Caractérisation de gènes impliqués dans la formation de l'endoderme primitif lors de l'embryogenèse précoce de la souris

Abstract

De nombreux travaux menés sur l'embryon de souris ont permis de caractériser morphologiquement les 1ères étapes de développement des mammifères. En revanche, les mécanismes moléculaires régissant le déroulement de ces étapes sont encore peu connus à ce jour. Dans l'équipe, notre but est de comprendre ces mécanismes en se focalisant sur la formation de l'endoderme primitif (EPr), le 2ème type cellulaire à se différencier au cours de l'embryogenèse. L'EPr est un tissu extra-embryonnaire qui se forme avant l'implantation dans l'utérus maternel. Bien que ne contribuant pas à la formation de l'embryon lui-même, ce tissu reste néanmoins nécessaire à sa survie et à son développement correct. Afin d'identifier de nouveaux gènes impliqués dans la formation de l'EPr, j'ai analysé un microarray réalisé sur les 1ers stades de l'embryogenèse. Cette analyse a permis de définir de nouveaux gènes précoces, potentiellement spécifiques de l'EPR. En utilisant les techniques de RT-PCR et de localisation in situ, j'ai analysé 2 des gènes sélectionnés : Lrp2 et Dkkl. L'étude approfondie du profil d'expression du récepteur LRP2 entre E2.5 et E4.5 a permis l'élaboration d'un modèle de différenciation épithéliale. Parallèlement à ces travaux, j'ai développé une nouvelle technique pour réaliser des analyses fonctionnelles in vivo. Cette méthode d'électroporation in vivo combine les techniques d'électroporation, d'interférence ARN et de culture d'embryons et ouvre de nombreuses perspectives pour les travaux sur l'embryogenèse précoce.Numerous studies in the mouse embryo have characterised morphological events during preimplantation development. However, molecular mechanisms driving cell fate ad differentiation are not yet well understood. The objective of our group is to analyse the mechanisms of cell differentiation by focusing on primitive endoderm (PrE) formation, the second cell type to differentiate in the embryo. PrE is an extraembryonnic tisssue that appears before implantation. Although PrE does not contribute to the embryo proper, it is necessary for both survival and correct development of the embryo. In order to identify new genes implicated in PrE formation, I analysed microarrays performed on early embryonic stages. This resulted in the identification of new early genes that are potentially specific to PrE. Using RT-PCR and in situ localisation, I analysed two of the selected genes : Lrp2 and Dkkl. A detailed study of LRP2 expression between E2.5 and E4.5 gave rise to a model of epithelial differentiation. In parallel with this work, I developed a new method for in vivo functional analysis. It combines electroporation, RNA interference and embryo culture and open perspectives new for studing early embryogenesis.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocSudocFranceF