从中扩增得到霍乱毒素 (C T ) 基因 ; 然后用体外定点诱变技术将其 63 位丝氨酸改为赖氨酸,获得

盐生盐杆菌抗盐相关基因的随机克隆

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/119636/%e7%9b%90%e7%94%9f%e7%9b%90%e6%9d%86%e8%8f%8c%e6%8a%97%e7%9b%90%e7%9b%b8%e5%85%b3%e5%9f%ba%e5%9b%a0%e7%9a%84%e9%9a%8f%e6%9c%ba%e5%85%8b%e9%9a%86.pdf?sequence=1&isAllowed=y

盐生盐杆菌抗盐相关基因的随机克隆

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