天然红树林土壤微生物大片段宏基因组文库的构建

Abstract

采用改良及优化后的原位裂解法提取红树林土壤环境DNA,通过脉冲场电泳图谱显示所得DNA片段主要集中于23~50kbp范围,表明大片段DNA在总DNA中的比率明显提高;对改良后的原位裂解提取法与不同DNA纯化方法的组合进行比较分析,确定电洗脱为最佳纯化方法;运用改良后的原位裂解提取法与电洗脱纯化法联用实验方案,构建了4个季节天然红树林土壤Cosmid宏基因组文库.随机挑取克隆子,提取质粒后经BamHI酶切验证,平均插入片段均大于35 kbp,且片段类型各不相同,推测该文库至少包含了335 Mbp潮间带微生物基因组信息.该方法的建立使得开发红树林湿地生态系统的特色微生物资源成为可能,并为探索其它生境的未培养微生物资源提供借鉴