采用单克隆抗－ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ法检测１１８例ＨＢＶ感染者血清中ＨＢｅＡｇ特异免疫复合物（ＨＢｅＡｇ／ＩＣ），结果表明∶ＨＢｅＡｇ／ＩＣ与ＨＢＶ复制相关，可作为ＨＢＶ复制的一种血清学标志，ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性者中，６２．２％患者ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性，提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ的形成致使夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ，这类患者仍可以是ＨＢＶ野毒株感染，并非均为ＨＢｅＡｇ缺陷变异株感染；ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清ＡＬＴ异常率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清（Ｐ＜０．０１），提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ存在与肝损伤有关

任建林

刘宇卉

张树林

朱江

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第 20卷第 2期　　　　　　西　安　医　科　大　学　学　报　　　　　　Vol. 20　No. 21 9 9 9年 6 月 　　　JOURNAL OF XI′AN MEDICAL UNIVERSITY　　　　Jun. 1999HBeAg 特异免疫复合物检测及临床意义任建林*　张树林　朱　江　刘宇卉(第一临床医学院肝炎研究室　西安　710061)摘要　采用单克隆抗-HBe 固相 ELISA 法检测 118 例 HBV 感染者血清中HBeAg 特异免疫复合物( HBeAg/ IC) ,结果表明∶HBeAg / IC 与 HBV 复制相关, 可作为 HBV 复制的一种血清学标志, HBeAg 阴性、HBVDNA 阳性者中, 62. 2%患者HBeAg/ IC 阳性, 提示 HBeAg / IC 的形成致使夹心法不能检出 HBeAg, 这类患者仍可以是 HBV 野毒株感染,并非均为 HBeAg 缺陷变异株感染; HBeAg/ IC 阳性血清ALT 异常率明显高于HBeAg/ IC阴性血清( P < 0. 01) , 提示 HBeAg / IC 存在与肝损伤有关。关键词　乙肝病毒; e抗原特异免疫复合物; 乙肝病毒脱氧核糖核酸; 套式多聚酶链反应　　HBeAg 为临床判断乙肝病毒( HBV)复制、传染性的重要血清标志, 然而血清HBeAg 阴性时仍可检出 HBVDNA, 故应重新评价 HBeAg 检测的临床意义。业已证实HBV 感染血清中存在 HBeAg 特异免疫复合物( HBeAg/ IC) , 而现行双抗体夹心法不能检出免疫复合物中的HBeAg。本文建立单克隆抗-HBe 固相 ELISA 法检测 HBeAg/ IC,结合 HBVDNA、HBeAg、抗-HBe 检测评价HBeAg/ IC的临床意义。对象与方法1　研究对象　118 例 HBV 感染者系1995年 8 月～1996年 5 月我院传染科住院和门诊随访的HBsAg 阳性肝炎患者。诊断依据 1995年北京第五届全国传染病寄生虫病学术会议《病毒性肝炎防治方案》。正常对照40例系本校医学生和健康查体者, 无肝炎病史及症状和体征, 肝功正常, HBsAg 阴性。* 厦门大学医学院中山医院消化内科　 ( 361004)以上病例 IgM 抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HBV 均阴性。2　研究方法　采静脉血分离血清,- 20℃保存,统一检测,采血同时查肝功。2. 1　HBeAg / IC 检测　采用自建单克隆抗-HBe( 3G8细胞株)固相ELISA 法[ 1]。抗-HBe 包被, 与待检血清作用后,加 HRP 标记抗人 IgG抗体,显色, 测 OD450, S/ N≥2. 1为阳性。2. 2　血清 HBV DNA 检测　采用套式多聚酶链反应( n-PCR) , 依HBV 基因组S 区设计套式引物, 上海细胞生物学研究所合成[ 2], 第二次扩增产物电泳后出现 206bp 条带为阳性。2. 3　 HBsAg、HBeAg、抗-HBe 采 用ELISA 法, IgM 抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV采用固相放免法, 严格按试剂盒说明书操作。4　统计学处理　卡方检验和四格表确切概率法。结 果1　 40 例正常对照血清均 未检出HBeAg/ IC和 HBV DNA。118例 HBV 感染者中 64例( 54. 2% )检出 HBeAg/ IC,其血清HBV DNA 均阳性, 54例 HBeAg/ IC 阴性血清中 28 例( 51. 9%) , HBV DNA 阳性, 两组比较差异显著( P < 0. 01) , 见表 1。2　血清 HBeAg 阴性、HBV DNA 阳性的 37例中 23 例( 62. 2%) HBeAg/ IC 阳性。HBeAg 阴性、HBeAg / IC 阴性而 HBV DNA阳性仅 14例(见表 1。)表 1　HBeAg / IC 与 HBV DNA 检测结果比较HBeAg/ IC抗-HBe+ / HBeAg-HBV DNA+ -抗-HBe+ / HBeAg+HBV DNA+ -抗-HBe- / HBeAg-HBV DNA+ -抗-HBe- / HBeAg+HBV DNA+ -+ 13 0 5 0 10 0 36 0- 10 10 3 5 4 11 11 0　　 3　 HBeAg / IC 阳性者 ALT 异常率( 90. 63% ) 明 显 高于 HBeAg / IC 阴性 者( 51. 85%) ,见表 2。表 2　HBeAg/ IC 与血清 ALT 水平的关系ALT ( U / L )HBeAg/ IC+ -P≤40> 406582628< 0. 01讨 论本文结果显示, HBeAg/ IC 阳性的 64份血清 HBV DNA 均为阳性, HBeAg / IC 阴性血清中 HBV DNA 检出率为 51. 9% ( 28/54) ,两组比较差异显著( P < 0. 01)。HBeAg/IC形成致使现行双抗体夹心法不能检出复合物中HBeAg[ 1, 3, 4]。本文建立的单克隆抗-HBe固相 ELISA 法检测 HBeAg/ IC, 简单、敏感、特异。可作为临床判断HBV复制的一种血清标志,克服和补充双抗体夹心法查 HBeAg 的局限性,尤其适用于 HBeAg 阴性而又无条件查 HBV DNA 的患者。HBV 前 C 区变异可阻断 HBeAg 合成和分泌( HBeAg 缺陷变异) , 为血清 HBeAg 阴性、HBV DNA 阳性的重要原因[ 5]。然而,本文 HBeAg 阴性、HBV DNA 阳性的 37 例中23例( 62. 2% )检出 HBeAg / IC, 提示这类患者中半数以上仍存在野毒株 HBV 感染, 因HBeAg / IC 形成而未能检出 HBeAg ,并非均为 HBeAg 缺陷变异株感染[ 4]。有学者认为 HBeAg/ IC 形成与肝损伤相关[ 6] , 本研究发现 HBeAg / IC 阳性血清中ALT 异常率( 90. 63% )明显高于 HBeAg / IC阴性血清( 51. 85%) , HBeAg/ IC 存在意味抗-HBe应答出现, HBeAg 特异T h活化, HBeAg和 HBcAg 在 Th 水平上存在交叉反应, 因而也意味着HBcAg/ HBeAg 特异Th 活化。活化的 Th 细胞产生 Th2类细胞因子促进 B细胞活化产生抗-HBe, Th1类细胞因子促进 CTL活化, 识别感染肝细胞表面靶抗原( HBeAg/HBcAg )导致肝细胞破坏[ 7], 并非 HBeAg / IC直接致肝损伤。参考文献1　张树林, 任建林, 刘宇卉 . HBeAg/ IC 与肝损伤的关系 . 中华肝脏病杂志, 1998; 6( 2)∶662　 Zhang SL , Han XB, Yue YF . The r elation be-t ween HBV vir emia level of pregnant w omen andintrauterine infection-nested PCR for detection ofHBV DNA . WJG , 1998; 4( 1)∶613　Maruyama T , Lino S, Koike K et al. Ser olog y of a-cute exacerbation in chr onic hepatitis B virus infec-tion. Gast roenterolo gy , 1993; 105( 4)∶11414　Maruyama T , Kuwat a S, Koike K et al. P recorew ild type DNA and imm une complex per sist inchronic hepatitis B after seroconver sion∶No asso-2272期　　　　　任建林, 张树林,朱江等 . HBeAg 特异免疫复合物检测及临床意义　　　　　　　　ciation betw een genome conver sion and sero con-ver sion. Hepatology , 1998; 27( 1)∶2455　Okamoto H, Yotsmot o S, Akahana Y et al. Hepati-tis B viruses w ith precore reg ion defects pr evail inpersistently infected hosts along wit h seroconver-sion t o the ant ibody against e antigen. J V ir ol,1990; 64( 3)∶12986　Kurai K , Lino S, kurokaw a K et al. L arg e molecu-lar form of serum HBeAg in chronic hepatitis Bvirus infect ion∶relation to liv er cell damage, Hep-atolo gy , 1991; 13( 6)∶10577　Barnoda V , Franco A , Paroli M et al. Sev ectiv e ex-pansion of cytoto xic T lymphocytes w ith a CD+4 ,CD+56, sur face phenotype and a T helper t ype 1 pro-file of cyt okine secr et ion in the liver s of patientschronically infect ed w ith hepatit is B virus, J Im-munol, 1994; 152( 9)∶3074( 1998-12-02 收稿　1999-01-08 修回)DETECTION OF HBeAg-SPECIFIC IMMUNE COMPLEXAND ITS CLINICAL SIGNIFICANCERen Jianlin , Zhang Shulin, Zhu Jiang, et al( H epatitis L ab, First A f f il iated H osp ital )　　Abstract　A method ( EL ISA ) for detection ofHBeAg-specific imm une complex ( HBeAg / IC) usingmonoclonal ant ibody w as developed and 118 patientsw ith HBV infection w ere invest igated. The resultsshow ed t hat HBeAg/ IC was related to HBV activereplication, could serv e as a marker of HBV replica-tion; Of 37 patients w ith HBeAg-negative and HBVDNA -positive, 23( 62. 2% ) had HBeAg / IC in theirsera , suggesting that HBeAg/ IC formation preventsthe detection of HBeAg by "Sandwich "ELISA andthis kind of patients could be still infected w ith w ildtype HBV . I t is not tur e t hat all patients w ithHBeAg-negative and HBV DNA-positiv e ar e infectedw ith HBeAg-defect mutant ; The rate o f abnormalALT level is much higher in patients w ith HBeAg / ICin serum than that in patients w ithout HBeAg/ IC, P< 0. 01( 90. 63% vs 51. 85% ) , indicating that the ex-ist ence of HBeAg/ IC is r elated to liver damage.　　Key words　HBV; HBeAg-specific immunce complex ; HBV DNA ; nested polymerase chain reaction(上接第 225页 )CLINICAL CURATIVE EFFECT ANALYSIS OF THE FORTIFIEDTREATMENT OF NOVOLIN TO DIABETIC NEPHROPATHYZhang Xingying, Ran Aiqin , Ma Liqun, et al( Depar tment of N ephr itic I nternal M edicine, Second Clinical M edical College)　　Abstract　35 cases of diabetic nephropathy inchr onic renal dy sfunction of azo temia stag e w eretreated by fo rtified tr eatment of novolin in a shor t pe-riod and com pared with routine therapy g roup o f no-volin w hich w as set as contro l . The results show edthat the blood glucose o f the patients who r eceiv edfor tified treatment was contr olled ideally after thecour se of tr eat ment. Meanw hile , the endogenous cre-atinine clear ance rate ( CCR ) rise up significant ly . Itsuggests that fort ified treatment t o diabetic nephropa-thy can defer the deterioration process o f r enal dys-function.　　Key words　novolin; for tified ther apy ; diabetic nephropathy ; endogenous228　　　　　　　　　　　　　　西　安　医　科　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　第 20 卷

HBeAg特异免疫复合物检测及临床意义

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/17960/HBeAg%e7%89%b9%e5%bc%82%e5%85%8d%e7%96%ab%e5%a4%8d%e5%90%88%e7%89%a9%e6%a3%80%e6%b5%8b%e5%8f%8a%e4%b8%b4%e5%ba%8a%e6%84%8f%e4%b9%89.pdf?sequence=1&isAllowed=y

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