Billard, Guy

Merny, Georges

Pelletier, Robert

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O R S T O M  
SERVICES SCIENTIFIQUES CENTRAUX 
70-74 route d'Aulnay 93140 BONDY 
Mise au point d'une méthode d'éradication d'Aphelenchoides besseyi 
( Nematoda: Aphelenchoidea 1 dans les graines de Panicum maximum 
I ., . -. 
Georges MERNY, Guy BILLARD et Robert PELLETIER 
Y 
A la fin de l’année 1982, des lots de graines sélectionnées de 
Panicum maximum, provenant de Côt d’Ivoire et envoyées au Brésil par 1’ORSTOM- 
Bondy où elles étaient conservées, étaient retenues par les Services d‘interception 
du CENARGEN,à Brasilia, principalement parce qu’on y avait décelé la présence d’un 
nématode appartenant au genre Aphelenchoides, réputé pour comprendre certaines 
espèces très dangereuses pour les cultures. 
M .  Savidan, généticien de l’ORSTOM, responsable du programme Panicum au 
Brésil., ne parvenait pas à se débarasser des parcrsites par les méthodes classiques 
(trempagedans l’eau chaude ou dans une solution de formol additionnhe de mouillant 
ou mise en présence de vapeurs d’oxyde de propylène) .Obligé de débarasser les 
graines des nématodes une à une en les décortiquant avec des pinces fines sous la 
loupe binoculaire et en les lavant dans une solution diluée d’hypochlorite de 
soude, il faisait appel aux nématologistes de 1‘ORSTOM pour mettre au point une 
méthode de lutte plus rapide et pouvant être appliquée en grand. 
Dès les premiers jours de janvier 1983, des exemplaires du parasite étaient 
envoyés au Dr D.J. Hooper (Rothamsted Experimental Station, Harpenden, Herts., 
Angleterre) spécialiste du genre Aphelenchoides, qui les identifiait comme apparte- 
nant à l’espèce A. besseyi Christie, 1942, connue pour causer la maladie du “ white 
tip “ du riz qui occasionne de sérieuses pertes de rendement dans plusieurs parties 
du monde, notamment en Amérique du Nord et en Extrème-Orient. Le Dr Hooper attirait 
également notre attention sur le fait que cette espèce avait déjà été observée en as- 
sociation avec la même plante, en Australie,sur P.maximum var.trichoglume (Anon, 1974) 
ainsi que sur des plantes voisines: au Japon, Yoshii et Yamamoto (1950) l’observent 
sur P. sanguinale et Ino (1071) sur P. crus-galli var. frumentaceum et P. bisulcatum. 
La présence d’A. besseyi au Brésil est connue depuis 1963, date à laquelle 
Monteiro le signale sur feuilles de fraisier et c’est en 1969 que Lordello l’y 
trouve, associé au riz. En 1974, le même auteur note qu’il a atteint l“ Etatde 
Sao Paulo. Tanaka, Deslandes et Machado (1976)  le signalent dans 1‘ Ftatde Minas 
Gerais et Zem et Monteiro (1977)  dans celui de Bahia. La mgme année, Huang, Cupertino 
et Martinelli notent sa prgsence dans le Centre-Ouest. En 1978, Miura et Huang 
l’observent, associé au riz, dans l’.Etat de Santa Catarina et c’est dans ce même 
Etat qu’en 1981 Lordello et Monteiro le retrouvent associé à l‘ail auquel il ne 
semble d‘ailleurs pas causer de dégats. 
Dans ces conditions, il pourrait sembler superflu de se donner du mol 
pour empécher l‘entrée d’un parasite dans un pays où il existe déjà. En réalité, 
chez de nombreux parasites, sinon chez tous, il existe des races physiologiques, 
appelées pathotypes, dont la virulence à l’égard de certains hôtes varie grandement 
de l’une à l‘autre- Cette vi.rulence peut egalement varier beaucoup suivant les 
r, 3 
conditions du milieu et tel pathotype, médiocrement dangereux dans une certaine 
contrée, pourra le devenir terriblement dans une autre où les conditions s o n t  plus 
propices à l'expression de ses potentialités pathogéniques. Dans ce cas, comme dans 
tous les autres, le passage d'un parasite d'un continent à l'autre doit donc être . 
évité dans toute la mesure du possible. 
MATERIEL ET METHODES 
Dans la'graine de Panicum, le nématode est en état d'anhydrobiose entre les 
glumes et les glumelles. Dans cet état, il  est difficile à atteindre: il est 
relativement moins sensible 6 la chaleur qu'un nématode actif et, les glumes et les 
glumelles se révélant très hydrophobes, il est difficile à mouiller . même si la 
graine est plongée dans l'eau, il demeure dans un film-d'air qui le protège. Ceci 
I '  
explique les échecs des premiers essais de destruction du parasite par la chaleur 
et d'extraction du parasite par la méthode classique du trempage des graines : 
les nématodes, non-mouillés, ne pouvaient être ni tués ni extraits. La première 
opération consistera donc à mouiller le nématode. Celui-ci reviendra à l'état de vie 
active au cours d'un pré-trempage de plusieurs heures après quoi il sera possible 
d'appliquer le traitement par la chaleur. 
MOU I ¡LAGE 
Les graines sont agitées, pendant deux minutes, dans un erlenmeyer contenant 
environ 100 ml d'eau additionnée de quelques gouttes d'un savon liquide ( tee-pol 
par exemple). 
Elles sont ensuite rincées et placées dans la même quantité d'eau, à l'inté- 
rieur d'une fiole à vide reliée à une trompe à eau. Au bout d'une minute environ, 
des bulles d'air se sont formées sur les graines, elles sont retenues par les pilo- 
sités des téguments. Les graines, ainsi allegées, remontent à la surface. Quand elles 
sont toutes remontées, on ouvre brusquement la fiole à vide et elles retombent dans le 
fond. On refait alors le vide etc .... L'opération est répktée cinq ou six fois, ce 
qui dure entre cinq et dix minutes. L'eau a, alors, pénétré dans tous les interstices 
entre les glumes et les glumelles et atteint tous les nématodes qui s ' y  trouvent. Le 
mélange de graines et d'eau est alors transféré dans un autre récipient, erlenmeyer 
ou becher, où va s'opérer le pré-trempage. 
P RETREMPAGE 
I1 a pour but de réhumidifier le nématode et de l'amener à l'état de vie 
active. Dans le traitement du riz contre ce même parasite, le temps de prétrempage 
est de seize heures. C'est celui qui a été adopté pour tous les essais. 
4 
TRAI TEMENT 
Les graines sont placées dans un récipient cylindrique en verre de 
25 rrnn de diamètre et 35 mm de hauteur, ouvert aux deux extrémités. A chaque 
extrémité, le bord est recourbé en collerette vers l'extérieur et le tube est 
fermé par un tissu léger maintenu en place par un élastique. Les tubes sont 
alors immergés dans un bain thermostaté au 1/10 de degré près à l'aide d'un 
dispositif chau-rfant éléctrique muni d'une hélice qui brasse l'eau et assure 
l'homogénéité themique du bain. Les temps de séjours des graines dans ce bain 
ont varié entre cinq et quanrante minutes. 
I _L 
Le traitement sous vide des graines en ordre dispersé. est difficile; 
beaucoup se collent aux parois de la fiole à vide et on ne peut $tre assuré 
que le traitement a Qté bien appliqué. Pour le dernier essai, les graines ont été, 
dès avant le début des opérations, placées dans le récipient cylindrique fermé 
aux deux bouts par un tissu léger. C'est à l'intérieur de ce récipient que leur 
ont été appliqué le mouillage, le prétrempage et le traitement par la chaleur. 
Elles sont ainsi restées groupées et les traitements ont été homog8nes. 
OBSERVA T I ONS 
Elles étaient effectuées sur des lots de 100 graines. 
SURVI E DES NEMATODES 
Aussitôt après le traitement, les graines sont plac6ss, sous une fine couche 
d'eau, sur un tamis à mailles de 250 ,um placé dans une boîte de Pétri. Au bout 
de trois ou quatre jours, les nématodes présents dans l'eau sont recueillis 
dans un tube à essai. On les laisse sédimenter dans le fond du tube; l'eau sur- 
nageante est aspirée à l'aide d'un tube relié à une trompe à vide et le volume 4 
total de l'eau ramené à un peu moins de 5 ml. C'est dans ce culot, transféré 
dans une lame à compter.à fond quadrillé, que sont dénombrés les nématodes à 
l'aide d'une loupe binoculaire. I1 faut noter qu'Aphelenchoides besseyi n'est 
pas la seule espèce receuillie de cette façon. On trouvefréquemmenten mélange 
des nématodes non-phytoparasites et l'observateur doit être attentif pour ne 
pas commettre d'erreur. 
GERMINABILITE DES GRAINES 
Les graines sont mises à sécher en étuve à 35" pendant 24 h puis sur 
papier filtre à la température ambiante pendant une semaine. Elles sont alors 
placées sur papier filtre humide;.en boîte de Pétri et mises à l'étuve à 30". 
5 
On observe le pourcentage de graines ayant germé au bout de quatre jours. 
I DETERMINATION DU TEMPS DE TRAITEMENT ' .  
. - .  1 . -  
On a adopté, provisoirement, l'une des températures auxquelles sont faits 
couramment 'les traitements appliqués au riz : 51". Les tenps essayés ont été de 
5, 10, 20 et 40 minutes. L'essai était effectué avec des graines provenant du lot 
no K 238, pour lequel, des essais préliminaires avaient montre que chaque graine 
contenait, en moyenne, deux Aphelenchoides environ. 
e. 
SURVIE DES NEMATODES 
Jusqu'à 20 mn, la survie des nématodes diminue rapidement quand le temps 
de traitement augmente (Fig.lA), la courbe affectant la forme d'un S inversé. 
Entre 20mn et 40mn il n'y a pratiquement pas de différence dans la survie des 
nématodes. En fait, la faible proportion des parasites qui survit aux deux temps de 
traitement est composée des individus qui résisteront à 51" quel que soit le temps 
de traitement. I1 n'y a donc pas lieu d'augmenter celui-ci au-delà de 20 minutes. 
C'est le temps qui a été retenu pour les essais ultérieurs. 
. _-- 
GERMINABILITE DES GRAINES 
I1 est assez surprenant de constater que loin de diminuer comme on s'y 
attendait, la germinabilité des graines augmente,entre 5 et 20 minutes, avec 
le temps pendant lequel elles sont maintenues à 51". Entre 20 et 40 mn, la ger- 
minabilité n'augmente pas mais se maintient. I1 est probable qu'il existe un 
temps à partir duquel la faculté germinative diminuerait mais il n'a pas été 
atteint dans cette expérience et le rechercher ne présente pas d' intérêt. 
DETERMINATION DE LA TGMPERATURE DE TRAITEMENT 
Dans l'expérience précédente, un traitement presque satisfaisant était 
obtenu en maintenantles graines 20 mn à 51", deux nématodes seulement ayant 
survécu dads cent graines qui, au départ, en contenaient environ 200. Ce résultat 
est cependant insuffisant si, dans un but de protection phyto-sanitaire, 'on doit 
procéder à une véritable éradication. On a donc, en maintenant les mêmes temps 
de prétrempage et de traitement, augmenté la température. Les températures de 
51, 52, 53 et 55" ont été essayées. 
cn 
g 200 
4 > 
> - a 
3 
cn 150 
100 
50, 
80 
7c 
6C 
A 
6 
o 5 1-0 20 4ö 
MINUTES 
B 
o 5 10 2-0 4b 
MINUTES 
Fig.1.  R é s u l t a t s  du t r a i t e m e n t  de 100 g r a i n e s  de Panicum maximum 
à 51" pendant 5, 10, 20 e t  40 minutes - A :  Nombre de n h a t o d e s  
s u r v i v a n t s  - B :  Pouvo i r  g e r m i n a t i f  des g r a i n e s .  
7 
Tableau 1 
Survie des nématodes en fonction de lâ température 
. 
T E M P  E R A  T U  R E  
Témoins 51" 52" 53" 55" 
51 1 O O O 
134 
228 
28 1 
O O O 
1 O - 25 
o - 1  . 5  
O 
O 
O. 
153 1 O ' O  1 
Somme 352 
Moyenne. . 170 
1 
o, 2 
6 
O -\ - 
O 
t émo ins  - - - - - - - - - - - -  
TEM PER AT U RE 
Fig. 2. Pouvoir germinatif des graines de P.maximum 
traitées à différentes temp4ratures. 
8 
SURVIE DES NEMATODES ' 
Le détail des résultats obtenus est donné au tableau 1. L'infestation, 
chez les témoins, était un peu inférieure b celle de l'essai précédent (170 
contre 202 pour 100 graines) et le traitement b 51" plus efficace (0'3% de sur- 
vivants contre 1%).  Dans deux des cinq lots traités à 53", une proportion 
anormalement élevée de nématodes ont survécu. I1 est probable qu'il s'agit de 
défectuosités dans l'application du traitement. Les résultats obtenus b cette 
température ne seront pas pris en considération. Les résdtats obtenus b 52" 
et 55" représentent une amélioration par rapport iì ceux du traitement b 51" 
puisque seul un nématode sur 1OOOa survécu. 
GERMINABILITE DES GRAINES 
Les résultats sont donnés b la figure 2. L'effet stimul.ant du traitement 
b 51" est confirmé; il subsiste b 52". Au-dessus de cette température, il 
diminue et, à 55" la faculté germinative des graines devient légèrement inférieu- 
- re b celle des témoins. 
CONCLUSION 
Un traitement des graines b 55" pendant 20 mn suivant un mouillage 
soigneux et un prétrempage de 16 h assure la destruction de la presque totalité 
des A. besseyi présents dans la graine de P. maximum. I1 ne s'agit cependant 
pas d'une éradication totale puisqu'un parasite sur 1 O00 a survécu. La faculté 
germinative des graines ayant subi ce traitement est, b peu de chose' près, égale 
l à celle des graines témoins. Une augmentation de la température de traitement 
~ 
risquerait cependant de la diminuer fortement. Cette méthode de traitement a 
été mise 6 l'épreuve dans un premier traitement opérationnel d'un lot de 52 
numéros expédié sur Dakar en mai 1983. 
~ 
TRAITEMENT D'UN PREMIER LOT DE 52 NUMÉROS 
Des modifications ont été apportées dans les techniques de traitement 
et d'observation : les graines, dès avant le mouillage, étaient enfermées dans 
le: récipient cylindrique fermé aux deux extrémités par un tissu fin; à la fin 
du traitement, toutes les graines étaient séchées b l'étuve à 35" pendant 
24 h et maintenues sêches pendant un mois. A ce moment, avant l'expédition, 100 I .. - - 
I graines étaient prélevées dans chaque numéro; elles étaient alors b nouveau 
I '  
I mouillées par la méthode habituelie et mises sur tamis pour en extraire les 
. .  . 
9 
Tableau 2 
I 
R é s u l t a t s  du t r a i t e m e n t  d e  52 l o t s  de  g r a i n e s  d e  Panicum maximum. 
Nombre d e  nématodes s u r v i v a n t s .  
N o  Témo i n  T r a i  t é  
T3 
T6 
T 7  
T9 
T11 
T 1 3  
T17 
T18 
T2 1 
T23 
T24 
T25 
T27 
T29 
T45 
T46 
T56 
T57 
T6 1 
T6 2 
T64 
T65 
T67 
T6 9 
T7 1 
T72 
1 1  
280 
260 
6 40 
36 
315 
455 
56 
5* 
27 
O 
O 
O 
O 
26 
20 5 
6 
33 
7 
43 
2 
O 
3 
O 
29 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
* o  
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
No Témo i n  T r a i t é  
T74 
T 80 
T83 
T84 
T88 
T89 
T9 2 
T97' 
T98 
T104 
T106 
T103 
T109 
T110 
T115 
T116 
K17 
K25 
K3 1 
K48 
K5 1 
K54 
K55 
K62 
K7 1 
KK15 
42 
64 
5* 
4 
2 
1 
O 
285 
420 
O 
O 
78 
O 
29 
44G 
71 
3 
67 
21 5 
109 
1 
8 
24 
5 
O 
1 
O 
22* * 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
o 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
O 
* = i n e r t e s  * *  = m o r t s  
10 
nématodes éventuellement survivants. 
Les résultats sont donnés au tableau 2. I1 faut d'abord remarquer que 
l'infestation, dans les témoins, est très inégale d'un numéro à l'autre. Aucun 
nématode n'a été trouvé dans douze numéros, par contre plus de deux parasites par 
graine ont été trouvés dans dix numéros, l'infestation culminant dans le no T9 ave 
une moyenne de 6 ' 4  parasites par graine. 
Le traitement a fourni une éradication pratiquement totale, les quelques 
I parasites extraits d'un numéro n'ayant pas survécu après leur sortie des 
graines. Ce traitement s'est donc montré plus efficace qu'à l'essai précédent, 
au cours duquel un parasite pour mille avait suvécu.Cette amélioration est 
probablement due au fait qu'à la différence de l'essai précédent les graines 
sur lesquelles la survie des nématodes était observée n'étaient pas mises 
immédiatement dans l'eau sur tamis mais subissaient un dessêchement d'un mois 
avant d'être remouillées et placées sur tamis. Ainsi, les rares nématodes qui 
avaient résisté au traitement, et dont on peut penser qu'ils en étaient quand 
même plus ou moins affectés, devaient, quelques heures après leur ré-hydrata- 
tion, subir une nouvelle mise en anhydrobiose et une nouvelle reviviscence un 
mois apr&s. I1 n'est pas étonnant qu'aucun n'ait pu résister à.parei1 traitement - -  
CONCLUS IONS 
I " )  Pour être atteint par un traitement, A besseyi subsistant en 
anhydrobiose entre les glumes et les glumelles des graines de P. maximum 
doit préalablement être ré-humidifié en lavant la graine avec un savon liquide 
et en faisant p6nétrer l'eau entre les organes végétaux par des alternatives 
de vide et de.retour à la pression normale. 
2" )  Avant d'être sensible au traitement, le nématode doit être 
préalablement ramené à l'état de vie active par un pré-trempage de 16 h. 
3")  Un traitement,efficace par la chaleur peut être obtenu en appli- 
quant, pendant 20 mn, une température comprise entre 5 2  et 55". Pour obtenir 
une éradication pratiquement totale en gardant une bonne marge de sécurité, 
la température de 55" est préférable. 
4") Jusqu'à 53", le traitement n'affecte pas le pouvoir germinatif des 
graines mais, au contraire, semble le stimuler. A 55", le pouvoir germinatif 
est pratiquement le même que chez les témoins. 
5") I1 est probable que les nématodes ayant échapp6 au traitement 
par la chaleur sont tués par un retour brutal à l'onhydrobiose peu de temps 
après leur reviviscence. 
.. . . ... - _.  . . . . ._ . - . 
1 1  
6') -es parcelles d e  m u l t i p l i c a t i o n  d 4diopodoumé devant  s e r v i r  à l a  
product ion  d e  g r a i n e s  d e s t i n é e s  à ê t r e  envoyées dans l e  monde en t i e r ,  il s e r a i t  
bon d ' e n v i s a g e r  de  t r a i t e r  systématiquement les  g r a i n e s  q u i  y s o n t  semées. 
.- 
Les a u t e u r s  remerc ien t  B.  SOUCHAUD pour son a i d e  dans l e s  comptages. .- - 
.- - __-- - -.---. 
RÉFÉRENCES 
ANNUAL REPORT 1973-74, QUEENSLAND DEPARTMENT OF PRIMARY INDUSTRIES ( 1 9 7 4 ) .  B r i s b a n e  
64 p.  
HUANG, C.S., CUPERTINO, F.P. 6 MARTINELLI, N . M .  ( 1 9 7 7 ) .  Inc idence  of w h i t e - t i p  
nematode, Aphelenchoides b e s s e y i ,  i n  s t o r e d  r i c e  see¿ from Central-West 
B r a z i l .  Pest  a r t .  News  Summ., 23:  65-67. 
INO, M .  ( 1 9 7 1 ) .  On t h e  water  d i s s e m i n a t i o n  o f  Aphelenchoides b e s s e y i .  I I I .  Nematode 
i n f e s t a t i o n  o f w e e d s  and d i s e a s e  occurence i n  a h e a v i l y  i n f e s t e d  a r e a .  P r o c .  
Kanto-Tosan P I .  Prot .Soc. ,  N"8; 123. 
LORDELLO, L .G.E .  ( 1 9 6 9 ) . ' 0 c o r r ê n c i a  do nematoide Aphe lencho ides  b e s s e y i  e m  a r r o z  no 
B r a z i l .  Revta Agric .  São P a u l o , . 4 4 :  129-131. 
LORDELLO, L . G . E .  ( 1 9 7 4 ) .  A " ponta  branca " do a r r o z  a t i n g e  São Paulo.  Revta Agr ic .  
P i r a c i c a b a ,  49: 184. 
LORDELLO, L . G . E . 8  MONTEIRO, A . R .  ( 1 9 8 1 ) .  Nematoide a t a c a  o a l h o  e m  S a n t a  C a t a r i n a .  
Revta 'Agr ic .  P i r a c i c a b a ,  56: 22. 
MIURA, L. 8. HUANG, C.S. ( 1978) .  Nematoide d e  ' I  ponta branca " do a r r o z  : ocorr'e'ncio 
e d i s t r i b u ç a o  e m  S a n t a  C a t a r i n a ,  B r a z i l .  EMPASC-EMBRAPA, U n i v .  B r a s i l i a ,  IV + 
8 P. 
MONTEIRO, A . R .  ( 1 9 6 3 ) .  Nematoides e m  i o l h o  d e  morangueiro ( nota  p r e v i a ) .  Rvta Agric  
Soo Paulo ,  38: 196. 
TANAKA, M . A .  d e  S., DESLANDES, J . A .  8 MACHADO, J .  da C.  ( 1 9 7 6 ) .  Ocorrência  do 
ponta branca do a r r o z  en  Minas G e r a i s .  F i t o p o t o l .  B r a s i l . ,  2: 173-¡74. 
12 
-YOgII, H. &.YAMAMOTO, S. ( 1 9 5 0 ) .  A rice nematode disease, " Senchû shingare ByÔ. 
I I  Hibernation o f  Aphelenchoides oryzae. J .  Fac, Agric. Kyushu Univ., 
223-233. 
' ZEM, A.C. 2 MONTEIRO, A.R. (1977) .  Bahia : o nematoide da " ponta branca 
também ocorre em sementes de arroz. Rvta Agric. Piracicaba, 52: 81-82 
9 :  
I l  


Mise au point d'une méthode d'éradication d'Aphelenchoides besseyi (Nematoda : Aphelenchoidea) dans les graines de Panicum maximum

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