 1985年Watanabe等报道:用去胸腺载瘤小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0融合获得抗结肠癌单克隆抗体之后,利用荷瘤裸鼠模型成功研制抗人肿瘤单抗的报道已相继出现:但所获单抗多为IgM,IgG类的单抗得率不高,本工作采用多次手术大部切除瘤块的方法延长荷瘤裸鼠的成活期,获得一株抗人肝癌IgG类单抗、其研制过程和结果报道如下

杨善民

林炳珍

苏金华

郑耘

陈瑞川

陈福

颜江华

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第 3三 仓 竿 只期1 , Q 飞 平 5 月万 门 大 学学报 ( 自丝铃 学版 )Jo u r n :几{ 。f X ‘ame a L ;几 、七 r , ‘t 丫 (孟咭J t ‘. r a l 次刁母 , 一f c 〕月 JZ 汉u.M; ty 工夕g J,研究惰 报·用荷瘤裸鼠模型研制抗人肝癌单克隆抗体¹颜准华 杨再民 林炳珍 郑 耘 苏金华 陈 福 陈瑞川(抗 庙 研 究 中 心 ,19 8 气年 W 。加 na 价 等报道 ’! :甲夫润腺载瘤小鼠的稗细胞与小鼠骨滋瘤细胞 S P 2 j0 融合获得抗结肠癌单 克隆抗体 之后,利 用荷瘤裸 鼠模型成功研制抗 人肿瘤 单抗的报道‘’!已相继 出现:但所获单抗 多为坛M,I g G 类的单抗得率不高.本工作采用多次手术大部切除心块的方法延长荷瘤裸鼠的成活期,获得一株抗人肝癌 坛G 类单抗、其研制过程和结果报遭如下.1 材料和方法人肝细胞璐移植甩模型 人肝痛细饱株 BE L一 ; 相 :为陈瑞铭等建立奋’, 由中科院上海细胞所引进,本中 亡细胞库保存.动物 BA L B /。裸 鼠 (斜》F 级 ) ‘~ 6 周龄,由本中心裸 鼠室供应.B曰 一。2裸 鼠模型系本室建立 (杨善 民等,待发 表 ,.瘤组织移植接种 于‘小鼠背侧, 2 个 月后过 大瘤体通过 手术大部切除 (重复 l~ 3 次 ),以延长荷瘤小鼠的成活期.细胞教合和筛选 实验取荷瘤 3个 月左右裸鼠的脾细胞.参考 Ko h卜 ; 等方法‘了进行细脸蔽合.脾细胞和 SPZz。的比 例约 4: I , 在 50 % PE G ( M W 40 ()0. M o r c ‘公司产品 )作用 下徽合,细胞以每孔 5 义 10’ 个分配 于 9 ‘孔板,在 H A T 选择性培养基中培养, 7 d 后换用 H T 培养基,20 d 后长出杂交瘤孔的上清,用 E I. S八 和 IFA 法初筛,阳性孔细胞经 3 次以上克隆并冻存杂交瘤和癌细胞株的培养 实验用癌细胞株和克隆坛杂交瘤养于 比 %新生牛血清或肠 %胎牛皿济 R PM ll“ o 培养其中,内含 50 m m ol 谷氨酞胺、 10 I U / 。l的青霉家和链霉素.培养环凌:。叭CO Z、3了 ℃和 10 0 % 的湿度抗体分类和 效价测定 抗体 坛分类按 E LI 只A 法〔E yn :司 公司试剂盒 ),效价测定按 『A法‘ l,艳细胞为 BE L一 , t0 :·抗体特异性反应实脸 所用细胞株均为本室引进和保存,细胞接种 卜盖玻片_L培养.长满细胞的玻片经 甲醉固定后作A 染色 (FI T C 标记羊抗鼠抗体为 5 191、 公司产品 ).病理标本来源浮冲、中心病理宝,石蜡组织切 片经脱蜡水化后染色.艺 结 果细胞融合和初筛 共用荷瘤裸 鼠脾细胞进行 5 次融合,成功 3 次,共获得阳性孔 4峨 个 第一次融台裸鼠荷瘤成活期为 45 d,所获 8 个阳性孔均分泌 馆M.第几、二三次融合裸鼠荷瘤成 活期都在 初 d 以 上,共有 石个阳性孔分泌 坛G 类抗体.经反复筛选和克隆,对 一株强阳性反应的杂交瘤 J月1:探入研究.¹ 水文 ” 9 2一() 8一l b 收到.福建省 卫生厅篆金资助项目砚‘亏玛 , ;厂‘升亨 洲 待佗 摆鼠瞬恻研制 抗 人 歼碑‘吹电降 卜_休 飞8牙岸 之喻 Ji 仁,单抗 坛 亚类签定 积 依 价测定 杂 交肩 jH‘.分泌的单抗命名为M.八b JI 王、, 。经 3 次 以 卜点降 在体外培 养 , 个月以止 仍能 慈定 分袱.其单杭 珍 硬类属子 干彭;, ,杂交瘤细胞培养上济效价为 l:l 产一IOJ 腹水 效价在I:川“以_上.Mo A bJH I 、与各种细胞的免疫反应 结梁见表 1,M o A bJH I:与靶细胞 图! 。 二 姐 不 衬 M/ 八例 。 LJ 况 巡附 仕曰 。。 710,, 恻B E L一,’ 。2 呈强阳创t反叮,其抗体标记荧 ( X 4肠 )光士要分布在细胞膜上,并形成 一 灸 F访 1 B E L、“ 俄 “小 尸 川 “ ‘,卜M “A b川, 1卜卜‘汕理c ‘光圈 (图 l ) ; 与正常混合血细胞、胃癌”n n ‘u 一”o n u ore‘e “c “ ’, , a y (入 奋汤、细胞株(M晓一。 和 A, , : : )和肺腺堪细胞株 (L “:和 A 、,)等没有交叉..表 1 IF人 分析 M o A川 H: :与各种体外培养细胞的反址特性T a b.1 R e 只e rlv it : e吕 o f M e A bJH: ‘ w ith a v盯io ly o f: 。 :l、 ; ‘12钻 :、d ‘跪 V. t孟u !;了 1卜A”j臼细 胞B E L 甲二MG 。翻-A ”一 : -I一钊 :A, , -混合血型红细胞棍介血型淋巴细胞M‘A卜JH‘,什卜Io A b,D, .5 1、艺/ 0 上清注:一:阴性 ; 一;强阳注姆:坑肺奋单坑表 2 『八 分析 州、人句只; ,和各种组织的反应特性T a 卜,刁 Ro a o r i二一世扮。 。f 孔le人卜JH: : w , t }、 氏、 ; : i、1了 。f t ls、u 七3 b y 『A组织 例效 Me A bJH ::M e Ab:I儿 5 P 2 / o 上清人具玉胎组织肝 2 0 / 2’ 0 / 2 0 / 2肺 2 0 / 2 0/ 2 0 / 2全占肠 2 0 / 2 0 / 2 0 / 2小肠 2 0 / 2 0 / 2 0 / 2胃 2 0 / 2 0 / 2 0 / 2脾 之 。/ 2 0 / 2 0 / 2肿渝组织矛台旅癌 4 0 /峨 4/ 4 0 / 4肝细胞密 2 2/ 2 0 /2 o / 2胃腺礴 3 0 / 3 0 / 3 。/ 3征: ,阳 性敬 / 久唆故M 。川, J士1, ,与各种纽织的免咬反应如 表 2,M c八叼 H: ‘J 干细胞癌组织 呈强阳性反应,不与,飞汾心 丫、 卜咬 子肺膝癌组织和 胃腺癌组织反应,也不 与胎出、。烤、,* 介 五抓 文又反应3 讨 论裸鼠是一种良好的实验动物,移植瘤可以在其体内生长并较好地保持肿瘤原有的生物学恃住;但裸鼠先天免疫功能缺陷,对多数抗原免疫应答能力很 低,尤其 是 棺G 的应答更低.sa ati 等曾报遭用荷瘤裸鼠模型获得的单抗全部为犯M.本文也显示从荷瘤裸鼠模型获得的单抗多为 坛M,但延长荷瘤裸鼠的成活期可以增加 lg G 类单抗的得率.可能肿瘤抗原长期、持续的刺激有助于机体免疫功能重建,增加 I西 的应答反应.但 确切的机理 尚不清楚 多次瘤块大部切除术可以有效地延长荷瘤裸鼠的成活期,通过这种方法,我们成功地获得一株 I茄 类的杭人肝细胞痛单抗,初步结果显示 Mc A日H, 1与 B EL一 卜。之和肝细胞癌组织有较强的反应性,而不与正常血细胞、胃膝痛细胞株、肺腺癌细胞株和多种人胚胎组织反应;也不与胃腺癌组织和肺膝疮组织反应.表明 M c A bJHI,是一 株对肝疮有特异性的单抗,其生物学特性研究和临床应用研究有待深入.本文结果再次证实用荷瘤裸鼠模型研制抗肿瘤单抗是一条有效的途径.参 考 文 献W a ta na be M 吧t al一T u 工n o r l父吐迈a rio n by h u阳n伽”oc lo na l a n tib e记je 3.J PN J Ca 摺行 几J , 1 98 5,2 (2 ):77~ 8‘刘全娜等‘用旅人肺启的裸限研制的单克隆抗体.生物工程学报,19 90,6( 4):341 一 343陈瑞铭等.人体肝启体外细胞系 B E L一,, 的建立及其特征.实验生物学报,19 7 8, 11 (1): 3 7 ~ 4 5K o肠r邵且nd 入至d, te ‘n C.伪。 t止。uo u, e j l炭u reso f f“s 吧d 心e l之, , 代r 吐 tin g 挂n t山记yo f p况d e 6 n ed,沐d l滋 ty.N ‘ u r e.1 97 5。2 56: 4 9 5徐志抓主编.实用单克隆抗休技术.陕西:陕西科学技术出版社,1 9 , 2.5 3一 5Pr e p a r a t io n o f M o n o elo n a l A n t ib o d ie s a g a in s tH e Pa t o e e llu la r C a re in o m a w ith M o d e l o f N u d eM ie e B e a r in g T u m o r X e n o g r a ftY a n Jia n g hu a Y a n gSu Jin h、laS ha n : n in‘|,C h七n FuI in B in z h e n g Z he n g Y u nCh e n R u e hu n(Ca 献er 几sea rc 几Ce nt er )Ab stra et T 卜。 : u r v iv a l ,io e 。f the n u d。 m . e 。 b e 。rin g t u m o : w a , p r o ro n g e d by : e-邵a 之异n ‘ p a r 卜e u 之o f 绝u m o r.T h e sp lee n ee l】5 o f th e n u d o m 矛。。 be o r in g B E !一 , . 。: x e , , o g r a ! t w e r efu se d w ith rn o u s e n , y e lo m a c e ll、 SPZ/ 0.O n e hy L「id o m a o s e e r o t in g m o n o e lo n a l a n tib o d y a-g a in s t BE L一 , 。。 ee lls,Me A b JIJ, ‘,w a s e s ra b lish o d.卜叹f A bJ正I, ,15 Ig G : ty p e.1右5 t ite r o f th e e u l-tu r o s u p e r n a ta n r a 幻 d a s e i, 七5 w a , 1 0 一’~ 1 0一 ’ a n d o v e r 1 0 一 ‘, r e s p e c tiv e !y.By th e in d ir e e t im-m 、, n o一flu o r e se e n e o a 。。a y, t he r e , 、llt s , h o w e d th o t Me A b JH :、 s t : o n g ly r o a e t e d w ith BE L一 , . 。:。e 115,b u t 几 o r w ith n o rm a ! b lo o d e o lls L , 、名,M c一。 3 , a n d s e e tio n s o f 卜, , m a n feta l Iiv e r, sp lee n,Iu n g, a n d 5 0 o n.o u r r o s u lts p r o v e d th a t th e p r:Pa r a tio n o f th o m o n o e lo n a l a n ti卜。d ie $ w itht卜e m 、, d 、1 o f o ro d e n 飞ie e be o r in g t、,m o r 15 a n 、 f「e 、t iv 。 ; 1, e r !l o d.K e y w o rd s Mo n 、、e lo n a l 。。 , ib o d ie 。,N 。d、、m , e。,H e p a , 。e e一。I。r 。a r。in o !n a

用荷瘤裸鼠模型研制抗人肝癌单克隆抗体

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