周以侹

孟金陵

许莉

郑文竹

Xiamen University Institutional Repository

第 21 卷 遗传学专辑 云南大学学报 (自然科学版 )º效应期,各种刺激信号在此阶段转化为一种中 心信号 ; »细胞死亡期 ( JABS,1999)。马铃薯花粉四分体原生质体的分离王 蒂,司怀军,王 清(甘肃农业大学农学系,兰州 7300 70花粉原生质体具有单倍体与原生质体的双重优点,是植物性细胞工程中的重要实验体系。70年代初期,有些学者就开始 了花粉原生质体的研究,但由于受到支术上的限制,直到 80 年代中后期才有所突破。目前,已从烟草、棉花、百合科、石蒜科、芸墓属等数十种植物的花粉分离得到 了原生质体。马铃署作为原生质体研究的模式作物,至今尚未见花粉原生质体的研究报道。我们以四倍体马铃薯的花粉四分体为材料,对影响原生质体分离的主要 因素进行 了研究,现将研究结果简报道如下。采集正处于减数分裂 四分体时期的花蕾,用70 %酒清消毒 30 5,然后 用 0.1% 升汞消毒 3一 5而n,无菌水冲洗 5 一 6 次。在无菌条件下取出花药并横切成 2一3块,加人少量无菌水,轻轻挤压以释放出小抱子。用 200 目不锈钢网筛过滤,滤液在 so r/ 而n 下离心 5 m in,用吸管吸去上清液,留下沉淀 物。加人过滤 灭菌的酶 液 10 n止,酶液组成为 R A 培养基的大量及微量元素 0.1% 2一 N 一 吗琳乙烷磺酸 (M ES) 0.01 % 酪蛋白水解物 ( CH )、1% 蜗牛酶 ( Sn a ilase )、0.5 % 崩溃酶(Dr is d as e )、16 % 蔗糖或 18 % 甘露醇。用手轻轻揉搓离心管,然后转人 60 ~x 15 ~ 培养皿中,用 Pa ra fil m 封 口,置 于可调 温的旋转式摇床上,在 (25 土 1) ℃,ZO r/ 而n、黑暗条件下酶解 3一 5h,酶解后吸取酶液至 15 m L 离心管中,在 so r/而n 下离心 s m in,弃去上清液,用洗涤液洗涤 2次后,再用 R A 培养基洗涤 1 次,即可得到较为纯净 的原生质体。原 生质体 的最 高产量 可 达65.4% 。 用 ol yrn p us A H 一 2型显微镜,激发滤光片为 420 nm,阻挡滤光片为 530n m,0.1% 荧光增白剂 (Q lco fi o wer w hi te) 鉴定脱壁效果表明已完全脱去 了细胞壁。用 0.01 % 荧光素二醋酸醋(FD A ) 荧光检测表明分离得到的原生质体具有生活力。马铃薯花粉原生质体的成功分离,将会为单倍体培养、体细胞融合和遗传转化提供新的实验材料,从而推动马铃薯生物技术研究的发展。不同物种间共用 SSR 引物的研究周以 供,,郑文竹 1,许 莉‘, 孟金陵2( 1.厦门大学生物系,厦门 36 10 0 5 ; 2.华中农业大学农学系,武汉 430 07 0邓R ( Si m 讨e se q u en ce R eP ea t,简单序列重复) 标记亦称微卫星,是指由 1一 6 个碱基组成的基本序列串联重复组成的短片段,如 ( G T ) n,(以TA )n等。人们可根据其两侧独特的序列设计引物,进行 PCR 扩增。由于该 技术简便、快速、稳定性高,在基因组学研究中,已成为取代R FLP 的第二代分子标记。开发 赘R 引物常用的方法是先建一个 D NA 文库,用各种简单重复序列作为探针去筛库。得到阳性克隆子进行测序后,根据所测的序列设计引物。这就需要较多的资金云南大学学报 (自然科学版 ) 第 21 卷 遗传学专辑投入,而且工作量大,目前只在少数模式植 /动物中得到大量开发。近几 年来,随着基因组计划的展开和大规模测序工作的进行,人们可以利用互联网,在 GE N EB AN K 中查到简单重复序列及其两端序列来设计引物。但这种方法只有在研究得比较彻底的拟南芥、水稻等植物中才可行。为了在更多物种 中以较少的投人应用 SS R 标记,进行基因组学研究,我们尝试在不 同的物种间通用 SS R 引物。这样,从少数模式生物 中获得的遗传信息可以迅速地应用到许多经济价值大,但基础理论研究比较薄弱的作物中去。根据前人报道,合成了 5 对甘蓝型油菜 S SR引物 Bn9 2A,Bn6 AZ,B n 72A,Bn8 0/ 3,B n 38A,对应 简单重复序列分别为 (A )28,(G AT A )4 ,(T A A )5 (。气)9,(G A )15 (G G T )2 , (T G )一1。对分属不同物种 的 12 份材料 D N A 进行 PC R 扩增。其中包括 2 个水稻品种、1 个棉花品种、2 个芥菜品种、1 个白菜品种、2 个玉米品种、2 个甘蓝型油菜品种、1 个柑橘品种 以及 1 种十字 花科野生植 物 M dri ca。成a.爪te;1 5。采用 的 PCR 循环 为“To uc hdo w n, ,PCR 程序,复性 温度 为 68 ℃ 到5 8℃。该程序反应特异性高,少有假阳性现象发生。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳,结果显示,扩增产物量大,条带清晰,而且所有 12 份材料用 5对 S SR 引物均扩增出 了大小一致的主带。主带大小分别为 1 1 0 一 14 5 bp (Bn 92A ),2 4 0 一 30 0 bp(Bn 72A ),90 一 100 bp (Bn 6AZ ),1 00 一 150 bp(Bn 80 / 3 ),1 50 一 2 00 bp (Bn 38A ),与文献报道中在甘蓝型油菜扩增出的 S R 大小完全一致。另外,大部分材料还扩增出了一些大小不同的弱带。由于本研究所使用 的引物 长度都有 2 0 个碱基左右,复性温度控制得相 当高,这就保证了反应的特异性,基本可以杜绝假阳性的发生。本研究结果说明,各物种基因组 间存在相当大的相似性,甘蓝型油菜的 S S R 引物可以在其他物种中进行扩增。1998 年国外有报道用拟南芥SS R 引物在同属十字花科、遗传距离较近的甘蓝型油菜中进行扩增,但在遗传差异较大、属于不同科的物 种 间共用 SS R 引物,本文还是首例报道。这样,只需直接从少数模式生物中利用现成的引物,没有 必要对所有物种 进行 S SR 引物开发,可以大大节省资金和人力。本研究所用材料包括主要粮食作物的玉米、水稻,油料作物甘蓝型油菜,蔬菜作物白菜、芥菜以及重要经济作物柑橘、棉花。在上述作物间能够互相利用 SSR 引物,无论对基础理论还是遗传育种研究都具有重要意义。节节麦不同分裂时期和阶段的 G 一带核型及其变动性分析佘朝文1 , 宋运淳2(1.怀化师范高等专科学校,湖南怀化 4 1800 8 ; 2.武汉大学生命科学院,武昌 4 3() 07 2)采 用 改 良 A SG 法 对 节 节 麦 (T ri ticu爪ta u se五￡泛Ta usc h 或 Ae g 诬扔P、 、q‘rrosa L.) 的 (子-带核型及其变动性进行 了研究。建立 了节节麦有丝分裂中期和 3 个染色体凝缩程度不同的早中期(按染色体凝缩程度从低到高分别称为早中期 工,1,m ) 染色体的 G 一 带核型。中期和 3 个早 中期阶段的染色体全长都显示 了清晰的、密切邻近的多重 G 一 带带纹。每条染色体的着丝粒和随体都很清晰,并在它们的两侧都有带纹分布。G -带带纹有粗细差别,深浅也有不同,但总的来看,带纹细窄、大小较相 近,带间区小,分布较密集而均匀。不论哪个时期和阶段,同源染色体的带纹数目分布位置基本一致,可 以较准确地配对。从早 中期 工,n,m 至中期,染色体的带纹数目明显 减少,带纹总数分别减少 了 41 %,36 %,28 %。带纹的减少表现在各染色体的长、短臂上。

不同物种间共用SSR引物的研究

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/119548/%e4%b8%8d%e5%90%8c%e7%89%a9%e7%a7%8d%e9%97%b4%e5%85%b1%e7%94%a8SSR%e5%bc%95%e7%89%a9%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

不同物种间共用SSR引物的研究

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository