Les isoformes humaines de Ets-1 (rôle dans la régulation du promoteur de la Stomélysine-1)

Abstract

Ets-1 est un facteur de transcription, membre de la famille Ets, possédant un domaine de liaison à l'ADN fortement conservé permettant de reconnaître des séquences, dénommées EBS (" Ets binding Sites "), qui sont constituées d'un cœur consensus GGAA/T. Ce facteur est capable de réguler l'expression d'un certain nombre de gènes impliqués dans divers processus biologiques, tels que le développement, l'angiogenèse, ou l'invasion tumorale. Parmi ces gènes, celui de la Stromélysine-1 codant une métalloprotéase matricielle, enzyme protéolytique capable de dégrader différents composants de la matrice extra-cellulaire, représente un modèle d'étude particulièrement intéressant. En effet, l'expression de la Stromélysine-1 se trouve dérégulée de façon concomitante à celle de ETS-1 dans certaines pathologies inflammatoires et invasives. De plus, il existe au sein de son promoteur une structure particulière de sites : deux EBS organisés en tandem inversé (ou palindrome). Dans un premier temps, nous avons déterminé le rôle de Ets-1 dans le contrôle de l'expression de la Stromélysine-1 dans un contexte cellulaire en utilisant une lignée de fibroblastes (HIG-82) co-exprimant ces deux protéines. Nos travaux montrent que dans ce contexte, Ets-1 participe directement à la régulation de l'expression basale et induite de la Stromélysine-1. Cette activité passe par la fixation de Ets-1, mise en évidence in vitro et dans la cellule, sur les EBS en palindrome du promoteur de la Stromélysine-1. Dans un deuxième temps, vu les propriétés différentes de régulation du promoteur de la Stromélysine-1 par les deux isoformes humaines de Ets-1, p51 et p42, nous avons recherhcé les mécanismes moléculaires à la base de ce différentiel. Ainsi, il est connu que l'isoforme depleine longueur p51 active fortement le promoteur grâce à la formation d'un complexe ternaire p51-ADN-p51 sur les EBS alors que l'isoforme p42, issue d'un épissage alternatif au niveau de l'exon VII, n'a qu'un faible pouvoir transactivateur et ne forme qu'un complexe binaire p42-ADN. Nos expériences mettent en évidence que la configuration spécifique des deux EBS est incompatible avec la fixation de deux molécules de p42 à cause d'une gêne stérique engendrée par le domaine de liaison à l'ADN. La capacité de p51 à lever cette contrainte résulte du fait qu'elle génère une courbure de l'ADN de direction opposée à celle induite par p42. De plus, nous montrons que l'orientation de la courbure de l'ADN induite au niveau des EBS est déterminante pour l'activité du promoteur de la Stromélysine-1. Enfin, nous avons mis en évidence l'existence d'un nouveau variant d'épissage alternatif de ets-1, ets-1 (III-VI), et caractérisé ses propriétés de régulation transcriptionnelle au niveau du promoteur de la Stromélysine-1. Ce nouveau transcrit, issu d'un épissage au niveau des exons III à VI, est exprimé in vivo dans des extraits de tumeurs et dans divers tissus normaux adultes et fœtaux. La protéine correspondante, dénommée p27, est capable de bloquer l'activation du promoteur de la Stromélysine-1 induite par p51, démontrant ainsi ses propriétés de dominant négatif naturel. L'ensemble de ces données offre une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires régulant l'expression de la Stromélysine-1 et met en lumière l'importance des différentes isoformes de Ets-1 dans ces processus.LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF