Une question fondamentale en neurobiologie est de comprendre comment une cellule souche multipotente est capable de générer l ensemble du système nerveux central (SNC) que sont les neurones et les cellules gliales. Les gènes proneuraux jouent notamment un rôle dans la transition de l état multipotent de la cellule souche à un état pluripotent, celui du progéniteur neural. Mon projet de thèse a consisté en l analyse du rôle du gène proneural Neurogénine2 (Ngn2) au cours de la neurogenèse embryonnaire et adulte de l hippocampe chez la souris.Les gènes proneuraux (Neurogénines et Mash1), qui codent pour des facteurs de transcription à domaine bHLH (basic Helix Loop Helix), jouent un rôle important dans la formation du SNC. Chez les vertébrés, par exemple, Ngn2 a été impliqué dans le développent du télencéphale dorsal (cortex). Des expériences in vitro ont montrées que Ngn2 favorise la formation de neurones et inhibe la formation de cellules gliales. L analyse du patron d expression de Ngn2 montre que ce dernier est exprimé dans l hippocampe en développement. Cependant, l identité des cellules exprimant Ngn2, leur devenir et la fonction de Ngn2 dans l hippocampe restait méconnue. Ces questions ont été à la base de mon projet de thèse.Le gyrus denté (GD) de l hippocampe est un lieu de neurogenèse secondaire chez l adulte et jouerait un rôle important dans la mémoire spatiale et l apprentissage. Les neurones du GD proviennent de trois groupes de progéniteurs, ou matrices, générés séquentiellement pendant l embryogenèse tardive et la vie post-natale précoce de la souris (du jour embryonnaire 16.5 jusqu au jour post-natal 7). La zone ventriculaire (ZV) médiale du télencéphale contient les progéniteurs qui constituent la matrice primaire. Celle-ci donne naissance à une population de progéniteurs en migration qui constituent la matrice secondaire. Enfin, un troisième groupe de progéniteurs situés dans le GD en développement forme la matrice tertiaire. C est cette dernière qui continue de produire de nouveaux neurones durant la vie adulte de l animal.Nous avons montré par immunohistochimie que Ngn2 est exprimé par les progéniteurs dans les trois matrices formant le GD chez l embryon ainsi que chez le nouveau-né et l adulte. De plus, nous disposons d une lignée de souris Knock-in (KI) GFP pour le gène Ngn2 (Ngn2KIGFP). La stabilité de la GFP nous a permis d analyser le lignage des cellules exprimant et ayant exprimé Ngn2 chez les animaux hétérozygotes (Ngn2GFP/+). Ainsi, nous avons montré que la majorité des neurones granulaires du GD proviennent du lignage Ngn2. L analyse des souris homozygotes mutantes a permis l étude de la fonction de Ngn2 dans la formation du GD. Nous avons observé une perte de progéniteurs et de différenciation des progéniteurs dans les trois matrices formant le GD. D une part, l expression du facteur de transcription NeuroD est une cible directe de Ngn2 dans d autre partie du système nerveux, d autre part il est impliqué dans la différenciation des cellules granulaires du GD. Cependant, l expression de NeuroD ne varie pas chez le mutant Ngn2 supposant que: 1/ NeuroD ne serait pas une cible directe de Ngn2 dans l hippocampe; 2/ un des mécanismes impliqués dans la neurogenèse du GD serait dépendant de Ngn2. Etant donné que la neurogenèse du GD persiste post-natalement, nous avons poursuivi cette analyse au cours de la neurogenèse adulte.L étude des souris hétérozygotes Ngn2KIGFP/+ dans la neurogenèse adulte du GD, ainsi que l utilisation de marqueurs spécifiques des progéniteurs du GD, nous a permis de montrer que Ngn2 est exprimé par les progéniteurs neuronaux qui donnent naissance à des neurones granulaires, comme chez l embryon. En utilisant l acide kainate pour stimuler la neurogenèse adulte, nous avons observé une augmentation de l expression de Ngn2 montrant que Ngn2 peut être utilisé comme marqueur de progéniteurs dans le neurogenèse adulte du GD. Dans le but de discriminer le rôle de Ngn2 chez l adulte de son rôle chez l embryon, nous souhaitons utiliser une approche d inactivation conditionnelle du gène.La stratégie adoptée consiste à croiser les souris Ngn2 floxées avec une lignée de souris transgéniques exprimant la recombinase Cre inductible au tamoxifen (CreERT2). Cette stratégie nous permettra d inactiver Ngn2 à un temps précis. Dans un premier temps, nous avons analysé une nouvelle lignée de souris transgéniques exprimant CreERT2 sous le contrôle du promoteur CMV et de l enhancer du gène b-actin de poulet (pCAGGS). L activité de CreERT2 s avère hautement dépendante du dosage de tamoxifen administré et montre un patron de recombinaison mosaïque, aussi bien chez l embryon que chez l adulte. Cependant, tous les types cellulaires analysés sont affecté par la recombinaison. Afin d analyser la fonction de Ngn2 chez l adulte, nous sommes en train de croiser et d administrer le tamoxifen aux souris Ngn2 floxées; CreERT2.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF