Imagerie de la cinétique chimique par modulation de température (conception, validation et mise en oeuvre)

Abstract

Nous avons conçu un microdispositif qui permet de faire osciller la température d'un mélange réactionnel à des fréquences variant entre 0,01 Hz et 100 Hz, avec une amplitude de 1 K. Par ailleurs, la chambre microfluidique a été imagée avec un microscope à épifluorescence fonctionnant à deux couleurs. Tout d'abord, pour contrôler les transferts thermiques à l'intérieur du dispositif, nous avons développé des système chimiques permettant une mesure ratiométrique de la température. Deux types de sondes thermométriques fluorescentes ont ainsi été étudiées: des balises moléculaires utilisant le phénomène de transfert d'énergie résonnant de type Förster (FRET), et une sonde de nature acido-basique. Ces molécules, qui peuvent être utilisées entre 5 C et 35 C sont caractérisées par une sensibilité relative de mesure d'environ 5 %.K-1 et un temps de réponse allant de la milliseconde à la microseconde. Enfin, nous avons analysé dans la chambre microfluidique la dépendance en fréquence de l'amplitude de la réponse d'un mélange réactionnel à des oscillations basses fréquences de la température. Nous avons ainsi mesuré sélectivement les constantes cinétiques de l'hybridation de deux oligonucléotides: kouverture=0,35 s-1 et kfermeture=4,7.10^5 L.mol-1.s-1.PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF