Recherche du mécanisme d'action moléculaire de l'agent hypocholestérolémiant et anti-athéromateux, LF 08-0133

Abstract

L'athérosclérose est due à une accumulation de lipides dans la paroi vasculaire et conduit à un accident cardio- ou cérébro-vasculaire. Un de ses facteurs de risque majeurs est l'hypercholestérolémie, ainsi les traitements actuels sont hypocholestérolémiants. Malgré les drogues existantes, les maladies cardio-vasculaires restent la cause majeure de mortalité dans les pays industrialisés.Le LF 08-0133 est un produit original des Laboratoires Fournier ayant une activité hypocholestérolémiante, anti-athéromateuse et d'inhibition d'absorption intestinale du cholestérol (IAIC) in vivo.Le but de ce travail est la recherche du mécanisme d'action moléculaire du LF 08-0133. D'abord, l'identification de gènes cibles du produit chez la souris dans l'intestin, le foie et l'aorte a été menée. Parmi de nombreux gènes étudiés du métabolisme du cholestérol, aucun ne voit son expression modifiée par le LF 08-0133 de façon directe. Selon la technique globale d'étude d'expression (RAP-PCR), la drogue ne modifie pas l'expression de gènes dans l'intestin. Cependant, l'hypothèse de modification d'expression ne peut pas être exclue totalement car le transcriptome entier n'a pas été exploré. Le mécanisme d'IAIC a ensuite été étudié en recherchant d'éventuelles protéines cibles intestinales du LF 08-0133. La chromatographie d'affinité avec immobilisation du produit sur une colonne, a permis de purifier 11 bandes protéiques dont l'identification est en cours. Enfin, pour développer un modèle in vitro, l'activité IAIC du LF 08-0133 a été testée sur les cellules Caco-2 (entérocyte), mais le produit s'est révélé inactif.Ainsi, le mécanisme d'action du LF 08-0133 ne semble pas résider dans la régulation de l'expression de gènes, mais pourrait consister en une interaction du produit avec une/des protéine(s) de la muqueuse intestinale. Un des organes cibles du produit semble être l'intestin. Des études supplémentaires sont nécessaires afin d'identifier les cibles moléculaires du LF 08-0133.Atherosclerosis is a disease characterised by lipid accumulation in the vascular wall leading to heart attack or stroke. Hypercholesterolemia is an important risk factor and current treatments are largely based on cholesterol lowering. In spite of proven efficacy of existing drugs, cardiovascular disease still remains the most common cause of death in industrialized countries.LF 08-0133 is an original compound from Fournier Laboratories with hypocholesterolemic and antiatherosclerotic properties. It has further been shown to be an intestinal cholesterol absorption inhibitor (ICAI) in vivo.The aim of this work is to determine the molecular mechanism of action of LF 08-0133. Firstly, the identification of target genes of this compound was attempted in the intestine, liver and aorta of mice. Among the numerous genes of cholesterol metabolism investigated, there was no direct modification of gene expression by LF 08-0133. Additionally, based on the broad gene expression technique employed (RAP-PCR), the compound did not modulate gene expression in the intestine. This does not totally exclude the hypothesis of modification of expression, as the technique employed did not permit a complete coverage of the transcriptome. Secondly, the ICAI mechanism of the drug was investigated by attempting to identify potential intestinal target proteins. LF 08-0133 column immobilisation and subsequent affinity chromatography resulted in the isolation of 11 intestinal protein bands, which are currently being identified. Finally, in an attempt to develop an in vitro model, the ICAI activity of LF 08-0133 was tested in Caco-2 cells (enterocyte) and the drug was found to be inactive.The LF 08-0133 molecular mechanism of action does not appear to involve the regulation of gene expression, but could result from drug intestinal protein interactions. The Intestine appears to be one of target organs of the compound. Further studies are needed to identify molecular targets of LF 08-0133.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF