Rôle des séquences signal de recombinaison dans le contrôle des réarrangements au locus TCRb

Abstract

Les gènes codant pour les récepteurs antigéniques (TCR et Ig) sont assemblés par un processus de réarrangement somatique dénommé Recombinaison V(D)J. Ce mécanisme est ciblé au niveau de l ADN par les séquences signal de recombinaison (RSS). Ce processus est en grande partie régulé par la structure de la chromatine. Cependant, d autres mécanismes existent, qui opèrent au-delà de l accessibilité, pour réguler plus finement la recombinaison. Un exemple est la restriction B12/23 qui inhibe, malgré la compatibilité 12/23, les réarrangements directs Vb-Jb, et par conséquent assure l incorporation du segment intermédiaire Db. L objectif de ma thèse était de comprendre l impact qu ont les RSS sur l efficacité et la spécificité des recombinaisons V(D)J. J ai focalisé mon étude sur les RSS du TCRb et pour m affranchir des contraintes chromatiniennes, j ai développé un système d étude des clivages in vitro. J ai défini la base mécanistique de la restriction B12/23, mais j ai aussi mis en évidence le rôle majeur de la 23-RSS 3 Db1. En effet, cette RSS dirige l ordre des réarrangements au locus TCRb. Finalement, mes résultats indiquent qu un facteur, exprimé dans les stades immatures de la différenciation T serait impliqué dans la spécificité cellulaire des réarrangements et l exclusion allélique au TCRb. En conclusion, ma thèse contribue à la compréhension des différents mécanismes qui régulent, au-delà de l accessibilité, la recombinaison V(D)J.V(D)J recombination, the process by which antigen receptor is assembled, is targeted by the recombination signal sequences (RSS) that flank each V, D and J coding segment. This process is largely regulated by chromatin structure. However some mechanisms that operate beyond accessibility exist to fine-tune V(D)J recombination regulation. The first example is the B12/23 restriction that impedes, despite 12/23 compatibility, the direct rearrangement between Vb and Jb gene segments; therefore the B12/23 insures the Db segment incorporation. The aim of my thesis was to understand the impact of RSS on VDJ recombination efficiency and specificity. I focused my study on TCRb RSS and to get free from chromatin, I developed an in vitro cleavage assay system. I defined the mechanistic basis of the B12/23 restriction, but also I uncovered a major role for the 23-RSS Db1. Indeed, this RSS dictates a rearrangement order at the TCRb locus. Finally my results point out that a factor expressed in immature DN T-cells, stimulate RAG cleavage activity. This factor is not yet characterized; it might be involved in the cellular specificity of the rearrangement and allelic exclusion at the TCRb locus. To conclude, my thesis contributes to the understanding of these various mechanisms that regulates, beyond accessibility, the V(D)J recombination.AIX-MARSEILLE2-BU Sci.Luminy (130552106) / SudocSudocFranceF