Métabolisme du fer (Hepcidine et Prohepcidine)

Abstract

L'hepcidine (25 a.a. riche en cystéine produit majoritairement par le foie sous forme d'un propeptide de 84 a.a.) régule la concentration de fer dans l'organisme en inhibant l'absorption du fer intestinal et en inhibant le stockage du fer recyclé par les macrophages. Sa production n'est pas simple à cause des ponts disulfure et de sa propension à s'agréger ce qui entraîne l'obtention de rendements faibles. L'objectif du travail était de mettre au point une méthode d'expression et de purification d'hepcidine et de prohepcidine. Les hepcidines et prohepcidines sont exprimées dans E. coli en fusion avec la thiorédoxine, et 2 différentes étiquettes. Après purification, les hepcidines et les prohepcidines sont correctement repliées et contiennent les ponts disulfures attendus sans étape de renaturation ou d'oxydation. L'hepcidine (humaine, souris) et la prohepcidine produites sont actives. Nous avons montré que la prohepcidine doit être maturée pour induire la dégradation de la ferroportine.Hepcidin (25 a.a. peptide, produced in the liver as a preprohormone 84 a.a., containing 4 disulfide bridges) control iron concentration in the body by inhibiting intestinal iron absorption and iron recycling by macrophages. Our project was to get a reliable source of hepcidin, this is not simple due to the 4 disulfide bridges problem, hepcidin is extremely prone to aggregation and its peptidic synthesis yield is very poor. We have achieved the production and purification of biologically active hepcidin (mouse and human), using a Thioredoxin fusion protein based E. Coli expression system that does not require any renaturation step. Peptides biological activity was tested for their ability to induce ferroportin degradation. Hepcidins were active. We report the production of prohepcidin wt & mutant (furin clivage resistant) with good yield. Using Prohepcidin wt & mutant, we demonstrate that activity of prohepcidin towards FPN is only related to its capacity to generate hepcidin.PARIS5-BU Saints-Pères (751062109) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF