Etudes structurales et fonctionnelles de la sous-unité PA du complexe polymérasique du virus influenza

Abstract

La polymérase du virus de la grippe est un complexe hétérotrimérique composé des sous-unités PB1,PB2 et PA. Le rOle de ce complexe est de répliquer et de transcrire les génomes viraux, au sein du compartiment nucléaire. Malgré les nombreux efforts déployés sur l'étudE de la polymérase, seules des reconstructions par microscopie électronique sont disponibles sur ce complexe. Récemment, notre laboratoire a lancé un projet d'étude structurale et fonctionnelle sur ce complexe, permettant d'obtenir les structures tridimensionnelles dE plusieurs domaines de la sous-unité PB2. Au cours de mes travaux de thése, nous sommes parvenus à résoudre la structure d'un domaine de PA : Le domaine N-terminal contenant 209 résidus. Nous avons montré que ce domaine présente une similarité structurale avec les enzymes de restriction de type Il et qu'il posséde une activité nucléase (DNase et RNase). De ce fait, ce domaine peut être classé dans la grande famille des enzymes à motif PD-D/EXK. Cette étude associée aux données structurales collectées sur la sous unité PB2, permet de mieux comprendre le mécanisme de vol de coiffe, spécifique du virus de la grippe. Enfin, l'obtention de la structure tridimensionnelle de ce domaine présentant une activité enzymatique est prometteur pour la conception rationnelle d'inhibiteur spécifiquE1de l'endonucléase du virus influenza.The influenza virus polymerase is a heterotrimeric complex composed of PA, PB1 and PB2 subunits. This complex is dedicated to replication and transcription of the viral genome, inside the nuclear compartment. Despite much research performed on the polymerase, the only structural data available on this complex are reconstructions made by electronic microscopy. Recently, our laboratory has initiated a structural and functional project on this complex, which led to the structure determination of several PB2 domains. My thesis work led to the structure determination of another domain from the PA subunit: the N-terminal domain encompassing the 209 first residues. We have shown that this domain shares structural similarities with type Il restriction enzymes and that it possesses nuclease activity (DNase and RNase). Indeed, this domain belongs to the PD-D/EXK enzyme family. This work, together with structural data collected on PB2, gives a better view of the cap-snatching mechanism, which is specifie of the influenza virus. Eventually, the availability of the structure of the enzymatically active PA-Nter domain should aid the design of a specifie inhibitor of the influenza virus endonuclease.GRENOBLE1-BU Sciences (384212103) / SudocSudocFranceF