Notch1, développement normal et cancers

Abstract

Le récepteur Notch1 est mis en cause dans de nombreux processus biologiques tel que la différenciation, le maintien du potentiel de différenciation, la mort cellulaire et même la cancérisation. Récemment le récepteur Notch1 a été co-immunoprécipité avec la protéine Nov qui appartient à la famille des gènes CCN. Dans un premier temps, nous avons étudié l expression de deux gènes de la famille CCN : CCN1 et CCN3 au cours du développement aviaire. Ce modèle présente de nombreux avantages pour l étude du développement notamment l accessibilité des embryons. Dans ce modèle, nous nous sommes particulièrement intéressés à l épithélium olfactif pour l étude du récepteur Notch1. Cet organe présente la particularité de comporter des cellules nerveuses et d être capable de se renouveler tout au long de la vie suggérant la présence de cellules souches dans cet organe. Des cultures primaires d épithéliums olfactifs d embryons de poulets ainsi que la caractérisation de ces cellules ont été réalisées. Les cellules souches de cet organe ont ensuite été isolées par la méthode de fractionnement par couplage flux / force (SdFFF). Le récepteur Notch1 étant impliqué dans les processus de différenciation neuronale au cours du développement, nous avons étudié le niveau d expression de ces transcrits au cours de la mise en place de l épithélium olfactif aviaire. Nous avons pu mettre en évidence l implication du récepteur Notch1 au cours de l ontogenèse de cet organe. Puis le récepteur a été étudié dans un modèle tumoral glial : U-87 MG. L étude in vitro a permis de montrer la présence du récepteur et de quatre de ses ligands. Les cellules U-87 MG on ensuite été traitées par différentes molécules (FasL, étoposide, déxaméthasone) afin d induire l apoptose. Les variations d expression du récepteur Notch1 en fonction des traitements ont été observées. L utilisation d un inhibiteur des gamma-sécrétases inhibant le clivage S3 du récepteur Notch permet une diminution de l apoptose induite pas FasL dans les cellules U-87 MG. Dans un second temps, un modèle in vivo de glioblastome humain a été mis au point dans le laboratoire. Les molécules utilisées in vitro ont été testées sur notre modèle de xénogreffes. Les traitements par FasL / étoposide / déxaméthasone ont permis une diminution importante de la taille des tumeurs et une amélioration des symptômes cliniques. Il semblait pertinent d étudier la mise en cause du récepteur Notch1 au cours de ce phénomène de cancérisation. Il semble qu une diminution du niveau d expression du récepteur Notch1 soit observée après exposition FasL / étoposide et FasL / étoposide / dexaméthasone.Notch1 receptor participates in several biological processes as cellular differentiation, self renewal potential, apoptosis and carcinogenesis. This protein was shown to have physical interaction with Nov, a member of the CCN gene family. Avian olfactory epithelium is known to have neuronal cell renewal. At first, this potential function was studied using avian olfactory primary cell culture and stem cells were purified using SdFFF method. Notch1 receptor was then studied by in situ hybridization during avian olfactory development in order to know Notch1 expression during neuronal cell production. We determined that Notch1 receptor was implicated during avian olfactory ontogenesis. In a second time, Notch1 receptor was studied in a glioblastoma cell line: U-87 MG cells. In order to induce apoptosis in theses cells different treatments were tested: FasL, etoposide and dexamethazone. Notch1 expression was observed after these different treatments to understand its role during U-87 MG cells apoptosis. We determine that Notch1 expression was modified after treatments and that FasL- induced apoptosis was decreased when Notch1 was inactivated by a gamma-secretase inhibitor. Apoptotic molecules were then tested after U-87 MG cell xenografts. An important decrease of tumour size was observed after treatments. At the end, Notch1 expression was observed in our model. Its expression seemed to be reduced after our treatments in vivo.LIMOGES-BU Sciences (870852109) / SudocSudocFranceF