背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。 
【英文摘要】 BACKGROUND & OBJECTIVE: Wild type p53 could induceRGS16 mRNA expression, and RGS16 protein is related with carcinogenesisof glioma. This study was designed to investigate the effects of exogenousRGS16 gene transfection on the growth of rat glioma cell line C6.METHODS : A eukaryotic expression plasmid pIRES2-EGFP-RGS16 wasconstructed, and transfected into C6 cells. The cells were selected by G418.The expression of enhanced green fluorescent protein (EGFP) was observedunder fluorescent microscope, and the exp...军队医药卫生科研基金项目(No.02ma04)~

张丰(第四军医大学西京医院病理科)

李青(第四军医大学西京医院病理科)

林圣彩

洪柳(第四军医大学西京医院病理科)

聂蕾(第四军医大学西京医院病理科)

陈广生(第四军医大学西京医院病理科)

Chinese Journal of Cancer

Xiamen University Institutional Repository

[ ABSTRACT] BACKGROUND & OBJECTIVE: Wild type p53 could induceRGS16 mRNA express ion , and RGS16 protein is related with carcinogenes isof g lioma . This s tudy was des igned to inves tigate the effects of exogenousRGS16 gene transfection on the growth of rat g lioma cell line C6.METHODS : A eukaryotic express ion plasmid pIRES2-EGFP-RGS16 wascons tructed , and transfected into C6 cells . The cells were selected by G418.The express ion of enhanced green fluorescent protein ( EGFP) was observedunder fluorescent microscope , and the express ion of RGS16 mRNA andprotein was detected by reverse transcrip tion-polymerase chain reaction ( RT-PCR) and immunocytochemis try. The effects of RGS16 gene on cell cycleprogress ion , cell growth , and proliferation of C6 cells were measured by flowcytometry, cell growth curve , and clonogenic assay in plate . RESULTS : C6-RGS16 and C6-GFP cells , which separately expressed RGS16 and pIRES2-EGFP vector, were cons tructed success fully. S phase proportion wass ignificantly higher in C6-RGS16 cells than in C6-GFP and C6 cells ( 28.5%vs . 18.9% and 14.3% , P <0.05) ; C6-RGS16 cells grew fas ter than C6-GFPand C6 cells . The clone formation rate was s ignificantly lower in C6-RGS16cells than in C6-GFP and C6 cells ( 12% vs . 25% and 25% , P <0.05) .CONCLUSION: Exogenous RGS16 gene could promote cell cycle progress ionof glioma C6 cells from G1 phase to S phase , and accelerate cell growth ,but canSt increase the clone formation.KEYWORDS : RGS16 gene ; Gene transfection ; Cell growth ; Glioma ; C6cell; Rat【摘 要】 背景与目的 : 有 研 究 表 明 野 生 型 p53 可 以 诱 导 RGS16 表 达 , 而 RGS16可能与胶质瘤的发生有关 。本研究旨在探讨 RGS16 基因转染对大鼠胶质瘤 C6 细胞生长的影响。方法 : 构建真核表达载体 pIRES2-EGFP-RGS16, 脂 质 体 法 转 染 C6细 胞 , 经 G418 筛 选 后 荧 光 显 微 镜 观 察 细 胞 中 增 强 型 绿 色 荧 光 蛋 白 ( enhancedgreen fluors cent protein, EGFP) 的 表 达 , RT-PCR 证 实 RGS16 的 mRNA 表 达 , 免 疫细胞化学方法检测细胞中 RGS16 蛋 白 表 达 。 最 后 利 用 流 式 细 胞 仪 、生 长 曲 线 、平板克隆形成等方法研 究 RGS16 基 因 对 胶 质 瘤 细 胞 周 期 、 生 长 及 增 殖 的 影 响 。 结果 : 成功构建了稳定表达 RGS16 和 表 达 空 载 体 的 细 胞 系 C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP 和 C6 经 流 式 细 胞 仪 检 测 S 期 的 细 胞 比 例 分 别 为 28.5%、18.9%和14.3%( P<0.05) ; 生长曲线表明 C6-RGS16 生长的速度明显快于 C6-GFP 及 C6, 但其平板克隆形成率分别为 12%、25%和 25%( P<0.05) 。结论 : RGS16 促进 C6 细胞周期从 G1 期向 S 期过渡 , 加快细胞生长速度 , 但是并不促进细胞克隆形成。关键词 : RGS16 基因 ; 基因转染 ; 细胞生长 ; 胶质瘤 ; C6 细胞 ; 大鼠中图分类号 : R739.41 文献标识码 : A文章编号 : 1000- 467X( 2006) 01- 0051- 05外源性 RGS16 基因稳定转染对胶质瘤C6 细胞生长的影响洪 柳 1, 李 青 1, 陈广生 1, 张 丰 1, 聂 蕾 1, 林圣彩 2Effect of Exogenous RGS16 Gene Transfectionon Growth of Glioma Cell Line C6HONG Liu1, LI Qing 1, CHEN Guang -Sheng 1, ZHANG Feng 1, NIE Lei1, LIN Sheng -Cai2·基础研究·《癌症》Chinese Journal of Cancer, 2006, 25( 1) : 51- 551. 第四军医大学西京医院病理科 ,陕西 西安 7100322. 厦门大学生命科学学院 ,福建 厦门 3610001. Department of Pathology,Xijing Hospital,The Fourth Military MedicalUniversity,Xi?an, Shaanxi, 710032,P. R. China2. School of Life Science,Xiamen University,Xiamen, Fujian, 361000,P. R. China通讯作者 : 李 青Correspondence to: LI QingTel: 86- 29- 84774538E-mail: liqing@fmmu.edu.cn基 金 项 目 : 军 队 医 药 卫 生 科 研 基金项目 ( No. 02ma04)Grant : Funds for MedicalResearch of the Army( No. 02ma04)收稿日期 : 2005-02-01修回日期 : 2005-03-3151洪 柳 , 等. 外源性 RGS16 基因稳定转染对胶质瘤C6 细胞生长的影响G 蛋 白 信 号 调 节 子 ( regulators of G-proteinsignaling, RGS) 是 近 年 发 现 的 新 蛋 白 质 家 族 , 结 构中包含一个保守的 RGS 结构域 , 具有三磷酸鸟苷水解酶激活蛋白 ( GTPase activiating protein, GAP)活性 , 加速 Gα水解 GTP, 负性调节 G 蛋白信号转导 , 参与多种生理、病理过程 [ 1] 。在 20 余种 RGS 家族 中 发 现 RGS16 可 以 被 野 生 型 p53 诱 导 表 达 [ 2] 。在 大 鼠 胶 质 瘤 C6 细 胞 中 我 们 也 证 实 了 瞬 时 转 染野生型 p53 能够诱导 RGS16 蛋白表达。此外 , 我们有实验 发 现 RGS16 在 人 胶 质 瘤 瘤 细 胞 的 胞 浆 、胞突 中 高 表 达 ( 表 达 率 为 88.10% ) , 而 在 瘤 旁 正 常脑 组 织 胶 质 细 胞 中 未 见 表 达 , 提 示 RGS16 可 能与 胶 质瘤的发生有关 [ 3] 。本研究旨在建立稳定表达RGS16 基因的神经胶质瘤细胞模型 C6-RGS16,研究 RGS16 对大鼠胶质瘤 C6 细胞的生物学影响。1 材料与方法1.1 材料大鼠胶质瘤 C6 细胞、大肠杆菌 DH5α及载体pIRES2-EGFP 均 由 本 教 研 室 保 存 。 质 粒 pBKS-RGS16、兔抗 RGS16 抗体由厦门大学林圣彩教授惠赠。各种内切酶及 T4 连接酶、购自 TaKaRa 公司 , 质粒快速提取试剂盒及胶回收试剂盒购自上海华舜公司 , 真核转染试剂 LipofectamineTM 2000、Trizol 总 RNA 提 取 及 反 转 录 试 剂 SuperScriptTM 购自 Invitrogen 公 司 , G418 购 自 Promega 公 司 , SABC试剂盒及 DAB 显色液购自北京中山公司。1.2 方法1.2.1 细 胞 培 养 C6 细 胞 在 含 10%小 牛 血 清 的RPMI-1640 培 养 液 , 37℃, 5% CO2 条 件 下 培 养 , 免疫细胞化学显示 C6 细胞无 RGS16 蛋白表达。1.2.2 质粒构建及转染 用 SmaⅠ、XhoⅠ双酶切质粒 pBKS-RGS16 后将所得目的片段 RGS16 插入pIRES2-EGFP 中的 SmaⅠ与 XhoⅠ酶切位点之间 ,构 建 重 组 质 粒 pIRES2-EGFP-RGS16, 用 SmaⅠ 、XhoⅠ 双 酶 切 鉴 定 。 采 用 脂 质 体 介 导 的 方 法 将pIRES2-EGFP-RGS16 和 空 载 体 pIRES2-EGFP 各5 μg 分别转染 C6 细胞 , G418 ( 2 g /L) 筛选 8～10天 至 空 白 对 照 孔 中 的 C6 细 胞 完 全 死 亡 , 更 换G418 浓度( 1 g /L) 继续筛选直至细胞克隆形成 , 挑选 单 克 隆 , 分 别 获 得 稳 定 表 达 pIRES2-EGFP-RGS16 和 空 载 体 pIRES2-EGFP 的 细 胞 C6-RGS16和 C6-GFP。以未转染的 C6 细胞为空白对照。1.2.3 RGS16 基 因 表 达 的 鉴 定 ( 1) 增 强 型 绿 色荧光蛋白 ( enhanced green fluorscent protein, EGFP)表达的检测 : 将细胞爬片用 PBS 洗涤 2 次 , 40 g /L多聚甲醛固定 20 min, 再用 PBS 洗涤 2 次 , 最后以蒸 馏 水 洗 3～4 次 , 滴 加 500 ml /L 甘 油 缓 冲 液 封片 , 于荧光显微镜下观察阳性细胞。( 2) RT-PCR 检测 RGS16 的 mRNA 表达 : 提取约 5×106 个 C6-RGS16 细胞 , 按分子克隆 Trizol 总RNA 提取法 [ 4] 提取细胞总 RNA, 取 5 μl 用紫外分光光度仪测定样品浓度 , 提取的 RNA 按试剂盒说明书逆转录合成 cDNA, 反转录过程中设立 no-RT对照及阳性对照。按上游引物 : 5′-CGCATGTGCCGCACCCTAGCC-3′; 下游引物 : 5′-CGCTCAAGTGTGTGAAGGCTCAGC-3′, 进 行 PCR 扩 增 , 反 应 参 数 为 :94℃预变性 5 min; 94℃ 30 s, 54℃ 30 s, 72℃ 30 s,共 30 个循环; 72℃延伸 7 min; 4℃保存。取 PCR 反应产物 10 μl, 10 g /L 琼脂糖凝胶电泳鉴定。同时以 β-actin 为内对照 , 以 C6-GFP、C6 为空白对照。( 3) RGS16 蛋白表达的检测 : 将细胞爬片同上处理。PBS 洗涤后 , 加 30 ml /L H2O2 室温 10 min,再 以 蒸 馏 水 洗 涤 3 次 , 每 次 5 min。 加 10 g /LTriton X-100, 室温 放 置 10 min, 用 PBS 洗 3 次 , 每次 3 min。洗涤后 , 加正常 山 羊 血 清 室 温 封 闭 40min, 甩去不洗 , 依次滴加 1∶50 的兔抗 RGS16 抗体 , 4℃过夜。次日复温 30 min, 用磷酸盐缓冲液( phosphate buffered solution, PBS) 洗 涤 3 次 , 每 次5 min; 加 生 物 素 标 记 的 羊 抗 兔 IgG 于 37℃孵 育40 min, PBS 洗涤 3 次 , 每次 5 min。加 SABC 复合物 , 同上孵育及洗涤后 , 用 DAB 显色 5～10 min,以苏木精衬染 , 按常规脱水透明及中性树脂封片。结果判定 : 以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应 , 标本中无阳性反应细胞或阳性反应细胞<5%者判断为阴性 , 标本阳性反应细胞数>5%者判断为阳性。1.2.4 细 胞 周 期 分 析 ( 1) 流 式 细 胞 仪 分 析 : C6-RGS16、C6-GFP 及 C6 三组细胞经胰酶消化成单细胞后各取约 1×106 个 , PBS 洗 2 次 , 70%乙醇固定 ,碘化丙啶染色 , 流式细胞仪进行细胞周期定量分析。( 2) 细胞生长曲线测定 : 对数生长期的三组细胞 , 胰酶消化后以每孔 3×103 个接种于 12 孔培养板 , 各 接 种 24 孔 , 每 日 各 取 3 孔 倒 置 显 微 镜 下 观察计数 , 绘制生长曲线。1.2.5 细胞平板克隆形成实验 取对数生长期的上述三组细胞 , 经胰酶消化成单细胞悬液 , 计数后以 每 孔 100 个 细 胞 接 种 于 6 孔 板 , 连 续 培 养 14天 , 甲醇固定 , 吉姆萨染色 , 并计算克隆形成率 ( 克52隆形成率=克隆数 /接种细胞数×100%) 。2 结 果2.1 pIRES2-EGFP -RGS16 基 因 真 核 表 达 载 体的构建以 SmaⅠ、XhoⅠ双 酶 切 质 粒 pBKS-RGS16 得到约 606 bp 的 RGS16 目 的 片 段 ( 图 1) , 将 目 的 片段 与 空 载 体 pIRES2-EGFP 成 功 连 接 , 重 组 质 粒pIRES2-EGFP-RGS16 经 Sma Ⅰ 、XhoⅠ 双 酶 切 鉴定 , 可见约 606 bp 的 RGS16 目的片段( 图 2) 。2.2 稳定表达 RGS16 细胞系 C6-RGS16 的建立2.2.1 EGFP 在 C6 细胞中的表达 荧光显微镜下观 察 , C6-RGS16 与 C6-GFP 细 胞 的 胞 浆 及 胞 核 均可见特异性的绿色荧光蛋白表达( 图 3) 。2.2.2 RGS16 mRNA 的 表 达 从 C6-RGS16 中 提取总 RNA, 经 RT-PCR 扩 增 后 进 行 10 g /L 琼 脂 糖凝 胶 电 泳 , 可 见 一 条 约 606 bp 的 DNA 条 带 ( 图4) , 而 C6-GFP、C6 细胞中均未见到。2.2.3 RGS16 蛋白的表达 免疫细胞化学染色显示 , 稳 定 转 染 pIRES2-EGFP-RGS16 的 C6 细 胞 胞浆中显示棕黄色 颗 粒 , 表 明 RGS16 蛋 白 在 C6 中得 到 表 达 ( 图 5) , 而 C6-GFP、C6 细 胞 中 均 未 见 表达。图 1 pBKS-RGS16 和 pIRES2-EGFP 的双酶切琼脂糖凝胶电泳Figure 1 Restrictive enzyme digestion analysis ofpBKS-RGS16 and pIRES2-EGFP byagarose gel electrophoresisLane M: DL2000 DNA marker; lane 1: pBKS-RGS16 digested bySma Ⅰ and Xho Ⅰ; lane 2: pIRES2-EGFP digested by Sma Ⅰ andXho Ⅰ.图 2 重组质粒 pIRES2-EGFP-RGS16 的酶切鉴定Figure 2 Restrictive enzyme digestion analysis ofrecombinant plasmid pIRES2-EGFP-RGS16Lane M: DL2000 DNA marker; lane 1: pIRES2-EGFP-RGS16digested by Sma Ⅰ and Xho Ⅰ.A B图 3 绿色荧光蛋白在 C6-RGS16( A) 和C6-GFP( B) 细胞中的表达 ( ×200)Figure 3 Expression of green fluorescent proteins inC6-RGS16 cells ( A) and C6-GFP cells ( B) observedunder fluorescent microscope ( ×200)图 4 C6-RGS16 的 RT-PCR 产物琼脂糖凝胶电泳Figure 4 RT-PCR product of C6-RGS16 analyzed byagarose gel electrothoresisLane M: 100 bp DNA ladders IX; lane 1: RGS16; lane 2: β-actin.洪 柳 , 等. 外源性 RGS16 基因稳定转染对胶质瘤C6 细胞生长的影响 53表 1 流式细胞仪显示细胞周期变化Table 1 Cell cycle distr ibution detected byflow cytometryCell lineC6C6-GFPC6-RGS16G1 ( %)79.972.062.8S ( %)14.318.928.5G2 ( %)5.79.18.7A B C图 5 RGS16 在 C6-RGS16( A) 、C6-GFP( B) 和 C6( C) 细胞中的表达 ( SABC×200)Figure 5 Expression of RGS16 in C6-RGS16 cells ( A) , C6-GFP cells ( B) , and C6 cells ( C) detected by immunocytochemistry( SABC ×200)2.3 RGS16 基因对细胞周期的影响2.3.1 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 周 期 变 化 C6-RGS16、C6-GFP 和 C6 处于 S 期的细胞比例分别为28.5%、18.9%、14.3%, C6-RGS16 明显高于 C6-GFP及 C6( P<0.05, 表 1) 。2.3.2 细 胞 生 长 曲 线 从 第 3 天 起 见 C6-RGS16生长速度明显快于 C6-GFP 及 C6 细胞( 图 6) 。2.4 RGS16 基因对细胞克隆形成能力的影响C6-RGS16、C6-GFP、C6 三 组 细 胞 培 养 14 天后 , 可 见 细 胞 集 落 形 成 , 吉 姆 萨 染 色 , 计 算 克 隆 形成 率 分 别 为 12% , 25% , 25% 。 χ2 检 验 显 示 , C6-RGS16 的克隆形成率较 C6-GFP 和 C6 低 , 差异有显著性( P<0.05) 。3 讨 论RGS16 的 cDNA 是 1996 年 Chen 等 [ 5] 首 次 从小 鼠 的 垂 体 中 分 离 , 定 位 于 1q25-q31 [ 6] , 全 长606 bp, 含 5 个外显子 , 编码 202 个氨基酸 [ 7] 。RGS家族是新近发现的一大类蛋白质 , 研究表明 RGS蛋白不仅依靠 RGS 结构域发挥三磷酸鸟苷水解酶激 活 蛋 白 ( GTPase activating protein, GAP) 作 用 抑制 G 蛋白信号 , 更是 G 蛋白信号的调节子与整合子 , 在生理、病理过程中发挥重要作用 [ 1] 。 在 RGS家 族 的 20 余 种 分 子 中 发 现 RGS16 可 以 被 野 生 型p53 所诱导表达 [ 2] 。p53 基因是目前研究比较明确的一种参与细胞周期调控的抑癌基因 , 编码一个分子量为 53 ku 的核内蛋白 , 能与 DNA 结合而起着转录调节因子的作用 , 将 DNA 受损的细胞阻滞于 G1 期 , 直至 DNA 损伤被修复 , 否则启动细 胞 凋亡机制清除细胞 [ 8] 。我 们 在 大 鼠 胶 质 瘤 C6 细 胞 中 瞬 时 转 染 野 生型 p53, 也证实了野生型 p53 能 够 诱 导 RGS16 蛋白的表达。此外 , 我们的免疫组织化学结果显示RGS16 在人胶质瘤细胞的胞浆、胞突中高表达 ( 表达率为 88.10%) , 而在瘤旁正常脑组织胶质细胞中未见表达 , 二者有显著 性 差 异 [ 3] , 提 示RGS16 可 能图 6 三种细胞生长曲线Figure 6 Growth curves of C6-RGS16, C6-GFP,and C6 cells洪 柳 , 等. 外源性 RGS16 基因稳定转染对胶质瘤C6 细胞生长的影响54与胶质瘤的发生有关。还有研究表明 RGS16 参与对 p38 通路活化的负调节 [ 9] , 但 RGS16 对 细 胞 生物学的影响尚无研究 , 为此我们构建真核表达载体 pIRES2-EGFP-RGS16, 脂质体法转染大鼠胶质瘤 C6 细 胞 , 筛 选 稳 定 表 达 RGS16 的 细 胞 C6-RGS16, 再检测其生物学特性。流式细胞仪结果表明 RGS16 促 进 细 胞 从 G1 期 到 S 期 的 过 渡 , 这 与RGS16 瞬时转染的结果一致 [ 10] 。细胞计数绘制生长曲线 结 果 再 次 提 示 RGS16 促 进 细 胞 周 期 运 行 。但 是 平 板 克 隆 形 成 实 验 显 示 C6-RGS16 较 C6-GFP 及 C6 的 克 隆 形 成 率 低 , 表 明 细 胞 克 隆 形 成能力减低。细胞生长速度加快但克隆形成能力却没有增加 , 我们考虑为虽然细胞分裂加快、周期运行加速 , 但细胞分裂后形成干细胞的比例不增加 ,故而出现了克隆率没有增加的结果。有人针对某些肿瘤与其同源的正常组织具有基本相同的有丝分 裂 率 , 而 某 些 正 常 组 织 ( 如 : 小 肠 ) 却 比 某 些 肿瘤的有丝分裂率高 [ 11, 12] 的现象 , 提出了器官、肿瘤的生长 ( 即细胞生成与死亡的比率 ) 不依赖于细胞的有丝分裂率 , 而是由干细胞产生的一些因子所控制的假说 [ 13] 。即细胞是否能形成克隆不是由细胞的有丝分裂率决定 , 而是由细胞群体中干细胞的量所决定的。至于 RGS16 是否与细胞分裂中干细胞的形成有关 , 有待于进一步研究分析。综 上 所 述 , RGS16 促 进 细 胞 周 期 运 行 的 结 果是肯定的。它虽然可以被野生型 p53 诱导表达但与 p53 阻滞细胞周期的作用不一致 , 推测 p53 可以诱导 RGS16 的转录表达 , 但 RGS16 不是 p53 发挥抑制细胞周期诱导凋亡作用的下游分子。[ 参 考 文 献]HOLLINGER S, HEPLER J R. Cellular regulation of RGSproteins: modulators and integrators of G protein signaling[ J] . Pharmacol Rev, 2002, 54( 3) : 527- 559.BUCKBINDER L, VELASCO-MIGUEL S, CHEN Y, et al.The p53 tumor suppressor targets a novel regulator of Gprotein signaling [ J] . Proc Natl Acad Sci USA, 1997, 94( 15) : 7868- 7872.洪 柳 , 李 青 , 陈 广 生 , 等 . RGS16 与 p53 在 人 胶 质 瘤中 的 表 达 及 相 关 性 研 究 [ J] . 中 华 神 经 外 科 疾 病 研 究 杂志 , 2005, 4( 3) : 248- 251.萨 姆 布 鲁 克 J, 拉 赛 尔 DW. 分 子 克 隆 实 验 指 南 [ M] . 第 3版. 北京 : 科学出版社 , 2002: 518-522.CHEN C, ZHENG B, HAN J, et al. Characterization of anovel mammalian RGS protein that binds to Galpha proteinsand inhibits pheromone signaling in yeast [ J] . J Biol Chem,1997, 272( 13) : 8679- 8685.SNOW B E, ANTONIO L, SUGGS S, et al. Cloning of aretinally abundant regulator of G-protein signaling ( RGS-r /RGS16) : genomic structure and chromosomal localization ofthe human gene [ J] . Gene, 1998, 206( 2) : 247- 253.CHEN C K, WIELAND T, SIMON M I. 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Effect of Exogenous RGS16 Gene Transfection on Growth of Glioma Cell Line C6

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/6013/%e5%a4%96%e6%ba%90%e6%80%a7RGS16%e5%9f%ba%e5%9b%a0%e7%a8%b3%e5%ae%9a%e8%bd%ac%e6%9f%93%e5%af%b9%e8%83%b6%e8%b4%a8%e7%98%a4C6%e7%bb%86%e8%83%9e%e7%94%9f%e9%95%bf%e7%9a%84%e5%bd%b1%e5%93%8d.pdf?sequence=2&isAllowed=y

Effect of Exogenous RGS16 Gene Transfection on Growth of Glioma Cell Line C6

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