左正宏

桂慕燕

王学民

陈元霖

Xiamen University Institutional Repository

云南大学学报 (自然科学版 )第 2 1卷 遗传学专辑雄性半死亡期增寿率为 2 1.0 3%,尸< 0.005,平均寿命增加 14.47 %,尸< 0.025。雌性在 毛几。时增 寿 1 5.9 %,P ( 0.00 5,平 均 寿 命 增 加10·8 3 %,尸< 0.02 5。如果将果蝇胚养密度提高些,如 4 0 只 /管,则增寿率还倍增。目前,已发现 了果蝇的长寿基因,长寿也往与抗氧化有关,果蝇如转人上述有关基因可以延长寿命 6 % 一 30 %。长寿又 往往与抗逆性有关,如:抗干早,抗饥饿,抗杀虫剂者也长寿。国内外学者用果蝇作药物实验者众,国外学者多只用雄性,认为雌性影响因素太多不准。美国的 H.R.M asle做过维生 素 A,乳酸和葡萄糖酸,牛磺酸 Tauri ne,对果蝇寿命的影响,国内学者做过:刺玫果 R oas dva 而 ca 干粉,东莫蓉碱,山苦茶及从云芝 伽 ri olu s ve sr ic ol o r 中提取的云芝多糖等 ; 还有将中成药:肝肾宁,心肾灵,录脂醒和双宝素等进行实验。其中唯肝肾宁似为显著,但其方法叙述不清 (如:取样随机吗? 培养密度 ? 何时给药? 只用雌性实验?) 其平均寿命增加可有 22 %,但 尸< 0.01。而维生素 A 对幼虫有效,对成虫无效。云芸多糖则对雌果蝇有效,P < 0.05,对雄果蝇无效。若与上述实验相 比,蚂蚁干粉的半死亡期的延长寿命效果是相当显著的。致谢:感谢上海 昆虫所曹梅讯教授给予蚂蚁干粉,特此致谢。蚕丝昆虫分子系统学与物种分子标记研究初报桂慕燕,左正宏,陈元霖,王学民(厦门大学细胞生物学研究室,厦门 3 6 10 5)蚕丝昆虫一般是指那些能在体内合成、分泌并吐出蛋白质纤维的昆虫,主要是鳞翅 目 ( Lc p i-d o p t e ar ) 家蚕蛾科 ( E劝n bl ys idae) 和 蚕蛾科 (也叫大 蚕蛾科 撇u而dde) 中的一些 昆虫,它们有重要的经济价值。从分子水平上研究这类昆虫的遗传特性,对于丰富生物进化和物种演化理论,革新蚕的育种技术,促进蚕丝业的发展都有重要意义。本文报告对于不同种类的蚕丝昆虫基因组D N A 进行 R A P D 检测的结果,并探讨蚕丝昆虫分子系统学与物种分子标记问题。1 材料与方法1.1 材料 采用家蚕蛾科和 天蚕峨科的 5 种蚕。家蚕 ( 五如阴 6笋 m叭 ),代表品种为 7 芙 义 湘九:野桑 蚕 ( B,nar nda r i n a ) ; 蓖 麻 蚕 ( 外“ “口m 诬a卿ht 故),代表 品 种 为镇 ;6 柞 蚕 ( A ut he,~加 r二少 ),代 表 品 种 为 方 黄 2 ; 天 蚕( A.Ya二 a n 。 诬)。1.2 方法1.2.1 基因组 D N A 的提取 从虫期蚕蛹提取,具体步骤参见我们已发表的文章 【刘春宇等,遗传,19 98,2 0 ( 2 ): 5一 8 ]。1.2.2 RA P D 检测 引物采用 O伴orn公司出品的试剂盒,标号为OP I一 01 至 O P I 一 20 和 (O r W一 01 至 O P 万 一 20),总共 40 个引物。P C R 反应条件参见我们已发表的文章 (刘春宇等,同上 )。R A PD 产物经 1.4 % 的琼脂糖凝胶电泳分离,在多色荧光凝胶成像仪上分析。1.2.3 数据处理 在 R A P D 扩增图谱上,将重复性强、条带清晰的片段记为“1” ,将缺失或弱带记为`,0” ,构建“1” `,0”信息矩阵。2个样本间的遗传距离 ( D 的计算公式: D 二 1一 Fo F 为两个样本 RA P D 标记的共享度,计算公式为 F 二ZNx 夕 ( Nx十场 ),在此,N勿是样本 x 和样本少 CR 扩增分子量相同的 D N A 片段总数,Nx 和哑分别是样本x 和样本 少CR 扩增产物的 D NA片段总数。根据遗传距离 ( D ),利用 U P GMA 聚类分析法构建分子树。2 结果与讨论在采用 40 个随机引物中,有 2 7 个引物的扩增图谱呈现重复性强而且清晰的条带。取这 27 个第 1 2卷 遗传学专辑 云南大学学报 ( 自然科学版 )引物分别对 5种蚕的模板 D NA进行扩增,总共出现 5 36 个 D N A 片段,每个引物平均数为 19.9个,变动在 1 一 2 8 之 间。每个片 段的大小在0.29 k b 至 2.6 7 kb 之间。在 5 3 6 个片段 中,可变 片段 5 2 0 个,占总数的 9 7%,完全相 同的片段 16 个,表现 出丰富的多态性。家蚕与野桑蚕的遗传距离 D = 0.3 76仇 天蚕与柞蚕的 D 二 0.4 7 0 ;7 蓖麻蚕与柞蚕和天蚕的 D值分别为 0.6 320 和 0.7 00 ;7 家蚕与蓖麻蚕的 D= 0.7 4 88。据此构建 了它们的分子树。这几种蚕在分子树上与普通分类学上表示 的亲缘关系是相吻合的。扩增图谱比较结果还表示,各种蚕都有各 自独特的 D N A 片段,这种片段数 目少者如野桑蚕为 16 个,多者如蓖麻蚕达 “ 个。这种片段可作为物种的分子标记。研究表明,由于蚕丝 昆虫基因组 D N A 随机扩增长度多态性比较丰富,因此在进行亲缘关系和物种鉴别研究中,采用基因组 R A P D 分方法 比采用核型分析方法 (陈元霖等,1993 ) 和线粒体D N A 的 R FPL 分析方法 (陈元霖等,1997) 具有简便、快捷的优点,尤其在近缘种鉴别和种下分类中应用 R A P D 方法,有可能解决应用普通分类法所难以解决问题。家蚕转座子表达载体 p s V H K I.4 的构建与 gPf 瞬时表达的初步鉴定肖巧 学, , 黄亚 东` ,曹 阳’ ,黄 自然,阮 茜 1,刘 良式2 , 刘文华 2,余炳球 3,黄 星光 3,余爱群3,向钟怀 4,香 成4 , 周泽场4( 1.华南农业大学蚕桑生物技术实验室,广州 51 〔场42 ; 2.中山大学生命科学学院,广州团公司,广州 51 0 18 ;0 4.西南农业大学蚕桑学农业部级重点实验室,重庆 40 7 16)王春新2,51 02 75 ; 3.广东省丝绸集采用非转座子载体系统进行哺乳动物转基因研究已取得相当进展。对果蝇的转基因研究表明,昆虫采用非转座子载体系统难以获得能稳定遗传的转基因后代,而用转座子载体系统则可显著提高外源基因在昆虫受体基因组的整合频率。但是果蝇转座子构建的载体,难以转化异源昆虫。本研究利用家蚕基因组 中发现的 kl.4 转座子序列、黑腹果蝇 ( D or os P五诬la n : e l a n o g a s r e r )sP7 0强启动子 (昆虫通用启动子 )、木母绿色荧光蛋白报告基因 ( Gr e e n Fl uor ese e n e e P or t e in g e n e,gf p )等遗 传 元 件,构 建 家 蚕 转 座 子 表 达 载 体p SV H K I.4,希望今后能发展为高效的载体工具,进行家蚕转基因遗传、转基因育种、转基因工程蚕研究。对 p s v HK I`4 载体的构建及鉴定的结果如下:1 中间载体 一 重组质粒 pGC H 的构建及鉴定根据 坛夕0 启动序列设计一对引物,以黑腹果蝇总 D N A 为模板,P CR 扩增得到 坛夕 0 启动子序列。经与试犯M 一 T 载体连接获得抓犯M 一 T一 hs p 70。对含有蜘 的质粒p cD N A3一 G F p,先用飞1 1+ K Pn l 双酶切,去掉它的 S P6 和 竹 启动子。然后用 B g l l l + K p n l 双酶切将 坛p 7 0 启动子从 P G E M 一 T 一 hS 价O上切割下来,与 p江N) A3一GF P 连接,经酶切、P CR 鉴定得到重组载体p CG H,完成 坛价 0 启动子和咖 的拼接。2 中间载体 一 pKs I.4 的构建及鉴定质粒 p U K I.4 含有 k l.4 转座子序列,用Pvu l l 酶切 UP K I,4,将包含 k l.4`的 1.7k b 切割下来,再将 1.7 k b 片段插人真核表达载体 p SVL的 Pvul l 位点处,经酶切分析,筛选得到一个中间载体 p SK I.4。用通用引物对 p SK I.4 的 k l.4

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