Brès, P.

Digoutte, J.P.

Gagnard, V.J.M.

Pajot, François-Xavier

Perreau (collab.)

Horizon / Pleins textes

InipriniP avec le pPriodique Bul le f in  de la SocidfE de Pufhologie ezofiytie. 
Extrait du tonle 65,  nu 6 ,  Novembre-DCcembre 1972 (pages 751 B 758j. 
INFECTION A VIRUS NYANDO CHEZ L’HOMME 
Par J.-P. DIGOUTTE, V.-J.-M. CAGNARD, P. BRES et F.-X. PAJOT (*) 
(avec la collaboratiori teclmique de IIme PERREAU) 
Le virus Nyando était isolb pour la premiere fois au Kenya en 
1959 par WILLIAMS WOODALL et CORBET ( I )  à partir d’un lot d ’ h o -  
plzeles fuiaestus Giles, 1900 capturés dans un  village situé dans la 
vallée de la rivikre Nyando. De nombreux sérums humains pré- 
levés dans la même région possédaient des anticorps neutrali- 
sant e t  certains fixaient le coniplément en présence de l’antigène 
préparé à partir de cette souche prouvant ainsi une infection 
récente. Ceci mettait en évidence la diffusion du  virus mais n’indi 
quait pas qu’il puisse jouer un rOle en pathologie humaine. 
En rnai 1969 le virus Nyando était isolé à l’Institut Pasteur de 
Bangui à partir illi seruni d’une malade présentant un  état  fébrile 
avec courbatures. L’année précédente, à la rrième tpoque, il avait pu  
être isolé à partir du mèine vecteur qu’au Kenya : Anopheles funestus. 
Ces Moustiques avaient été captures dans la banlieue proche de 
Bangui. 
ORIGINE DE LA SOUCHE 
Obsertwtion clinique. 
Mine D. hl. Qgée de 42 ans s r i t  i Bangui depuis de nombreuses années 
et demeure sur les bords du fleuve Oubangui. Elle est sédentaire et ne 
sort jarnais en dehors de la ville. Au mois d‘avril 1969 elle a présenté un 
premier épisode fkbrile d‘origine indkterininbe et aucun virus n’a ét& isolé 
du sérum prGlevt5 d’ailleurs assez tardivement au 7 e  jour de la maladie. 
l h e  D. prtsente un deuxième épisode fCbrile durant 24 heures le 8 niai. 
Le 30 mai 1969 dans la suirte elle est prise d‘un brusque accès fébrile 
k 400 C avec vomissements et courbatures. Un hhogramme pratiqué . 
752 B U L L E T I N  D E  LA SOCIl?Tg DE PATHOLOGIE EXOTIQUE 
inimCdiatrment met en évidence une leucopénie à 4.000 leucocytes et 
de nomlireus schizontes de Plnsmodiicm frrlciprrrzim. Elle reçoit alors 
trois cnniprimés de chlorydrat e d’aniodiaquine. Le lendemain matin 
la température est descendue à $30 C, mais remonte à 400 C le soir mbme et 
se maintient ensuite pendant quatre jours entre j 8 o C  et  40oC malgr6 
un traitement au chloramphénicol injectable à la dose de I g. 50 par jour. 
La température redcvient normale au 6’3 jour de l’évolution. I1 est à noter 
que la malade nEglige habituellement toute prophylaxie antipalustre. 
Le 31 mai un certain nombre d‘examens sont mis en route : hémoculture 
dosage des transaminases SGOT-SGPT, tests hépatiques, nouvelle recher- 
che d’htimatozoaires : tous devaient se rCvhlei3 négatifs. En même temps 
du sang e t  des selles sont confiés à l’Institut Pasteur pour recherche de 
virus. 
L’examen clinique pratiqué le  er juin ne montre ni éruption, ni cEpha- 
lées. La malade se plaint simplement de vomissements, sans diarrhée 
concomitante. 
Le syndrome clinique s’est en sonime résumt! à une fikvre osi*illant 
entre $30 C le matin et 400 C le soir pendant quatre ~OLIPS  accompagnée 
de vomissements et & un accès palustre concomitant le premier jour. 
L’échantillon de sérum tardif a été prhlevé le 9 décembre 1969 soit six 
mois après cet 6pisode. 
~ ~ A T É R I E L  ET XÉTIIODES 
Sérrcnzs du nialade. 
Le sérum précoce a été prélevé le 31 mai 1969, dès le lendenlain du 
début de l’affection, il a été centrifugé clans u n  appareil non r6fYigéré 
e t  inoculé imniédintement. Le reste du sérum a été fractioiind en 
deus  parties, l’une étant conservée h - 650, et l’autre placke dans un  
congélateur à - 250 C. 
Le sérum tardif a été prélevé le 9 décembre 1969 e t  coiiservé dans 
un congélateur à - 250. 
Technique d‘isolement. 
Le sérum pur a été inoculé le jour du prélèvement à deux portées 
de souriceaus nouveau-nés et dilué à 1/10 à une portée, par  voie 
mixte, intracérébrale (O nil. 02) e t  intrapéritonéale (O ml. OZ) .  
Les passages suivants ont été inoculk par  voie intracérébrale 
seulement, les cerveaux étant broyés dans une quantité de Hanks 
albuminé à 0,4 O/O donnant environ une solution à 1/10. 
Aléthndes d’identification. 
Seule la sensibilité a u  chloroforme a été recherch6e. La suspension 
virale du 5e passage diluée à I/IOO est répartie après centrifugation 
en deux tubes. Dans un des tubes avec une seringue de O ml. 25 est 
ajouté O ml. 05 de chloroforme ; par aspiration e t  refoulement le 
BULLETIN DE L.4 SOCIBTB DE PATHOLOGIE EXOTIQUE’ 753 
mélange est éiiiulsionné pendant IO niinutes. AprBs centrifugation 
de courte durée des dilutions de raison dis  sont réalisées avec le sur- 
nageant du tube traité e t  du tube non tsaité. Les deux gammes de 
dilution sont ensuite inoculées. 
Les identifications ont été nienées soit avec des séruins hyper- 
immuns de souris adultes récoltés après inoculation intraperitoneale 
de suspension de cerveaux de souriceaux infectés soit avec des liquides 
d’ascites obtenus avec la souche de Leucome T 180. 
Les rkactions d’inhibition d’hémagglutination ont été mises en 
Oeuvre en plaque OMS selon la niéthode de CLARKE et  CASALS (-) 9 avec 
des an t ighes  préparés en saccharose acétone. La nii.me technique 
de préparation a été utilisée pour les antigènes servant dans les réac- 
tions de fixation du coniplbment suivant la techniquc dite 
L. B. C. F. (3) adaptée par SEVER à la microtechnique sur plaque (4). 
Pour les identifications les techniques de séroneutralisation 
furent exécutées en mettant en présence pendant I lieure au bain- 
marie à 370 le sérum à étudier e t  le virus en dilution successive de 
raison dix. 
Les sérums précoces et  tardifs de la malade ont été étudiés selon 
la technique de CAUSEY ( s ) ,  utilisant O ml. I de virus en dilution pro- 
gressive, O nil. I de sérum inactivé & tester e t  O ml. 3 de sérum frais 
de cobaye maintenus pendant I heure au  bain-marie à 370 avant de 
les inoculer aux  souriceaux par voie intracérébrale. 
Dans les deus  méthodes l’index de neutralisation est donné par la 
difyérence entre le titre du  virus obtenu en présence du sérum à tester 
e t  le titre obtenu en présence d’un sérum témoin qui peut ètre soit un  
sérum nornial de soui*is soit le sérum précoce ayant, permis l’isolement 
de la souche chez la malade. 
Historique des passages. 
La souche a été isolée h partir d’un passage ii l’aveugle effectué 
sur deux souriceaus prélevés au 6e jour de l’observation. Tous les 
autres souriceaux ont sue&u au 15e jour sur les trois portées, mais 
on doit relever qu’un souriceau a été noté malade au 14e jour mais 
était rétabli le lendemain. Au premier passage l’incubation a été de 
7 tt I I  jours, trois souriceaux survivant au  15e jour. Au deuxième 
passage l’incubation s’est réduite à 6 à 9 jours, mais tous les souri- 
ceaux étaient morts au  IO^ jour. Le temps moyen de survie a passé 
de 4 à 5 jours au troisieme passage, & 4 jours au  quatrieme et s’est 
stabilisé à 3 jours à partir du cinquiknie. 
154 BULLETIN D E  LA SOCIÉTB D E  PATfIOLOGIE EXOTIQUE 
Au dernier passage u n  titrage est réalisé sur souriceaux nouveau-nés 
e t  sur souris sevrées âgées de 21 jours. Le titre est de 10-6.s sur les 
premiers, alors qne la souche est irrégulièrement pathogène par voie 
intracérébrale pour les sevrées de 21 jours. 
Tenté sur le sérum conservé à - 650 le réisolement a échoué. La 
souche a reçu le numéro d’identification HB 69-761. 
Propriéth physiques et chimiques. 
E n  présence de chloroforme le titre du virus est inférieur à  IO^ 
Le virus filtre sur une membrane niillipore O p 32,  le titre après 
La lyophilisation pratiquée en séruni de cobaye inactivé n’a pas 
alors que le t h e  de la suspension t h o i n  atteint 106+. 
filtration est de  IO-^ alors qu’il est de  IO-^#* avant. 
modifié le titre. 
Propriéth imnirriiologiques. 
Les essais pour obtenir un  antigène héinagglutinant les globules 
rouges d’oie se sont révélés infructueux. Par contre le même anti- 
gène fixe le complément & la dilution de 1/32 en présence d’un sérum 
homologue pr4paré sur souris adulte. 
Tdenti ficution. 
En inhibition d’héniagglutination le séruni homologue préparé à 
partir de la souche H B  69-761 ne dorine aucun résultat SUP les anti- 
gènes de références de l’Institut Pasteur de Bangui possédant une 
hémagglutinine. 
La souche HB 69-761 cosnparée par l’un d’entre nous (P. B.) aux 
immunsQums de référence du  Centre Régional O. hl. S. (Institut 
Pasteur de Dakar) a donné les résultats suivants : en réaction de 
fixation du coinplément le criblage a été effectué il Ia dilution de I/S 
et a donné des résultats positifs avec deux immunsCrums Nyando 
et Y 176 (Eretmapodites 124) (6). 
Les résultats des réactions croisées sont donnés dans le tableau I. 
La souche a &té alors comparée en réaction de séroneutralisation 
croisée avec les mêmes iniinuns6riinis e t  virus. Les résultats sont 
donnés dans le tableau II. 
Les résultats de ces deus  types de réactions montrent que la souche 
HB 69-761 est proche sinon identique à Nyando. 
BULLETIN DE L A  SOCIdTl? DE PATHOLOGIE EXOTIQUE 755 
TABLEAU I
Fixation du complbment e n  réaction croisb.  
Souche H B  69-761 
avec les antigènes e t  les immunsérums du groupe Nyando. 
Antigenes 
Eret 124 
HB 69-761 Nyando 
32/32 ( # i )  16/32 
8/61 8/32 
64/64 64/32 
16/32 16/32 
8/32 8/32 
[*) SI, 2 ,  3.. . AI, A2, A3 sérums ou ascites obtenlis sur souris après I, 2, 3 injections. 
( f )  Inverse du titre sérunilinverse du titre antigtne. 
TABLEAU I I  
SBP.oneiitralisatio~i croisCe. 
Souche HB 69-761 
avec les virus et les immunskrums du  groupe Nyando. 
II Virus 
Il I 
HB 69-761 Nyando P 176 Eret 124 
. . . .  SBrum normal 4 ,  J 471 795 4,s 
BB 69-761 > 2,b > 321 2 , O  024 
Nyando > 2,s > 3 , r  099 
Y176 017 191 6,o 
. . . . .  . . . . . .  . . . . . .  . . . . .  Eret 124. O13 I,2 313 I 
Résultats siyologiques diez  la malade. 
Les anticorps fixant le complément u11 neutralisant. ont été recher- 
chés dans le scirum précoce et dans le sirum tardif. Les deus  anti- 
gènes utilis6s sont d’une part le virus homologue BH 69-761 et le 
virus Nyando isolé l’année précbclente d’un lot d ’ h o p h e l e s  fiiiiestus 
En rQaction de fixation du  complément selon la technique en échi- 
(Ar 13 839). 
756 BULLETIN DE LA SOCIÉTB DE PATHOLOGIE E-SOTIQUE 
quier les deux sérums en dilution de raison deux de 1/8 à 1/256 avec 
les antig8nes dilués de 1/2 à 1/64 donnent des réactions négatives. 
Dans u n  deuxième temps les deux sérums ont été dilués de 1/4 
à r/r28 e t  coniparés de nouveau aux mêmes antigknes. Le sdruni 
précoce est négatif alors que le sérum tardif fixe le complément à la 
dilution de 1/4 en présence de HB 69-761, mais est négatif en pré- 
sence de l’autre souche Nyando (Ar B 839). 
E n  réaction de sérnneutralisation le titre du virus I-IB 69-761 est 
de 10”~ en présence du sérum précoce alors qu’il est de  IO^ en pré- 
sence du sérum tardif. L’index de neutralisation est donc de 3,s. Le 
titre du virus en présence de séruin normal de souris est de 1 0 ~ 1 ~ .  
COMATENTAIRE 
Apr&s le premier isolenient (le Nyandn les enquGtes sérologiques 
montraient que de nombreux d r u m s  liuinains prélevés dans la même 
région possédaient des ailticorps neutralisants montrant ainsi la 
diffusion de cette nouvelle souche. 
L’isolement d u  virus h partir du sérum d’une malade ayant pré- 
senté un épisode fébrile met en évidenoe son rale en pathologie 
humaine. 
La réalité de l’intervention de cet arbovirus ne paraît faire aucun 
doute. Si cette souche se trouvait déjà dans la gamme d’antighes 
de référence de l’Institut Pasteur de Bangui e t  si elle n’a pas dt6 
réisolée, la présence d’anticorps fixant le complément e t  neutralisant 
dans le sérum tardif et leur absence dans le sérum précoce permettent 
d’affirmer l’authenticité de l’isolement. 
Le syndrome clinique de cette affection se résume dans ce cas à un 
état  fébrile ayant duré quatre jours accompagné de vomissementh. 
La présence d’hématozoaires le premier jour de I’évolution de la 
maladie s’explique par le fait que cette malade neglige hahituellement 
toute prophylaxie antipalustrc. 
Les circonstances de l’isolement de Nyando en mettent bien en 
évidence les difficultés. La souche a éte isolée à partir d’un passage 
à l’aveugle effectué au 6e jour de l’observation des souriceaux, alors 
que tous les autres survivaient au 14e jour. Ce virus s’est adapté 
ensuite assez difficilement. 
Les résnltatc; des tests immunologiques montrent la complexité 
du  diagnostic sérologique de ce type d’arbovirose. I1 est vrai que le 
sérum tardif a été prélevk plus de six mois après la phase aiguë de la 
maladie ce qui peut expliquer le titre très faible des anticorps fixant 
l e  complément. Pour ces niveaux très bas, de faibles variations intra- 
typiques peuvent entraîner une réaction négative en fixation du 
BULLETIN D E  L A  SOCIBTL? DE PATHOLOGIE EXOTIQUE 751 
complément avec la souche de référence ; d’où l’intérêt de choisir 
comme antigkne de référence polir le diagnostic sérologique de ce 
type d’affection une souche possédant un  excellent pouvoir anti- 
génique e t  de prélever le sérum tardif autant que possible trois 
semaines k un mois après la fin de la maladie. 
En réalité cet isolement confirme ce qui avait déjà été observé 
pour l’isolement de Tataguine dans les fièvres exanthématiques (7) : 
dans de nombreux cas seul l’index neutralisant du  sérum tardif per- 
met d’affirmer l’étiologie d’un syndrome clinique si la souche n’a 
pu Ctre isolée du  sérum précoce. 
CON CLU s ION 
Le virus Nyando isolé au  Kenya en 1959 par W r L L r a a i s  WOODALL 
d’un lot d’í-lizopheles frinestus a été retrouvé en République Centra- 
fricaine d’abord chez la m&me espèce d’.Arthropode, puis chez une 
malade présentant un syndrome féhrile ayant duré quatre jours e t  
accompagné de vomissenients. 
La souche a été difficile ?i isoler e t  l’étude imniunologique des 
sérums précoces et tardif’s montre la complexité du diagnostic séro- 
logique de ce type d’affection. 
RÉ su31 É 
Le virus Nyanclo a été isolé du sérum d’une nialade sédentaire 
habitant à Bangui et présentant un syndrome fébrile sans exanthème 
ayant persist6 quatre jours. Le sérum a été inoculé par voie mixte 
intracérPbrale e t  intrapkitonéale k trois portées de souriceaux hgés 
de moins de 24 heures. 
Les souriceaux de l’isolemeiit u n t  été récoltés h l’aveugle car aucun 
d’entre eux ne présentait de sigries pathologiques e t  tous les autres 
surviwient à la fin de la phriode d’olmrvation. 
L’adaptation a été difficile et il a été nécessaire d’attendre le cin- 
quième passage pour voir le temps moyen de survie se stabiliser B 
trois jours. 
L’identification t i e  la souche a été curiduite par la rkaction de fixa- 
tion du compl6nient confirmée par la rPaction de séroneutralisation. 
La présence d’anticorps dans le s6runi tardif coi i fhie  la réalit& 
de l’isolement niais les techniques sérologiques utilisées mettent en 
kviclence les difficultés du diagnostic iminunologique de ce type 
d’affection. 
758 BULLETIN DE L A  SOCIl?T& DE PATHOLOGIE EXOTIQUE 
The Nyando virus has been isolated from a sedentary patient’s 
seruni, living in Bangui and presenting a fehrile syndroni without 
exanthemas, for four days. The serum has been inoculated by both 
intracerebral and intraperitoneal mixed way t o  three litters of 
suckling mice, less than 24 hours old. 
The suckling niice of the isolation have heen harvested blindly, 
because none of them was presenting patliological signs and all the 
others were alive at thc end of the ohservation time. 
The adaptation lias been difficult and it was necessary to wait for 
the fifth passage t n  see the average survival time fixing at three 
days. 
The identification of the strain has been led hy the coniplement 
fisation test confirmed by the reaction of seroneutralisation. 
The presence of antibodies in tlie convalescent, seruin confirms 
the reality of tlie isolation but the serological technics used proove 
the difficulties of the immunologival diagnostic, in this kind of 
affection. 
BIBLIOGRAPHIE 
WILLIAXS (RI. c.), WOODALL (-1. P.) e t  COISBET (P. s.). - Nynndo I’irus 
a hitherto undesarihed virus isolated from (( A4~tophlrs  fitriestus )) 
Giles collected in Kenya. Arch.  ,pes. Virzrsforsch., 1965,15, 422-427. 
CLARKE (J.), CASALS (D.  H.). - Technique for hemagglutitiation and 
heinagglutinaiioii inhibition with arthropod born viruses. Anter. 
J .  trop. i l l d .  H!/g., 1958, 7. 561-573. 
Diagnostic Procedures for T’ira1 and iivlictsial diseascs. Amerivan Public 
Hcalth Association New York, 1964, 3rd Edit. 
SEVCI~ ÍJ.). - Application of niicrot echnique to viral serologicd inves- 
tigation. liniiiitnotogg, 1962, 88, 320. 
The isolation of arthropod horn viruses including members 
of two hitherto uiidescribed serological g r o u p  in the Ainazon 
Region of Brazil. Amer. J .  trop. Men ’ .  Hyg., 1961, 10, 2 ~ 7 - 2 4 ~ ~ .  
ARDOIN (P. L. hl.) et Siwsox (U.  I. H.1. - Relation.: antig6niqucs entre 
le virus Nyando et deux viru:, isolls en Ethiopie à partir de 
collectes d’Erctmapodites. Bidl. Soc. Path. erof., 1965, 58, (4), 
CAUSEY (o. R.), CAUSEY (c. E.), b ~ . L R o . I A  (o. hI.1 et  ACEDO DO (D. G.Ì. - 
573-589. 
DIGOUTTE (J. P.), B R E s  (P.), NGUYEN TRUNG LUONG (P.) et DURAED (B.) .  - 
Isolement du virus Tataguine i partir de deus cas de fièvres 
exanth0matiques. Bitll. Soc. Path. ?.cot., 1969, 62, ( I ) ,  71-80. 


Infection à virus Nyando chez l'homme

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