Bases moléculaires du pouvoir pathogène et développement d une méthode de quantification différentielle des quatre brinsgénomiques chez l Avibirnavirus de la bursite infectieuse

Abstract

La bursite infectieuse est une maladie des jeunes poulets (espèce Gallus gallus) provoquée par un virus (IBDV, famille Birnaviridae, genre Avibirnavirus) à génome bisegmenté (A & B) composé d ARN double-brin. Le cycle viral est peu documenté concernant le moment et le lieu de synthèse des brins positifs et négatifs. Dans une première partie de cette étude, une technique de RT-PCR quantitative en temps réel spécifique de chacun des brins des deux segments a été développée. L application de celle-ci à des particules virales d IBDV purifiées ainsi qu à une cinétique de production de brins in-vitro renseigne respectivement sur le contenu génomique du virus ainsi que sur son mode de réplication. Ces résultats suggèrent, entre autres, que la synthèse des brins négatifs ne survient qu après le recrutement équimolaire des brins positifs A et B au sein de la particule virale. Dans une deuxième partie, les bases moléculaires du pouvoir pathogène ont été étudiées, le niveau de pathogénicité des souches étant variable et pouvant se traduire par une forte mortalité pour les souches les plus virulentes (vvIBDV). Cependant, aucun marqueur de pathogénicité n est clairement identifié. L étude s est effectuée à partir d un isolat (94432) faiblement pathogène (faible morbidité, pas de mortalité) malgré un génome phylogéniquement apparenté aux vvIBDV. Par la génétique inverse, des virus recombinants dérivés de 94432 ont été caractérisés in-vivo. Les résultats obtenus permettent de documenter un rôle important de la polymérase virale (codée par B) dans la réduction du pouvoir pathogène de 94432, et notamment de l acide aminé en position 276 dont l implication biologique est encore inconnue.Infectious Bursal Disease (IBD) is an infectious disease of young chickens (Gallus gallus) caused by a bisegmented (A & B) double-stranded RNA genome virus (IBDV, family Birnaviridae, genus Avibirnavirus). The virus replication cycle is not fully described regarding the time and place of strand synthesis. In a first part of this study, four real-time quantitative RT-PCR methods, able to quantify specifically each strand of the IBDV genome, were developed. Implementation of these methods on purified IBDV particles and on a kinetic study of in-vitro strand production provided interesting data as to the possible genomic content of virus particles and to the replication model, respectively. These results suggest that negative strand synthesis occurs after equimolar positive strand (A & B) packaging inside nascent virus particle. Molecular basis of the pathogenicity have been investigated in a second study. Very virulent IBDV strain (vvIBDV) can induce important clinical sign and mortality rates but no reliable molecular marker has been definitely identified yet. This study was carried out on a field strain (94432) which, in spite of being phylogenetically related to vvIBDVs, does not induce any mortality and only low morbidity in chickens. Using a reverse genetic system associated to 94432, several recombinant derived-94432 viruses were characterized in-vivo. Results demonstrated an important contribution of the polymerase encoded-segment B, especially of one amino acid at position 276, in the reduced pathogenicity of 94432. The biological function of amino acid 276 remains unknown.RENNES1-BU Sciences Philo (352382102) / SudocSudocFranceF