Mise en oeuvre de la pepsine de porc dans un système de solvants biphasiques pour la préparation de peptides opioïdes à partir de l'hémoglobuline bovine

Abstract

Cinq peptides actifs ont été isolés en une seule étape par CLHP en phase inverse à partir de l'hydrolyse de l'hémoglobine bovine par la pepsine a pH 4,5 : la LVVh-7, la LVV-7 et un peptide potentialisateur de la Bradykinine, qui sont des peptides intermédiaires, ainsi que la néokyotorphine et la VVh-4, qui sont des peptides finaux. L'optimisation de leur production a été obtenue par digestion pepsique de l'hémoglobine dénaturée par l'urée (mécanisme "zipper"). Les couplages de la CLHP en phase inverse avec la SM-IES, pour l'isolement et l'identification rapides des hémorphines, puis avec un détecteur spectral UV, pour la construction d'une librairie spectrale permettant leur quantification dans un hydrolysat peptidique complexe, ont permis de déterminer les conditions optimales de leur production (degré d'hydrolyse). Un plan d'expériences a permis de mettre au point un système biphasique d'extraction de la LVVh-7 et de la VVh-7, composé de butan-2-ol et d'octan-1-ol, capable d'extraire efficacement ces deux hémorphines dans un réacteur à pepsine insolubilisée avec une forte sélectivité (coefficient de partage de 2,6 et de 2,3 pour ces hémorphines). Une méthode d'adsorption sur de l'alumine a permis de récupérer sélectivement les hémorphines pures, tout en retenant l'hème sur le support. La conception d'un réacteur ouvert à solvants biphasiques et à pepsine immobilisée permettra la préparation en continu des deux hémorphines et le recyclage des solvants.LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF