Etude lipidomique de la neurodégénérescence et de la maladie d'Alzheimer

Abstract

Ces travaux de thèse ont visé à approfondir nos connaissances sur l implication des lipides dans la neurodégénérescence et la maladie d Alzheimer. Afin de parvenir à cet objectif, des développements méthodologiques préalables en chimie analytiques ont été nécessaires de manière à procéder à l analyse la plus exhaustive possible du lipidome de différents organismes. Une étude fondamentale a été menée afin d évaluer l apport de la photoionisation à pression atmosphérique (APPI) à l analyse par spectrométrie de masse d une large gamme de lipides. La méthode développée en APPI a été appliquée à l étude de cultures cellulaires de Leishmania donovani. Trois approches analytiques présentant des degrés de sélectivité différents et utilisant un large panel de méthodologies de couplage entre la chromatographie liquide à ultra-haute performance et la spectrométrie de masse ont également été développées. Une méthode globale d analyse sans a priori a été mise en œuvre afin d obtenir une empreinte lipidique de l échantillon par spectrométrie de masse à haute résolution. Des informations plus détaillées peuvent être obtenues en ayant recours aux cinq méthodes semi-globales développées qui exploitent la sélectivité procurée par la spectrométrie de masse en tandem. Enfin, trois méthodes d analyse ciblées visant à quantifier des espèces d intérêt majeur pour notre problématique biologique ont été optimisées. Ce large panel de méthodes d analyse lipidomique a été utilisé pour révéler à l aide d outils statistiques multivariés les altérations de la composition lipidique de différents types d échantillons murins et humains.This thesis work aimed to further our knowledge on the involvement of lipids in neurodegeneration and Alzheimer's disease. In order to achieve this objective, preliminary methodological developments in analytical chemistry were necessary in order to proceed with the analysis as comprehensive as possible of the lipidome of different organisms. A fundamental study was conducted to assess the contribution of atmospheric pressure photoionization (APPI) to the analysis by mass spectrometry of a wide range of lipids. The method developed in APPI has been applied to the study of cell cultures of Leishmania donovani. Three analytical approaches with different degrees of selectivity and using a wide range of methodologies for coupling ultra-high performance liquid chromatography and mass spectrometry have also been developed. A global method of analysis without a priori knowledge has been implemented in order to obtain a fingerprint of the lipid sample by high resolution mass spectrometry. More detailed information can be obtained through the use of five semi-targeted methods developed that exploit the selectivity provided by tandem mass spectrometry. Finally, three targeted methods aiming to quantify lipid species of major interest to our biological problems have been optimized. This wide range of analytical methods in lipidomics has been used to reveal using multivariate statistical tools alterations in lipid composition of different types of mouse and human samples.PARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF