Etude de la surveillance des ARN d Immunoglobulines au cours du développement lymphocytaire B

Abstract

L expression des immunoglobulines (Ig) par les lymphocytes B est assurée par des mécanismes particulièrement complexes et précisément régulés. Le processus aléatoire de recombinaisons V(D)J source de diversité du répertoire des lymphocytes B génère dans deux tiers des cas un décalage du cadre de lecture et à l apparition d un codon stop prématuré (PTC). Pour empêcher la traduction des transcrits contenant des PTC et, par conséquent la synthèse de protéines tronquées, la cellule utilise différents mécanismes de contrôle qualité des ARN. La thématique développée au cours de cette thèse a consisté à étudier ces mécanismes dits de surveillance des ARN au cours du développement lymphocytaire B, en utilisant les transcrits d Ig issus de réarrangements V(D)J hors phase comme modèles. Parmi les mécanismes de surveillance des ARN, l inhibition d épissage permet de limiter l apparition de transcrit matures (ARNm) contenant des PTC et provoque une accumulation de transcrits primaires (pré-ARNm) ; le NAS (nonsense-associated altered splicing) permet d éliminer l exon contenant un PTC lors de l épissage : phénomène de saut d exon ; et, le NMD (nonsense-mediated mRNA decay) permet de dégrader les ARNm contenant des PTC, Ces processus sont très actifs dans la lignée lymphoïde puisque l apparition de PTC y est fréquemment observée. Nous avons étudié la surveillance des ARN de chaînes légères d Ig et quantifié l efficacité de ces différents mécanismes : NMD, NAS et inhibition d épissage au cours de la maturation B (Chemin et al., 2010). Cette étude a permis de montrer que la coopération entre ces processus individuellement peu efficaces permettait de diminuer drastiquement le taux d ARNm Ig contenant des PTCs. L étude de la surveillance des ARNs de chaînes lourdes d Ig a révélé une transcription identique des allèles productifs (VDJ+) et non-productifs (VDJ-) et, le lien étroit entre l intensité de transcription, l épissage et la dégradation par NMD au cours de l activation B et de la différentiation plasmocytaire (Tinguely et al., 2011). Nous avons également analysé l influence des séquences introniques sur le processus de NAS et montré que la présence de sites donneurs d épissage au sein de l intron J -C semble diminuer l épissage alternatif de type L-C et favoriser la rétention de séquences introniques. Enfin, nous avons mis en évidence l existence d une contre-sélection des cellules contenant des allèles Ig non productifs, présentant un PTC au sein de l exon variable (classe VJPTC), au cours du développement B et de la différenciation plasmocytaire. Cette diminution semble corrélée à une faible dégradation par NMD et à un fort épissage alternatif des transcrits issus des allèles VJPTC (Chemin et al., en préparation). Dans les 2 cas, ces transcrits peuvent conduire à la production d Ig tronquées, potentiellement néfastes pour les cellules B et plasmocytaires. Bien que d autres travaux soient nécessaires pour identifier l impact physiologique des Ig tronquées, des approches thérapeutiques visant à induire la production d Ig tronquées à l aide d inhibiteurs du NMD, pourraient être envisagées dans le traitement du myélome ou d autres tumeurs lymphoïdes B.LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocSudocFranceF