Mise au point d'un test phénotypique basé sur la restauration de la sensibilité au moxalactam par l'EDTA pour l'identification rapide des métallo-b-lactamases chez les entérobactéries

Abstract

Face à l émergence des b-lactamases à spectre étendu et des céphalosporinases hyperproduites et plasmidiques, l utilisation des carbapénémes s est accentuée favorisant la sélection de souches productrices de carbapénémases. Les métallo-b-lactamases (MBL) telles que NDM-1 sont un enjeu de santé publique en raison de leur caractère transmissible fortement épidémique parmi les entérobactéries. Les recommandations actuelles conseillent de tester la sensibilité aux carbapénèmes pour le screening des souches d entérobactéries sécrétrices de MBL et la mise en œuvre de techniques complémentaires, comme le Hodge test, pour confirmer le résultat. Malheureusement, cette méthode est prise à défaut lorsque le niveau de production de l enzyme est insuffisant pour conférer une résistance aux carbapénèmes. Pour se départir du problème, nous avons développé une nouvelle technique de dépistage basée sur la détermination de la sensibilité au moxalactam. Cette céphamycine présente la particularité d être exclusivement et fortement hydrolysée par les MBL. Nous avons testé le screening des MBL par le moxalactam (MOX) puis par un test de synergie MOX/EDTA utilisant un inhibiteur spécifique des MBL. Tous les transconjuguants et les souches cliniques produisant une MBL apparaissaient résistants au moxalactam. Le test de synergie MOX/EDTA s est révélé positif pour tous les isolats. Ce test de dépistage présente une sensibilité et une spécificité de 100 % pour le dépistage des MBL. Il s agit d une méthode de détection phénotypique peu coûteuse, rapide et facile d interprétation pouvant être utilisée en routine dans tous les laboratoires y compris ceux des pays émergents.The use of carbapenem has increased over the emergence of extended spectrum b-lactamases, thus allowing the selection of carbapenemase-producing clinical isolates. Metallo-b-lactamases (MBL) such as NDM-1 are a major public health problem due to their hight epidemic potential among Enterobacteriaceae. Current recommendations advocate suceptibility testing to carbapenems to screen for MBL producing enterobacterial and to carry out additionnal tests, such as the Hodge test, to confirm the result. Unfortunately, this approach fails to detect carbapenemase production in low-producing enterobacterial isolates. To overcome this lack of sensitivity, we developed a new screening technique based on susceptibility testing to moxalactam. This cephamycin has the pediculiarity to be highly hydrolysed by MBL but classes A, C, D b-lactamases. All MBL producing transconjugants and clinical isolates that were test in our study were resistant to moxalactam, thus confirming the sensitivity of this test. The MOX/EDTA synergy test was positive for all MBL isolates whereas it was negative for all clinical isolates producing KPC, AmpC or OXA-48 b-lactamases which confirms the specificity of this confirmation method. This assay, which is performed with inexpensive reagents, is appropriate for specific MBL identification in countries with limited resources.AMIENS-BU Santé (800212102) / SudocSudocFranceF