本实验采用VIDAS、API20E和SN0170-92三种不同的检测方法对CNCA举行的食品中常见致病菌能力验证计划中提供的一份盲样进行检验,总结对比了3种不同检验方法对沙门氏菌检测的各自优缺点

周赞虎

张永祥

杜娟

林俊君

田蕴

郑天凌

Xiamen University Institutional Repository

微生物学通报                                              APR 20, 2008, 35(4): 648~650       Microbiology                                         © 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@im.ac.cn                                                                              * 通讯作者：Tel: 0596-2226653; : zzh_523@163.com  收稿日期：2007-09-20; 接受日期: 2007-11-29 生物实验室 三种检测方法对样品中沙门氏菌的检测结果比较 周赞虎 1, 2  郑天凌 1*  田  蕴 1  张永祥 2  杜  娟 2  林俊君 2 (1. 厦门大学生命科学学院  厦门  361005)  (2. 漳州出入境检验检疫局  漳州  363000)   摘  要: 本实验采用 VIDAS、API 20E和 SN 0170-92三种不同的检测方法对 CNCA举行的食品中常见致病菌能力验证计划中提供的一份盲样进行检验, 总结对比了 3 种不同检验方法对沙门氏菌检测的各自优缺点。 关键词: VIDAS, SN 0170-92, API 20E, 沙门氏菌  Comparison of the Detection Result of Salmonellae  in Samples by Three Methods  ZHOU Zan-Hu1,2  ZHENG Tian-Ling1*  TIAN Yun1   ZHANG Yong-Xiang2  DU Juan2  LIN Jun-Jun2 (1. School of Life Science, Xiamen University, Xiamen 361005)  (2. Zhangzhou Entry-exit Inspection &Quarantine Bureau, Zhangzhou 363000) Abstract: A Salmonellae sample offered by CNCA was detected by VIDAS、API 20E and SN 0170-92 re-spectively in the experiment. Each detected methods’ advantages and disadvantages was discussed in the paper.  Keywords: VIDAS, SN 0170-92, API 20E, Salmonellae 沙门氏菌主要通过动物的消化道传染致病, 可引起伤寒与副伤寒(统称肠热症)、食物中毒、败血症、慢性肠炎等。由于沙门氏菌在自然界广泛存在, 且对人类的健康具有很大的威胁, 故在卫生检测要求中 , 世界各国普遍规定食品中不得检出沙门氏菌。目前常用的检测方法有：利用生化反应的常规检验方法, 如国标法(GB)[1]和进出口商品检验行业标准(SN)[2]等; 利用酶联免疫技术的 VIDAS法[3]等; 还有利用分子生物学如 PCR法[4]等。各种方法都存在一定的利弊, 本实验室在 2006年的 CNCA“食品中常见致病菌能力验证 (CNCA-06-02)”中应用VIDAS、SN 0170-92和 API 20E 3种不同的检测方法检出了 1例沙门氏菌, 现报告如下： 1  材料与方法 1.1  仪器设备及试剂 1.1.1  VIDAS 法：mini-VIDAS 由法国生物梅里埃公司制造, VIDAS SLM试剂盒及M肉汤也由法国生物梅里埃公司提供。 1.1.2  API 20E法：API LAB软件一套, API 20E试剂盒由法国生物梅里埃公司制造提供。 1.1.3  SN 0170-92法：所需的常规培养基、生化试周赞虎等: 三种检测方法对样品中沙门氏菌的检测结果比较  649  http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn 剂和血清等均由北京陆桥技术有限责任公司生产 提供。 1.2  检验依据 SN法依据 SN 0170-92。 VIDAS 法的操作按厂家规定的操作方法程序执行。 API 20E 法的操作按厂家规定的操作方法程序执行。 1.3  测试步骤 1.3.1  SN 0170-92测试步骤详见出口食品沙门氏菌属检验方法[2]。 1.3.2  VIDAS 法检测步骤：1) 前增菌：无菌操作取 25 g样品于 225 mL缓冲蛋白胨水(BP)中,  37℃培养 24 h。2) 选择性增菌：从前增菌液中取 10 mL加入到 100 mL 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB)中, 42℃培养 6 h~8 h。3) 后增菌：从四硫磺酸钠煌绿增菌液中取 l mL增菌液转接到 10 mL M肉汤, 42℃培养 18 h。4) 样品处理：从 M肉汤中取 l mL加入洁净的空试管, 100℃水浴 15 min。4℃保存剩余 M肉汤以便对 VIDAS沙门氏菌测定阳性结果进行确证。5) 上机检测：从水浴后的 M肉汤中取 0.5 mL培养液, 加入VIDAS检测试剂条的加样孔内, 上机检测, 45 min后仪器直接打印出检测结果。 1.3.3  API 20E法检测步骤：1) 前增菌和选择性增菌：同 1.3.2 的(1)、(2)。2) 分离培养：无菌操作, 用接种环挑取选择性增菌培养液, 分别划线于亚硫酸铋琼脂平板和胆硫乳琼脂平板各一个 , 37℃培养  24 h±2 h。3) 从分离平板挑取可疑单菌落制成菌悬液, 按操作说明书指导分别滴加于 API 20E 试剂条各个微量生化管内, 37℃培养 24 h±2 h。4) 滴加附加试剂, 判断各生化管的反应结果是阳性还是阴性, 并转化成相关的读数。5) API LAB软件分析得出最终结果。 2  结果和讨论 2.1  结果 3种方法检测结果如下： SN 0170-92 法检测结果为三糖铁琼脂斜面产碱、底层产酸、产气、不产硫化氢, 赖氨酸脱羧酶试验、尿素酶试验、V-P 试验、氰化钾试验、吲哚试验、丙二酸钠试验、卫矛醇试验均为阴性, 血清学试验结果为“O”因子血清分群阳性, 最后结果判定为沙门氏菌阳性。   API 20E法鉴定结果见表 1。  表 1 样品在 API-20E试条中的生化反应结果 Table 1 The biochemical result of the sample with API-20E system ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO − − − + − − − − − − − + + − SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX        + + − + − + −         API LAB软件分析结果为：甲型副伤寒沙门氏菌; ％id为 99.5, T值为 1, 很好的鉴定结果。 VIDAS 法仪器输出的判定结果为沙门氏菌  阳性。 3种方法优劣对比如下： 准确性：SN 法和 VIDAS 法均为沙门氏菌阳性(鉴定到种), API 20E法结果为甲型副伤寒沙门氏菌(不但鉴定到种还直接鉴定到型)。 时耗：SN法耗费时间约为 100 h左右; API 20E经历了增菌−分离培养−生化试验 (试剂条 ) −API LAB 软件分析共需约 73 h; VIDAS 只需经历增菌−样品处理(100℃ 15 min)-上机, 耗费时间约为 49 h即检测出结果。如果扣除各种方法前面的增菌步骤所耗费的时间(都在 48 h左右), 差异更加明显：SN法约 73 h>API 20E约 49 h>VIDAS只需约 1h(如果包含后增菌步骤也只需 19 h)。 检测步骤：除去各种方法都要的增菌培养外 , SN 法最终的结果是经历了增菌−分离培养−筛选试验−生化试验−血清学检测,  API 20E 经历了增菌−分离培养−生化试验(试剂条)-API LAB 软件分析 , VIDAS 只需经历增菌−样品处理 (100℃  15 min)-  上机。 2.2  讨论 目前, 我国出入境检验检疫行业标准中的沙门650 微生物学通报 2008, Vol.35, No.4   http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn 氏菌检验方法(SN 0170-92)是依靠生化反应和血清学反应对沙门氏菌进行检验鉴定 , 不但检测周期长、而且生化试验程序复杂、所需试剂繁多。API 20E基本延续了传统方法, 但在生化试验上做到了微型化和集约化, 在一个试剂条上集中了 20种生化反应, 一次性的完成了所有的生化试验。VIDAS则是采用了现代的酶联免疫荧光技术(ELFA), 它运用的是结合抗体的荧光化合物, 当用荧光标记的高度专一性单克隆抗体与沙门氏菌抗原反应时, 形成的荧光物质可通过仪器检测出来, 从而达到对沙门氏菌进行快速筛选; VIDAS法已经获得了美国 FDA认可。 以上 3 种沙门氏菌检测方法, VIDAS 法操作步骤最简单 , 时耗最短 , 效率最高, 而且该法不需纯培养, 不容易出现漏检, 但其仪器设备和耗材都较贵, 而且据美国官方分析化学师协会(Association of Official Agricultural Chemists, 简称 AOAC)的报告[3]称, VIDAS 法检测沙门氏菌具有一定的假阳性, 阳性结果一般需用传统方法确认; API 20E法集约化了SN 0170-92 法的生化试验和后续的血清学反应, 而且可以直接鉴定到型, 在步骤、时耗、效率上在 3种方法中居中, 但更精确; SN 0170-92 法操作步骤最繁 , 时耗最长 , 效率最低, 但它是一种传统的沙门氏菌鉴定方法, 在国际上被广泛承认, 是鉴定沙门氏菌的基准方法, 如出现争议, 应以此法为基准。 参 考 文 献 [1] 食品卫生微生物学检验 -沙门氏菌检验 . GB/T 4789. 4-2003. 中华人民共和国国家标准. [2] 出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法 . SN 0170-92. 中华人民共和国进出口商品检验行业标准. [3] 焦彦朝译, 连宾校. 食品中沙门氏菌酶联免疫荧光分析(VIDAS Sa1monella[SLM] Assay)筛选方法. 口岸卫生控制, 2001, 6(4): 44−46. [4] 陈弟诗, 郭万柱, 徐志文, 等 . 猪霍乱沙门氏菌的分离与鉴定以及 PCR检测方法的建立. 安徽农业科学, 2007, 35(20): 6020−6023.    编辑部公告 中国科学院微生物研究所期刊广告部成立 中国科学院微生物研究所期刊广告部于 2007 年 3 月正式成立, 已取得北京市工商管理局正式批准的广告经营许可证(京海工商广字第 8107 号)。广告部代理《生物工程学报》、《微生物学报》、《微生物学通报》、《菌物学报》四个期刊的广告经营业务, 此四种期刊均为中国自然科学核心期刊, 国内外公开发行, 主要报道微生物学和生物技术领域的最新研究成果和研究动态, 已被美国化学文摘(CA)、生物学文摘(BA)、医学索引(MEDLINE)、俄罗斯文摘杂志(AJ)及《中国学术期刊文摘》、《生物学文摘》等国内外著名数据库和检索期刊收录, 是促进国内外学术交流的重要科技期刊。 广告刊登内容主要包括大型生化仪器(如显微镜、离心机、色谱仪、无菌操作台、大、中、小型发酵罐)、设备耗材(如 PCR仪、细胞生物反应器、微量移液器、离心管、杂交膜)及生化试剂(如各种酶、载体、试剂盒)等的产品宣传信息, 也可以发布生物技术人才招聘信息、会议消息、以及与生命科学有关的各类服务信息。广告部以严谨、诚信为原则, 愿与从事生物技术产品生产与销售的各类厂商和公司精诚合作 , 共同发展。如有刊登广告的需要 , 欢迎与我们电话或email联系获取各刊版位及报价信息！也可以登陆各刊网站, 了解更多详情。  提    示：从 2007年起, 各公司与此四刊签订的广告费用请汇入以下新账号： 收款单位：中国科学院微生物研究所 开户银行：中国工商银行北京分行海淀西区支行 帐    号：0200004509089117425 中国科学院微生物研究所·期刊广告部 联系电话：010-64807336; 010-64807521 联系人：武 文  王 闵 电子信箱：gg@im.ac.cn  网    址：http://journals.im.ac.cn 

三种检测方法对样品中沙门氏菌的检测结果比较

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