Maturation post-transcriptionnelle des ARN messagers chez la levure Saccharomyces cerevisiae (rôle du facteur de clivage et polyadénylation CF IA à travers l'étude de la sous-unité Clp1p)

Abstract

Chez la levure S. cerevisiae, l'ajout d'une queue poly (A) en 3' des ARNm fait intervenir les facteurs CF IA, CPF et les protéines Nab4p et Nab2p. Le facteur CF IA est composé des protéines Rna1 4p, Rna1 5p, Pcf1 1p et C1p 1p. In vitro, des extraits protéiques obtenus à partir de souches mutantes c1p1 ont une activité de maturation en 3' déficiente : C1p 1p est requise lors des deux étapes de clivage et polyadénylation. Les facteurs CF IA présents dans différents contextes ont été purifiés. Les versions mutantes de C1p 1p et la protéine Pcf1 1p ne sont pas présentes dans ces fractions. Pourtant, des expériences de double-hybride révèlent que l'interaction entre la protéine Pcf1 1p et les formes mutantes de C1p 1p est altérée. Nos résultats suggèrent que C1p 1p serait impliquée dans la stabilité du facteur CF IA. Par ailleurs, nous montrons que C1p 1p et Pcf1 1p sont impliquées dans la maturation en 3' des snoRNAs, une autre classe de transcrits synthétisés par l'ARN polymérase II.In yeast, mRNAs acquire a poly(A) tail at their 3'ends. This involves the factors CF IA, CPF, and the proteins Nab4p and Nab2p. CF IA is a complex comprising Rna1 4p, Rna1 5p, Pcf1 1p and C1p 1p. The latter has been found to be essential for both the cleavage and polyadenylation steps. Mutations in the CLP1 gene indeed gave rise to extracts that were unable to perform in vitro pre-mRNA 3'-end processing. Purification of CF IA in mutant backgrounds for CLP1 showed that Pcf1p and the mutant Clp 1p protein no longer copurified with CF IA. Two-hybrid analyses additionnally showed that PCF11 and mutant c1p1 alleles failed to interact at different temperatures. Finally, we investigated C1p1p and Pcf1 1p putative role in snoRNA 3' end formation. We could show that repressed expression of either CLP1 or PCF11 impaired significantly termination of transcription of snoRNA independent units, strongly suggesting their implication in 3' end formation of this other class of RNA poll II transcripts.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF