Etude de protéines impliquées dans l'oligomérisation, la sécrétion, l'ancrage membranaire et la localisation fonctionnelle de l'acétylcholinestérase dans le cerveau des mammifères
Both the catalytic domains and the C-terminal t peptides contribute to the capacity of cholinesterases to form and secrete various oligomers. The AChE-PRiMA complex is at least partially contained in lipid rafts, both in the rat brain and in transfected neuroblastoma and COS cells. The potential phosphorylation sites and palmitoylation sites are not required for recruitment of the complex in the rafts. We undertook a search for such potential partners by two-hybrid strategies, both in yeast and in E. coli. Five potential partners were obtained several times, and one of those obtained from the yeast screen appeared also positive in the bacterial screen. This corresponds to a zinc-finger rich protein, which may act as a transcriptional regulator but was also shown to bind a short C-terminal peptide from a membrane receptor. The CutA protein affects the processing of proteins in the secretory pathway, facilitating tetramerization of AChEt.Nous avons construit des protéines chimères dans lesquelles les peptides t ont été échangés entre les deux cholinestérases, et nous avons introduit diverses mutations dans ces peptides. Nous avons montré que le domaine catalytique et le peptide t contribuent à la capacité d'oligomérisation et à la sécrétion des cholinestérases. Nous avons entrepris de rechercher de tels partenaires potentiels, en utilisant la stratégie de double-hybride, chez la levure et chez E. coli, avec la région C-terminale de PRiMA I comme appât et des banques d'ADNc issues de cerveau humain. Cinq partenaires potentiels ont été obtenus plusieurs fois chez la levure Le complexe AChE-PRiMA est au moins partiellement intégré dans des sous-domaines membranaires appelés rafts , aussi bien dans le cerveau de rat que dans des cellules de neuroblastomes ou des cellules COS transfectées. En mutant ces résidus, nous avons montré que les modifications post tranductionelle ne sont pas nécessaires pour le recrutement dans les rafts . Nous avons trouvé que l'expression de la forme longue de mCutA réduit la production d'AChEt et que ceci dépend du peptide C-terminal t. Nous avons également observé que la co-expression avec mCutA augmente la formation de tétramères et facilite la tétramérisation de l'AChEy de manière directe ou indirectePARIS5-BU Méd.Cochin (751142101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF