为探讨云南白药对血小板活化的影响 ,应用单克隆抗体法 ,并用流式细胞仪对 2 0 6例男性腹股沟斜疝患者血小板活化分子标志物进行检测 ,同时检测血浆凝血物质和 D-二聚体含量。结果显示 :服药组血小板明显活化与对照组比较有显著性差异 ( P0 .0 5 )。结论 :云南白药能增加血小板活化 ,促进局部止血 ,但它不影响凝血物质和 D-二聚体的含量 ,不增加血栓形成的危险

罗琪

Xiamen University Institutional Repository

云南白药对血小板活化的研究罗　琪(厦门大学医学院第一临床学院,福建 厦门 361004)摘要: 为探讨云南白药对血小板活化的影响,应用单克隆抗体法, 并用流式细胞仪对 206 例男性腹股沟斜疝患者血小板活化分子标志物进行检测, 同时检测血浆凝血物质和 D-二聚体含量。结果显示:服药组血小板明显活化与对照组比较有显著性差异(P < 0. 05) ,凝血物质和 D-二聚体与对照组比较无差异(P > 0. 05)。结论:云南白药能增加血小板活化, 促进局部止血,但它不影响凝血物质和 D- 二聚体的含量, 不增加血栓形成的危险。关键词: 云南白药;血小板活化; 流式细胞术中图分类号: R285. 6　　文献标识码: A　　文章编号: 1004-5627( 2004) 02-0012-03收稿日期: 2004-01-08作者简介:罗琪( 1958—) ,主任医师,博士。　　云南白药具有显著的止血愈伤, 活血散瘀, 消炎消肿,排脓去毒等功效。随着对云南白药研究的深入, 已知云南白药的止血功能主要作用于血小板。我院自 2000年 1月至 2002年 1月应用抗血小板单克隆抗体法, 对 206 例病人进行云南白药对血小板活化状态影响的研究,并利用流式细胞仪测定它们的表达,探讨云南白药对血小板活化对凝血的影响。1　资　料1. 1　一般资料　2000年 1月至 2002 年 1 月我院住院手术的 206例男性腹股沟斜疝患者, 年龄14～72岁,平均 36. 2±5. 6岁。入院检查血生化、血小板数、凝血 4项、纤维蛋白原含量正常, D-二聚体( - )。1. 2　分组　按入院先后进行编号,随机从 206份药中抽取 1份药,服药后解密。服云南白药的为用药组( A 组) ,服空胶囊安慰剂的为对照组( B组) ,各 103例。1. 3　检测指标　抗 P-选择素 ( CD62p )、抗凝血酶敏感蛋白( P10)、血小板数量、凝血 4项、纤维蛋白原含量、D-二聚体、手术出血和伤口肿胀情况。1. 4　材料和仪器　异硫氰酸荧光素( FIT C)标记的鼠抗人 P-选择素( CD62p-FITC)及阴性对照羊抗鼠 IgG1( IgG1-FIT C) ; R-藻红蛋白( PE)荧光标记抗人凝血酶敏感蛋白( P10-PE)和阴性对照羊抗鼠抗体( IgG1-PE) , 均由法国国际免疫公司生产。美国 Epics-XL 型流式细胞仪由美国Coul-ter 公司提供。2　方　法2. 1　服药方法　入院抽血后, A 组口服“云丰”牌云南白药胶囊 0. 5 g /次, 4次/ d, 连服 3 d; B组服空胶囊,用法同 A 组。2. 2　测定方法2. 2. 1　取样　患者入住当天、服药后 3 d 和手术1 d上午 8时各用肝素化塑料注射器抽肘静脉血3 ml, 加入 2%依地酸二钠( EDTA -2Na)抗凝送检。2. 2. 2　多血小板血清制备　抽肘静脉血 3 m l,EDT A-2Na 1∶9抗凝, 离心( 800 r / min) 5 min,取上层血清即为富含血小板血清, 调整血小板数为 109/ L , 4℃保存时间不超过 24 h。2. 2. 3　免疫反应　取 2支试管,均加多血小板血清 500 l ,再分别加入异硫氰酸荧光素( P ITC)标记的鼠抗人 P-选择素 ( CD62p-FIDC)和 R-藻红蛋白 ( PE )荧光标记抗人凝血酶敏感蛋白( P10-PE)工作液各 20 l; 另取 2支试管作对照组, 各加入阴性对照羊抗鼠单抗 IgG1-FIT C、IgG1-PE工作液各 20 l, 均避光反应 30 min, 离心( 2000r/ m in) 15 m in, 磷酸缓冲液( PBS) 2 m l漂洗,最后加入 PBS 500 l待测。2. 2. 4　流式细胞仪检测　上机后收集 2万个血小板, 测试完后在 Macintosh 650 计算机上用CELL QU EST 软件( Coulter 公司产品)分析数据。血小板CD62p及 P10含量以其阳性血小板百分率表示,计算方法如下:12福建中医学院学报 2004 年 4 月 第 14 卷 第 2 期Journal of Fujian College o f TCM April 2004, 14( 2)血小板 CD62p(或P10)含量=CD62p(或 P10)阳性血小板CD62p(或P10)阳性+ 阴性血小板×100%- 非特异法合细胞%2. 3　观察术中出血情况、出血量。术后观察伤口肿胀情况, 分为 3度, 1度: 伤口轻度肿胀属正常创伤性肿胀; 2度:伤口明显肿胀并见皮下瘀血; 3度:伤口重度肿胀, 缝线内陷看不见, 术侧阴囊明显肿大,暗紫色,表皮发亮。2. 4　统计学方法　数据用 x-±s 表示,均数间比较用 t 检验。3　结　果服药后 3 d血小板明显活化, CD62p 和 P10与安慰剂组比较 P< 0. 01,有显著差异,而服药前2组无差异,手术后 2组亦无差异。服药组手术出血量明显比对照组轻, t= 2. 56, P < 0. 05有显著差异。凝血物质和降解产物,服药组与对照组比较无差异, t< 1. 26, P> 0. 05。见表 1、2、3。表 1　CD62p、P10 表达的变化比较( x-±s)组别 n CD62p(% ) P10( % )A 组 服药前 103 1. 65±0. 57 0. 97±0. 36服药后 3 d 103 9. 28±4. 161) 2. 30±1. 821)手术后 103 8. 36±2. 15 2. 18±1. 12B 组 安慰剂前 103 1. 55±0. 62 0. 96±0. 48安慰剂 3 d 103 1. 60±0. 33 0. 99±0. 21手术后 103 9. 02±3. 10 2. 23±1. 62　　注:与 B组服安慰剂 3 d比较, 1) P < 0. 01表 2　术中及术后伤口出血、肿胀比较组别 n手术出血量( g)伤口肿胀1 度 2 度 3 度A 组 103 8. 1±1. 11) 81 22 0B 组 103 16. 2±4. 6 42 58 3　　注:与 B组比较, 1) P < 0. 05表 3　凝血物质和降解产物比较( x-±s)组别 n血小板数( 109/ L )凝血 4 项纤维蛋白原量( g / L )D-二聚体A 组 服药前 103 160±30. 5 正常 3. 28±0. 64 ( - )服药后 3 d 103 163±34. 6 正常 3. 69±0. 41 ( - )手术后 103 235±20. 3 正常 3. 22±0. 93 ( - )B 组 安慰剂前 103 156±28. 3 正常 2. 98±0. 78 ( - )安慰剂 3 d 103 158±31. 2 正常 3. 15±0. 83 ( - )手术后 103 206±23. 8 正常 3. 15±0. 87 ( - )4　讨　论云南白药由多种中草药组成, 对外伤止血止痛,活血散瘀,已被大家公认。云南白药有类似凝血酶的作用, 它激活血小板参与凝血过程。本文利用单克隆抗体法和流式细胞术( FCM )对 206 例患者用药前、手术前、手术后血小板膜 CD62p 和P10的表达进行检测, 更准确地反映血小板的变化。血小板活化后释放出多种分子标志物。近年研究发现 CD62p、P10是最具特异的血小板活化的分子标志物 [ 1]。CD62p 抗原分子量 140KDa, 它介导中性粒细胞和单核细胞对活化血小板和内皮细胞的粘附。P10分子量是 450KDa ,参与血小板凝集反应。血小板膜上含有多种蛋白质,这些蛋白质往往连接有大量的碳水化合物支链而成为糖蛋白,主要包括有血小板膜糖蛋白 CD62p 复合物、血小板 P10复合物和其它血小板膜糖蛋白等, 这些糖蛋白在维持血小板正常的形态及参与血小板的粘附、聚集、释放等功能中有重要意义[ 2]。正常情况下, 它们存在于静止血小板的 颗粒膜表面或内部,血小板活化时则表达于血小板表面并释放于血浆。我们通过检测它们就能了解患者体内血小板的活化状态。正常血小板处于静止状态, 形态正常, 细胞规整, 表面突起少,胞质内见少数小空泡及小管系统, 颗粒及致密颗粒较多。服药后,电镜下血小板形态明显改变,可见多数的羽状突起,细胞内 颗粒及致密颗粒少,部分血小板细胞内颗粒因排空而减少,开放小管增多,为部分血小板活化形态。服用云南白药后血小板从静止状态变为部分活化形态,即血小板启动参与凝血[ 3]。本研究发现服用云南白药后3 d,患者血小板明显活化, CD62p 和 P10明显升高,而未服药组不升13第 2期 罗　琪:云南白药对血小板活化的研究高, 2组比较有显著差异。手术后由于手术刺激引起血小板活化,电镜下见血小板形态不规整,有多个羽状突起, 胞质内颗粒因排空而减少,均为血小板激活形态。手术后, 2组CD62p和 P10均升高,但 2组比较, t< 1. 62, P> 0. 05, 无显著差异,说明手术能引起血小板活化。活化血小板含有更多的致密颗粒,更具活性,能更多释放出 5-羟色胺和 -血栓蛋白等物质[ 4]。血小板活化时, CD62p 和 P10的空间构型发生变化,导致 CD62p和 P10纤维蛋白原的识别部位暴露,于是 CD62p 和 P10 纤维蛋白原就能相互识别,血小板相互粘附在一起, 发生血小板聚集反应[ 2]。使血小板之间的聚集和粘附功能加强,易于发生血小板凝集, 形成血栓或加快血栓形成。因此,服用云南白药是否能增加血栓形成和脑血栓的危险? 本研究对凝血物质和分解产物进行了检测,发现用药前后凝血物质变化不大,没有显著差异。降解产物 D-二聚体是纤溶酶作用于交联后纤维蛋白的特异分子标志物, 是继发性纤溶的有效指标, 检测 D-二聚体对评估纤溶系统, 筛查深静脉血栓等有重要作用[ 5]。本组患者血浆D-二聚体为阴性, 说明服用云南白药血浆 D-二聚体不增加,无血栓形成的倾向[ 6]。云南白药止血作用主要作用于损伤的局部,止血的作用与药物的治血散瘀功效有关。云南白药对损伤有止血、愈伤、消炎、消肿之功。服药组局部出血,肿胀明显轻于对照组。表明云南白药除了增强局部止血外,它可能对炎症过程的介质释放,毛细血管通透性增强,白细胞游走等均有抑制,而发挥抗炎、消肿作用。本研究表明: 云南白药能增强血小板活化。血小板聚集增强,促进局部的凝血功能,保持机体的凝血物质的衡定, 有增强局部止血作用,使失血量减少,并无血栓形成倾向。故云南白药不失为手术中减少出血量的良好药物。参考文献:[ 1] 　Wu Giuoxin. Detent ion of act ivaled platelet s using activa-t ion d ependen t m onoclonal ant ibody ( s2-51) in clinical d is-order s[ J] . Nouv Rev Fr Iiematal , 1992, 34( 1) : 31—36.[ 2]　王振义.基础理论与临床[ M ] .上海:上海科学技术出版社,1995. 280.[ 3]　王华,姜玲.云南白药减轻药物流产后出血探讨 [ J] .实用妇科与产科杂志, 2003, 19( 10) : 593.[ 4] 　周注香、徐功杰、扬建文.急性脑血管患者血小板四项参数的变化[ J] .临床神经病学杂志, 1998, 11( 1) : 58.[ 5] 　阮长耿. 血栓与止血 [ M ] . 南京: 江苏科学技术出版社,1997. 62—65.[ 6]　Vers t raete M . Cl inical ap plicat ion of inhib ition of fib rinoly-sis [ J] . Dr ugs, 1995, 236( 29) : 261—266.Study the influence of Yunnan Paiyao on platelet activatingLUO Qi( The First clinical Academyof Medical college of Xiamen University, Xiamen, Fujian 361004, China)Abstract: T o investig ate the influence of Yunnan Paiy ao on platelet act ivat ing . Platelet-activ at ingmarkers on platelet surface in 206 cases groin her nia in men w er e measured using monoclonal ant ibodyand FCM , pr othr ombin and D-dimer content in blo od w ere assayed at the same t ime. Results: T hetherapeut ic g roup’s platelet is act iv ated clearly and there is significant differ ence betw een the tw o is.( P< 0. 05) , w hile pro thrombin and D-dimer content in blood show s no dif ference betw een the tw ogr oups ( P > 0. 05) . Conclusion: Yunnan Paiyao can increase platelet act iv ating, acceler ate lo calhemostasis, but has no inf luence on prothr ombin and D-dimer content , thus w ill not increase the dan-gerous of thrombosis.Key words : Yunnan Paiy ao; platelet act ivat ing ; FCM14 福建中医学院学报 第 14卷

云南白药对血小板活化的研究

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/18133/%e4%ba%91%e5%8d%97%e7%99%bd%e8%8d%af%e5%af%b9%e8%a1%80%e5%b0%8f%e6%9d%bf%e6%b4%bb%e5%8c%96%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

云南白药对血小板活化的研究

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository