Clonage moléculaire et caractérisation d'antigènes des stades larves nouveau-nées et adultes de Trichinella spiralis et développement d'un test ELISA pour le diagnostic précoce de la trichinellose chez le porc

Abstract

L'hybridation soustractive et l immunocriblage de banques d ADNc ont permis d identifier de nouveaux transcrits des stades larves nouveau-nées (L1NN) et vers adultes de Trichinella spiralis. Certaines protéines (AdTs1, TsSerP, protéine ayant un motif en doigt de zinc FYVE, collagène cuticulaire) n ont montré qu une antigénicité relative. Une famille multigénique polymorphe d au moins 8 membres codant des protéases à sérine putatives a été définie. Une de ces protéases recombinantes a induit une protection partielle contre l infection parasitaire chez des souris. Le clone NBLWN10 présente un motif cystatine précédé de deux domaines répétés à forte identité et antigéniques. Le clone 411 a présenté une forte antigénicité vis à vis de sérums de porcs infectés par Trichinella spp. Un épitope immunodominant issu de la protéase à serine NBL1 a été identifié pour la première fois au stade L1NN de Trichinella et permet le développement d un test ELISA de diagnostic précoce de la trichinellose porcine.Several genes were identified from newborn larvae (NBL) and adult stages of Trichinella spiralis using suppression subtractive hybridization and immunoscreening of cDNA libraries. Certain proteins (AdTs1, TsSerP, a protein with a zinc FYVE finger, a cuticular collagen) only showed a weak antigenicity. A polymorphic multigenic family composed of at least 8 members that encode putative serine proteases was defined. The recombinant protein of one member of this family induced a partial protection against T. spiralis infection in mice. Clone NBLWN10 presents a cystatin domain preceded by two repeated antigenic regions with high identity. Clone 411 showed a strong antigenicity to serums of pigs infected by Trichinella spp. An immunodominant epitope of a NBL stage specific serine protease NBL1 was identified for the first time and allows the development of an ELISA test for the early diagnosis of pig trichinellosis.PARIS12-CRETEIL BU Multidisc. (940282102) / SudocSudocFranceF