Givord, Louise

Hirth, L.

Pfeiffer, P.

Horizon / Pleins textes

C. R. Acad. Sc. Paris, t. 275 (2 octobre 1972) 
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Série D - 1563 
VIROLOGIE. - Un nouveau virus du groupe di la Mosaïque Jaune du Navet : 
le virus de la Mosaïque du Goïnbo (Hibiscus esculentus L. Malvacée).. Note (*) 
de Mme Louise Givord, MM. Pierre Pfeiffer et Léon Hirth, présentée par 
M. Roger Gautheret. 
. Un nouveau virus des Malvacées a été découvert en Côte-d‘Ivoire. I1 provoque une Mosaïque 
sur Hibiscus esculeiztw et peut infecter des plantes de familles diverses. Sa purification et ses proprié- 
tés sont décrites. On a montré qu’il s’agissait d‘un virus du groupe du virus de la Mosaïque Jaune du 
Navet (VMJN). 
INTRODUCTION. -Au début de 1969, une mosaïque et des bandes vert clair 
le long des nervures principales ont été observées sur une plante vivrière, le Gombo 
(Hibiscus esculerttus L.) dans les champs de la station d‘expérimentation agricole 
de Bouaké puis dans les cultures villageoises de la Basse Côte-d’Ivoire. 
La présente Note démontre la nature virale de la maladie et décrit la purification 
et les propriétés physicochimiques du virus qui s’est révélé n’avoir jamais été signalé 
jusqu’ici. 
~ 
MATÉRIEL ET MÉTHODES. - a. Trarzsmìssiorzs. - L’inoculum initial était consti- 
tué de feuilles de H. esculentus infectées prélevées dans les champs. Ces feuilles ont 
été broyées et l’extrait brut qui en est résulté a été inoculé mécaniquement à son 
hôte naturel : H. esculentus, var. Clemson spineless. La croissance des plantes et. 
leur inoculation sont toujours effectuées en cages mettant les plantes à l’abri des 
insectes. Les plantes sont soumises aux conditions climatiques naturelles (tempé- 
rature moyenne 28 OC, humidité moyenne 90 %). 
Les essais de transkssion par aphides ont été effectués selon la technique de 
Swenson (I) avec Aphis gossypii Glov. ; la transmission par Aleyrodes (Bemisia 
tabaci Genn.) a été tentée dans les conditions décrites par Capoor et Varma (’). 
La méthode classique de transmission par Cuscute (Cuscuta subinclusa Durr. et 
Hilg.) a été également expérimentée. 
‘ 
b. Sur l’extrait brut ont été déterminés ; 
- le point d’inactivation thermique de l’agent pathogène, en chauffant 2 mP 
de l’extrait brut pendant 10 mn à différentes températures (de 50 à l 0 0  OC) ; 
- la survie de l’agent pathogène par conservation des échantillons à tempéra- 
ture ambiante (24 O C )  pendant plusieurs jours ; 
- la résistaice à la dessiccation par l’exposition des feuilles de H. esculentus 
malades à l’air ambiant pendant plusieurs semaines ; chaque semaine, une feuille 
est broyée et le pouvoir infectieux de l’extrait brut éprouvé sur H. esculentus. 
La détermination du pouvoir infectieux de l’extrait brut traité de ces différentes 
manières a été examinée par la méthode de Raymer et Diener (3) en utilisant comme 
plante hôte H. esculentus. 
c. PuriJication du virus. - Les feuilles de plantes malades sont congelCes et 
broyées en présence de tampon phosphate de sodium 0’01 My pH 7’0, additionné 3 @ 1972 
1564 - Série D C. ,R. Acad. Sc. Paris, t. 275 (2 octobre 1972) 
de bisulfite de Na à 3 % et de bentonite à 1 %. Après clarification, on a additionné 
à l’extrait 1/2 volume de n-butanol, agité 5 mn et conservé pendant 1 h à 4 OC.. 
L’émulsion a été cassée par une centrifugation à 8 O00 g, puis la phase aqueuse a 
subi trois cycles de centrifugation alternée à haute et basse vitesse. 
d. Microscopie électronique. - A partir des suspensions obtenues après puri- 
scation, des, grilles de microscopie électronique ont été préparées selon, la technique 
de Mellena et coll. (”) et observées avec un microscope électronique a Siemens 
Elmiscop 1 A)). 
e. Immunologie. - Un antisérum spécifique de l’agent pathogène a été fabriqué 
par la méthode de Van Regenmortel (’). La réaction entre l’antigène et l’anticorps 
a été étudiée par double diffusion en gel d’agar ( 6 )  et par précipitation en tubes. 
RÉS~TATS.  -La transmission mécanique de la maladie a été obtenue très faci- 
lement de Gombo à Gombo et du Gombo à 40 espèces de Malvacées ainsi qu’à 
des plantes appartenant à d’autres familles (Amaranthacées, Chenopodiacées, 
Convolvulacées, Cucurbitacées, Euphorbiacées, Légumineuses, Solanacées et Urti- 
cacées). La liste complète des espèces sensibles et non sensibles au virus sera publiée 
dans un mémoire en préparation. 
La transmission par cuscute, tentée à partir de différentes espèces infectées à 
différentes plantes. saines, est restée sans succès. 
Les résultats des essais de transmission par insecte ont été négatifs. 
Le virus produit essentiellement des symptômes de Mosaïque, d’éclaircissement 
des nervures, des bandes vert clair plus ou moins larges le long des nervures princi- 
pales chez les Malvacées (’g. A). Dans les autres familles, il fait apparaître une 
tacheture plus ou moins fine et régulière ou bien des taches annulaires (en particulier 
chez les Chenopodiacées). 
, 
Les propriétés de l’extrait brut sont les suivantes : 
Température d’inactivation : 80 OC 
Longévité in vitro : 9 jours 
Point de dilution limite : 
Notons e d n  que le pouvoir pathogène de l’agent infectieux se manifeste encore 
Les suspensions purifiées sont toujours hautement infectieuses. Leur observation 
après 76 jours d’exposition des feuilles de H. esculentus à la dessiccation. 
EXPLICATION DE LA PLANCHE 
Fig. A. - Symptômes dystémiques provoqués par l’inoculation mécanique du VMG sur le Gombo variété 
Clemson spineless : a. Feuille saine ; b. Feuille primaire montrant la Mosaïque ; c. Feuille primaire 
montrant le symptôme d’éclaircissement des nervures ; d. Feuille secondaire montrant la formation 
des bandes vert clair le long des nervures ; e. Feuille secondaire montrant le {(vein banding n ; 
f. Feuille tertiaire montrant le <( vein banding N réduit à une seule nervure. 
Fig. B. - Aspect en microscopie électronique de quelques particules de VMG purifié : virions et capsides. 
” 
PLANCHE I.
_ _  
Mme LOUISE GIVORD. 
- - - -- - - 
Fig. A 
Fig. B 
C .  R. Acad. Sc. Paris,.,t. 275 (2 octobre 1972) Série D - 1565 
en microscopie électronique (Jig. B) a révélé des particules isométriques de deux 
sortes : des particules pleines et des particules apparemment vides. Leur diamètre 
est de 28’5 k 2,5 nm. On peut en déduire que l’agent pathogène est un virus. 
L’analyse des suspensions purifiées par ultracentrifugation en gradient de 
saccharose (10-50 %) a permis d’obtenir deux pics dont les caractéristiques ont été 
examinées au spectrophotomètre. C’est ainsi que le composant léger a son maximum 
d’absorption à 278 nm et le lourd 8.261 nm. Le rapport absorption à 260 nm/absorp- 
tion à 280 nm a une valeur de 1,61. Le composant lourd est donc une nucléopro- 
téine (virus) et le composant léger est protéinique (capside). 
L’ultracentrifugation analytique a révélé, elle aussi, deux composants dont 
les coefficients de sédimentation sont : 106 S et 42 S. La comparaison de l’action 
de la ribonucléase et de la désoxyribonucléase sur l’acide nucléique du virus ainsi 
que les tests de Mejbaum et de Dish ont montré que le virus contenait de l’acide 
ribonucléique à un brin. 
La composition en bases du RNA, rapportée dans une publication en cours 
‘de rédaction (Bouley et Givord), est la suivante : U : 25,5 % : C 39,8 % : G 17,2 % : 
A 17’5 I%. Enfin des expériences préliminaires d’électrophorèse sur gel de polya- 
crylamide ont montré que le poids moléculaire de la sous-unité protéique était 
de 20 000. 
Les propriétés de ce virus, en particulier la teneur importante du RNA en cyto- 
sine (40 %), la température élevée d‘inactivation (SO OC) et la présence d’un compo- 
sant léger, le font ressembler au virus de la Mosaïque Jaune du Navet (VMJN). 
Cette parenté a été confirmée par l’étude immunologique ; en faisant réagir le virus 
de la Mosaïque du Gombo contre un sérum anti-VMJN dont le titre homologue 
est de 1/8 0008, celui-ci a réagi jusqu’à une dilution de 1/32. 
CONCLUSION. - De nombreuses maladies à virus ont été décrites chez’les Mal- 
vacées. L‘agent causal de la plupart de ces maladies n’a pas été isolé. Toutes ces mal-a- 
dies sont distinctes de la Mosaïque du Gombo par une ou plusieurs propriétés 
(symptômes, transmission, propriétés de l’extrait brut, morphologie du virus éven- 
tuellement). 
Les propriétés du virus qui viennent d‘être décrites démontrent que celui-ci est 
entièrement nouveau et fait partie du groupe. du virus de la Mosaïque Jaune du 
Navet décrit par Gibbs (’). 
Des expériences permettant d’établir les relations sérologiques entre le virus 
de la Mosaïque du Gombo et les autres membres du groupe de VMJN sont actuelle- 
ment en cours. Nous proposons de donner à l’agent responsable de cette maladie 
l’appellation suivante : virus de la Mosaïque du Gombo dont l’abréviation serait 
VMG. 
- 
(*) Séance du 3 juillet 1972. 
(1) K. G. SWENSON, dans : Metlzods in Virology, K. Maramorosch et H. Koprowsky, Academic Press. 
New York et Londres, 1, 1967, p. 286. 
i 
1566 - Série D C. R. Acad. Sc. Paris, t. 275 (2 octobre 1972) 
(2) S .  P. CAPOOR et P. M. VARMA, Indian J. agric. sc., 20, 1950, p. 217. 
( 3 )  W. B. RAYMER et T. O. DIENER, Virology, 37, 1968, p. 343. 
(4) J. E. MELLENA, E. F. J. VAN BRUGGEN et M. GRUBER, J. Mol. Biol., 31, 1968, p. 75. 
(5) M. H. V. VAN REGENMORTEL, Adv. Virus Res., 12, 1966, p. 207. 
(6) 6. OUCJXTERLONY, Prog-Allergy, 5, 1958, p. 1 .  
(7 )  A. GIBBS, Adv. Virus Res., 14,1969, p. 263. 
' 
Laboratoire de Virologie,. 
Centre ORSTOM AdiopodoumP, 
B. P. no 20, AbiGan, Côte-d'Ivoire ; 
Laboratoire des Virus des Plantes, 
8 , .  rue Gczthe, 67-Strasbourg, Bas-Rhin. 
(* 
I 


Un nouveau virus du groupe de la mosaïque jaune du navet : le virus de la mosaïque du gombo (Hibiscus esculentus L. Malvacée)

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