Caractérisation des larges vacuoles observées dans les spermatozoïdes en microscopie à contraste interférentiel de Nomarski

Abstract

La prise en charge de l'infertilité masculine bénéficie de nouvelles techniques. Ainsi, le MSOME (Motile Sperm Organellar Morphology Examination) permet de détecter des anomalies morphologiques dans des spermatozoïdes humains mobiles à un grossissement de 6600 , en particulier des vacuoles au niveau des têtes spermatiques. Les vacuoles de grande taille semblent avoir un impact délétère sur le développement embryonnaire. Cependant, l'origine de ces vacuoles et les structures (noyau, acrosome, membrane plasmique) impliquées dans leur genèse restent à déterminer. L'objectif de notre travail a été de caractériser ces vacuoles dans une population de spermatozoïdes présentant des vacuoles occupant plus de 13% de la surface de la tête des spermatozoïdes (type 3). Matériel et Méthodes : Vingt hommes âgés de 27 à 51 ans ont été inclus dans l'étude. Les recueils de sperme ont été effectués dans le cadre d'un spermogramme ou d'une tentative de fécondation in vitro. Pour un même éjaculat, deux types de lame ont été préparés : un premier type réalisé à partir du sperme entier et un deuxième type sur lequel uniquement des spermatozoïdes de type 3 ont été isolés à un grossissement de 6600x par microscopie à contraste interférentiel équipé d'un objectif de Nomarski. Une évaluation de l'acrosome par immunomarquage à l'aide d'un anticorps monoclonal anti-proacrosine (Mab4D4) a été associée à une détection de la fragmentation de l'ADN par la technique TUNEL, une analyse de la condensation de la chromatine par une coloration au bleu d'aniline et une détermination du taux d'aneuploïdie par hybridation in situ en fluorescence chromosomique (FISH). Une observation des échantillons par microscopies électronique et confocale a complété ces analyses. Les résultats obtenus ont été comparés entre les spermatozoïdes de type 3 et les spermatozoïdes de sperme entier. Résultats : Une augmentation significative du taux d'acrosomes malformés (acrosomes atypiques et absents) a été montrée dans les spermatozoïdes de type 3 par comparaison au sperme entier (77,8%+-2,49 vs 70,6%+-2,62 ; p=0,014). Une augmentation significative de la fragmentation totale de l'ADN (TUNEL positif) a été constatée dans les spermatozoïdes issus du sperme entier par comparaison au spermatozoïdes de type 3(8,6%+-1,09 vs 1,7%+-0,65 ; p<0,0001) tandis qu' une initiation de la fragmentation de l'ADN (TUNEL punctiforme) a été observée de manière comparable entre les deux échantillons comparés (14,5%+-3,45 vs 11,5%+-1,25 ; p=0,68). Un défaut de condensation de la chromatine ainsi qu'une augmentation significative du taux d'aneuploïdie ont été retrouvés dans les spermatozoïdes isolés par comparaison à ceux provenant du sperme entier (respectivement 50,4%+-3,1 vs 26,5%+-2,6 : p<0,0001 et 5,16%+-1,23 vs 0,84%+-0,08 ; p=0,01). Les analyses par microscopies électronique et confocale ont montré une localisation exclusivement nucléaire des vacuoles. Conclusion : Une augmentation de la fréquence des anomalies nucléaires et acrosomiques est mise en évidence dans les spermatozoïdes à larges vacuoles.ROUEN-BU Médecine-Pharmacie (765402102) / SudocSudocFranceF