Baudin, Pierre

Horizon / Pleins textes

Comptes rendus des séances de la Société de Biologie, 
Extrait du Tome 165, no 5, 1971, p. 1205. 
Printed in France. 
Influence du pH sur le virus de la mosaïque de la canne h sucre, 
La souche virale qui provoque un$e mosaïque sur canne L sucre et 
maïs, sur les? hauts plateaux de Madagascar, a de nombreux caractères 
communs avec les souches de virus de la Mosaïque de la canne à sucre 
(V.M.C.S.), souches A (1) et II (2), et avec le Maize Dwarf Mosaic Virus 
(M.D.M.V.) (3). Le virus est une longue particule de 7 500 Å (4). La 
constante de sédimentation en tampon borate 0;Oi M pH = S , G ,  est de 
151 S, proche des valeurs trouvées par  Bancroft (i), i58 S, pour 
V.M.C.S.-A et Sehgal (31, 148 f 2 S, pour le M.D.M.V. Les méthodes 
de purification utilisées pour le V.M.C.S.-A (1)’ V.M.C.S.-H (2) et 
M.D.M.V. (3) ne permettent pas d’obtenir des préparations convellables 
avec la souche malgache. L’étude du comportement de la souche virale 
des hauts plateaux malgaches en fonction du pH a permis, d’une part, 
de déterminer le pH iso-électrique de la protéine virale et, d’autre 
part, de mettre en évidence quelques particularités de cette souche 
par  rapport aux observations faites sur V.M.C.S.-A, V.M.C.S.-H et 
M.D.M.V. 
de l’Institut Pasteur de Madagascar. 
Snazelle, Phytopathology, 1966, t. 56, p. 371. 
(*) Avec la collaboration technique de  E. Rajaonarivelo et l’aide materielle 
(1) J. B. Bancroft, A. J. Ullstrup, Mimi Messieha, C. E. B. Braclrer et T. E. 
(2) T. P. Pirone et L. Anzalone, Phytopathology, 1966, t. 56, p. 371. 
(3) O. P. Sehgal, Phy fopa fh .  Z., 1968, t. 62, p. 232. 
&fatériel e t  Méthodes. - Les suspensions virales sont préparées par  
broyage des premières feuilles déroulées de canne à sucre, variété 
Lousier, en présence de tampon Tris-EDTA 0'05 M, pll = 7, additionné 
de mercaptoéthanol à 0,l  %. L'extrait est clarifié au chloroforme dans 
la proportion de 1 vol. pour 4 vol. Puis, il est centrifugé 3 h à 
40 O00 x g. Les culots sont repris dans du tampon Tris-EDTA 0,005 M. 
Le virus est alors exclu d'une colonne d'Agarose BIO-RAD 15 M par  
du tampon Tris-EDTA 0,005 M, pH = 7. Les suspensions virales sont 
centrifugées 50 mn à 105 O00 x g et les culots sont repris. soit dans 
du tampon Tris-EDTA 0,005 RI, pH = 7, soit dans du tampon phos- 
phate 0,Ol M, pH = 7,2, soit dans du tampon borateq'01 M, pH = 8'6, 
ou dans l'eau distillée. Les détails de la méthode de purification ont 
été donnés par ailleurs (4). 
4 
1,5 bo t 
I . f  
I I 
I 
' "'i 
I P H  
5 7.5 10 
Fig. 1. - Influence du pH sur le virus de la mosaïque de la canne B sucre. 
Le virus est dosé par spectrophotométrie. Le coefficient d'extinction 
à 260 nm a été déterminé par  pesée d'une suspension virale de 22,4 mg 
après séchage poids constant sur une balance Mettler au 1/10 de mg 
près. Le coefficient d'extinction est de 1 pour 0,42 e 0'02 mg/ml, 1 cm. 
Les propriétés infectieuses des suspensions virales sont évaluées par 
inoculation à des maïs, population locale, âgés de 8 jours, par frotte- 
ment de deux feuilles déroulées, prbalablement saupoudrées de carbo- 
rundtum. On observe une rélaction systémique sur leis fevales du cceur 
au bout de 8 à 10 jours. 
L'action du pH a été étudiée par une technique voisine de celles 
utilisées par Oster (5), Tremaine (6) ou Wurtz (7). Une suspension de 
- 
, - _ - -  
(6) J. H. Trkmaine, VirÖZogy, 19' 
(7) M. Wurtz, Thèse Fac. des Sc., Strasbourg, 19t 
. 
_ I  
/ 
virus dans l’eau distillée, de à 10 mg dans 5 ml, donne un pH compris 
entre 6’5 et 7’2, selon les expériences. Les divers pH sont obtenus par 
addition de gouttes à la pipette Pasteur de HCl ou de NaOH 0,Ol N. Ils 
sont lus au 1/10 près, au pH mètre Tacussel avec une électrode double 
concentrique pouvant plonger dans un tube. L’agrégation du virus est 
appréciée par turbidimétrie à la longueur d’onde 460 nm au spectro- 
photomètre Jobin Yvon Stand M V. 
Résultats. - Le virus s’agrège vers les pH acides. On observe une 
précipitation à l’œil au pH 5,5, puis la suspension s’épaissit. La D.O. 
augmente jusqu’au pH 4 3 ,  puis diminue (fig. 1). Le point isoélectrique 
du V.M.C.S. se trouve donc autour de 4,5. 
I I t 1 nm 
246 260 28 o 310 
Fig. 2. - Spectre du V.M.C.S. après précipitation acide. 
Tampon borate pH = 8,G. 
Vers les pH basiques, la D.O. se maintient jusqu’au pH IO, puis 
diminue légèrement. 
Au pH 4’5, point isoélectrique, le virus peut être sédimenté en tube 
conique par centrifugation à hasse vitesse (IO mn à G O00 i< g). Le 
culot est redissous dans du tampon borate 0,Ol M, pH = S,G.  Le spectre 
de la suspension obtenue est caractéristique du virus (fig. 2). Le 
rapport 2 G O / Z S O  est de 1’23 ; il correspond aux meilleures préparations 
de virus obtenues. La suspension virale avant préparation acide avait 
un rapport de IJG. Le surnageant présente un spectre de nucl‘ ceopro- 
téinle da rapport 1’12, et doit corrlespondre à du virus dégradé. 
. .  
\ Le pouvoir infectieux est conservé. Des extraits virosés dans le 
tampon borate 0,Oi M, pH = S , G ,  sont encore infectieux a une dilution 
de 0,25 x 10-3 mg/ml. Cette limite de dilution est du même ordre que 
celle de préparations virales en suspension dans un tampon phosphate 
0’05 M, pH = 7,2 (tableau). 
QuanW de virus Phosphate @,O1 M Borate @,O1 M pH 8,6 
pH 1,2 , après$ppr6cipitation acide I -  
1 x 10-1 mg 
1 x 10-9 mg 
1 x 10-3 mg 
0,5 x lo3 mg 
1 x 10-4 mg 
18/18 
16/19 
8/20 
8 120 
0120 
(*> Nombre de maïs contaminés sur le nombre de maïs inoculés. 
1 
Pouvoir infectieux du V.M.C.S. en fonction de la dilution 
dans deux tampons à pH = 7,2 et pH = 8,6. 
La précipitation acide d’une suspension virale dans l’eau distillée 
peut permettre une reconcentration du virus au cours d’une purifi- 
cation. Une suspension de 19,s mg de virus dans le tampon Tris-EDTA 
0,005 IK, pH = 7 a été dialysée contre de l’eau distillée. Le pH a été 
ajusté à 4,5. Le virus a été sédimenté par centrifugation de 5 mn à 
S O00 x g en tube conique. Le culot est repris dans le tampon borate 
0,Oi M, pH = 8,G. Par spectrophotométrie, on peut doser i2,o mg de 
virus. Ce rendement (0,6) est comparable à celui d’une ultracentrifu- 
gation de 50 mn à 105 O00 x g (30 mg/50). 
Conclusions. - PeÚ d‘observations ont été faites sur l’influence du 
pH sur le V.M.C.S.-A, V.M.C.S.-H et M.D.M.V. Pirone et Anzalone (2) 
ont purifié le V.M.C.S.-M après clarification de l’extrait virosé par 
acidification à pH = 4’7, mais en milieu salin (SO,Na,, 0,Oi M). Ce 
procédé de clarification a donné les meilleurs rksultats au point de vue 
infectieux par rapport à d’autres avec V.M.C.S.-H. Par contre, cette 
technique n’a pas permis de purification convenable de Ia souche des 
hauts plateaux malgaches, ce qui peut s’expliquer par le fait que la 
clarification se fait au pH isoélectrique et doit entraîner au minimum 
une forte agrégation du virus. 
Jean et Sehgal (8) montrent que le M.D.M.V.-A présente un maximum 
de pouvoir infectieux à pH = 7. Ce pouvoir infectieux diminue rapide- 
ment de part et d’autre de !la neutralité et, notammlent, est nul à pH = S,5 
dans du tampon borate 0’05 M. La chute du pouvoir infectieux vers 
les pH acides peut s’expliquer facilement par une agrégation du virus. 
Par contre, la diminution diz pouvoir infectieux vers les pH basiques 
n’a pas été confirmée à Madagascar, De nombreux facteurs peuvent 
jouer sur ce pouvoir infectieux : molarite des tampons; présence de 
(8) J. H. Jean et O .  P. Sehgal, Phytopathology, 1969, t. 59, p. 1507. . 
\ 
certains sels, mais également origine des souches virales. Une étude 
comparative des comportements des différentes souches du V.M.C.S. et 
de M.D.M.V. en fonction du pH paraît intéressante pour les distinguer. 
(Ecole Nationale Supérieure Agronomique 
de l’Université de Madagascar). 


Influence du pH sur le virus de la mosaïque de la canne à sucre

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