L'Etude comparative des antigènes de surface de 10 souches boliviennes de référence de la sous-espèce L. B. Braziliensis a permis de mettre en évidence une grande homogénéité au sein de ce groupe. Les souches éprouvées possèdent des profils antigéniques où domine un antigène de 72kD. (Résumé d'auteur

Brenière, Simone Frédérique

Desjeux, P.

Le Pont, François

Legrand, Dominique

Prina, Eric

Horizon / Pleins textes

+ &1 
' I  
1. 
I 
l 
I 
l 
l 
I 
I 
l 
l '  
' i  
l 
i 
C. R. Acad. Sc. Paris, t. 303, Série III, no 14, 1986 607 
IMMUNOLOGIE. - Résultats préliminaires en faveur de l'existence d'un antigène 
majeur de surface, spécifique de Leishmania braziliensis braziliensis. Note de Dominique 
Legrand, Philippe Desjeux, Eric Prina, François Le Pont et Simone Frédérique Brénière; 
présentée par Jean-François Bach. 
L'étude comparative des antigènes de surface de 10 souches boliviennes clonées et d'une souche brésilienne 
de référence de la sous-espèce L. b. braziliensis a permis de mettre en évidence une grande homogénéité au 
sein de ce groupe. Les souches éprouvées possèdent des profils antigéniques comparables oli domine un antigène 
de 72 kD. 
A l'opposé, la comparaison des antigènes de surface de L. b. braziliensis avec L. b. guyanensis, L. b. 
panamensis, L .  mexicana amazonensis et L. donovani chagasi montre une hétérogénéité importante entre les 
sous-espèces et espèces de Leishmania étudiées. L'antigène de 72 kD n'est mis en évidence qu'i la surface de 
L. b. braziliensis. 
IMMUNOLOGY. - Preliminary results in favour of the existence of a major surface antigen specific of 
Leishmania braziliensis braziliensis. 
The comparative surface antigen study of 10 bolivian strains and 1 brazilian reference strain from L. b. 
braziliensis sub-species shows an important homogeneity within this group. All the strains tested so far present 
similar antigenic patterns with a major antigen at 72 kD. 
On  the contrary, the comparative analysis of surface antigens of L. b. braziliensis with those of L. b. guyanensis, 
L. b. panamensis, L. mexicana amazonensis and L. donovani chagasi shows a large antixenic heterogeneity 
between the Leishmania sub-species and species we studied. The 72 kl) antigen was only detected on L. b. 
braziliensis surface. 
INTRODUCTION. - Le complexe L. braziliensis est responsable, avec le complexe L. 
mexicana, des leishmanioses cutanées et cutanéo-muqueuses humaines du Nouveau- 
Monde. Au sein du complexe L. braziliensis, trois sous-espèces ont été individualisées : 
L. b. panamensis, L. b. guyanensis et L. b. braziliensis, sur la base de critères biochimiques 
(isoenzymes, k-DNA, anticorps monoclonaux ([1]-[3]). 
La caractérisation des antigènes de surface de L. tropica, L. major, L .  mexicana et L .  
donovani a donné lieu à de nombreux travaux ([4]-[10]), Plusieurs auteurs décrivent un 
antigène majeur de 63 ou 65 kD commun à ces différentes espèces de Leishmania ([SI-[lo]). 
En revanche, peu de travaux concernent L. braziliensis ([SI, [IO], [I I]) et plus particulière- 
ment 1;. b. braziliensis : seuls les travaux de Colomer-Gould et coll. [lo] montrent 
l'existence d'un antigène majeur de 65 kD commun A L. b. braziliensis, L. major, L. 
mexicana, L. b. guyanensis et L. donovani. 
Étant donné l'importance des leishmanioses cutanée et cutanéo-muqueuse en Bolivie, 
nous nous sommes attachés à la comparaison des antigènes de surface de 10 souches 
autochtones avec les souches de Leishmania de différentes espèces et sous-espèces. 
MATÉRIEL ET MÉTHODES. - 1) Parasites. - Nous avons utilisé les formes promastigotes de culture (milieu 
LIT complémenté à 15% (v/v) en sérum de veau foetal) de : 
- 10 souches de L. b. braziliensis (isolées au laboratoire et typifiées en isoenzymes [12]) provenant de 
différentes régions de Bolivie (Yungas, Alto-Béni et Béni). 
- 1 souche brésilienne de L.  b. braziliensis référencée MHOM/BR/75/M-2904 [12]. 
- 1 souche de L. b. guyanensis typifiée en isoenzymes et éprouvée par l'anticorps monoclonal B19 de D. 
- 1 souche de L.  b. panamensis (CHO/PA/75/M-4039) typifiée en isoenzymes et testée par l'anticorps 
- 1 souche de L. mexicana amazonensis référencée IFLA/BR/67/PH-8 [12]. 
- 1 souche de L.  donovani chagasì référencée MHOM/BR/OO/M-2682 [12]. 
Toutes ces souches ont été clonées par micromanipulation. Chaque clone isolé s'est révélé identique à la 
-_ McMahon-Pratt [3] spécifique de L.  b. guyanensis. 
monoclonal B11 [3J sptcifique de L. b. panamensis. 
souche mère dont il était issu (isoenzymes et antigènes de surface). 
0249-6313/86/03030607 $2.00 0 Académie des Sciences 
C'. K., 1986, 2' Semesirc. (T. 303) Série III - 48 
608 C. R. Acad. Sc. Paris, t. 303, Série III, no 14, 1986 
2. Marquage des protéines de surface. - Les parasites, récoltés en début de phase stationnaire de culture, 
ont été marqués à 1'[1251] par la méthode de I'Iodo-Gen [13] en présence d'aprotinine (100 U.ml-'), et les 
protéines de surface marquées ont été comparées par électrophorèse en gel de polyacrylamide réticulé à 7% 
(SDS-PAGE), après réduction par le dithiothréitol à 50 mM [lo]. 
3. I~nmuizopréccipitation des protéines de surface. - L'immunoprécipitation d'extraits de promastigotes 
marqués en surface à 1'['251] [14] est suivie d'une adsorption des immuns-complexes sur Protéine A-Sepharose 
CLdB (Pharmacia, Uppsala, Suède) en présence d'aprotinine (100 U .  m1-l) puis d'une analyse électrophoréti- 
que en SDS-PAGE à 7% des immuns-complexes dissociés. Nous avons utilisé pour les immunoprecipitations : 
- 4 sérums de patients boliviens atteints de leishmaniose cutanée; 
- 4 de patients boliviens atteints de leishmaniose cutanéo-muqueuse; 
- 4 de patients africains atteints de leishmaniose viscérale; 
- 2 de patients boliviens atteints de la maladie de Chagas, 
- et 2 sérums de patients sains. 
Tous ces patients étaient cliniquement confirmés. 
RÉSULTATS. - 1. Étude des protéines de surface. - L'analyse en SDS-PAGE à 7 %  
des différentes souches de L. b. braziliensis révèle des profils peptidiques très semblables 
( f ig .  1). En effet, les 10 souches boliviennes et la souche de référence du Brésil présentent 
au minimum 10 bandes Clectrophorétiques (de 25 à 300 kD) plus ou moins intenses selon 
la souche; seule une légère variabilité est enregistrée pour les poids moléculaires supérieurs 
à 100 kD. Deux protéines majeures de 58 et 72 kD sont présentes dans l'ensemble des 
souches de L. b. bmzilieizsis. 
A l'inverse, la comparaison des profils des souches de L. b. braziliensis avec ceux des 
souches de L. b. guyanensis, L. b. panamensis, L. m. amazonensis et L. d. chagasi met en 
évidence l'absence de bandes majeures communes. Les souches de L. b. guyanensis, L. b. 
panamensis, L. m. amazonensis et L. d. chagasi possèdent des protéines majeures de 
surface de respectivement : 66 kD ; 64 et 56 kD ; 65 kD ; 66 à 60 kD et 50 kD. 
EXPLICATIONS DE LA PLANCHE 
Fig. 1. - Autoradiographie de I'électrophorèse en gel de polyacrylamide à 7% (SDS-PAGE) des promastigotes 
de Leishrnania marqués en surface à 1'[1251] : souches boliviennes de L. b. braziliensis (1 à IO), souche 
brésilienne de référence de L. b. braziliensis (l l) ,  souche de L, b. guyanensis (12), souche de L. mexicana 
amazonensis (13), souche de L. b. panamensis (14) et souche de L. donouani chagasi (15). Les flèches (-+) 
indiquent les protéines majeures de surface de 72 kD (a)  et 58 kD ( b )  de L. b. braziliensis. 
Fig. 1 - Autoradiogram of 7% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of surface radioiodinated Leishmania 
proniastigotesr boliuian strains of L. b. braziliensis (1 to lo), brazilian reference strain of L. b. braziliensis 
(ll), strain of L. b. guyanensis (12), strain of L. mexicana amazonensis (13), L. b. panamensis (14) and 
strain of L. donovani chagasi (15). Arrows (+) show the 72 kD (a) and 58 kD (b) surface major proteins of 
L. b. braziliensis. 
. 
Fig. 2. - Autoradiographie en SDS-PAGE à 7% des antigènes de surface de : L. b. braziliensis (M-2904) ( 1 )  
immuno-précipités par un sérum de patient bolivien atteint de leishmaniose cutanéo-muqueuse et L. b. 
braziliensis (M-2904) (2) et L. d. chagasi (M-2682) (3) immuno-précipités par un sérum de patient africain 
atteint de leishmaniose viscérale. 
Fig. 2. - Autoradiogram of 7'%, SDS-PAGE of surface antigens 08 L. b. braziliensis (M-2904)(1) precipitated 
with a serum of a boliuian patient with nitrcocutaneous leishmaniasis and L. b. braziliensis (M-2904) (2) and L. 
d. chagasi (M-2682) (3) precipitated with a serum of an african patient with uiseeral leishmaniasis. 
Fig. 3. - Autoradiographie en SDS-PAGE à 12% des protéines de surface marquées à 1'['251] de:  L. b. 
braziliensis (M-2904) (1) et L. m. amazonensis (PH-8) (2). 
Fig. 3 .  - Autoradiogram of 12% SDS-PAGE of iodinated surface proteins 08 L. b. braziliensis (11.1-2904)(1) 
and L. m. amazonensis (PIf-8) (2). 
. 1 2  3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5  PM 
P. 
J 
PM 
1 2 3 . PM 
2 . .rc origine 
origine Xwr",. .c- , 
94000 
67000 
c- 
*--
94000 c 
6 7000 - 
94000 c- 
43000 -* -c 67000 .c -- 
"e%% 
30000 - 4 3 O00 c-
43000 c. 
30000 
3t- 
Fig. 2 Fig. 3 
Fig. 1 
t %. 
8 
i 
I 
C. R. Acad. Sc. Paris, t. 303, SCrie III, no 14, 1986 61 1 
2. Étude des antigènes de surface. - Les 8 sérums de patients leishmaniens immuno- 
précipitent toutes les protéines de surface des promastigotes de L. b. braziliensis déjà 
visualisées, sauf la protéine majeure de 58 kD et les protéines de faible poids moléculaire; 
la protéine de surface de 72 kD est très fortement reconnue ( f ig .  2). Les protéines 
majeures des autres espèces et sous-espèces de Leishmania étudiées ne sont pas reconnues 
par ces sérums. 
Par ailleurs, les 4 sérums de patients atteints de leishmaniose viscérale reconnaissent 
très fortement toutes les protéines de surface de la souche de référence L. dortovani 
chagasi, mais aucun des antigènes de surface des souches de L. b. braziliensis(fig. 2). 
Enfin, les sérums contrôles de patients sains et de patients chagasiques ne reconnaissent 
aucun des antigènes de surface des souches de L. b. braziliensis. 
CONCLUSION. - La comparaison des 10 souches boliviennes de L. b. braziliensis entre 
elles et avec la souche de référence du Brésil met en évidence une identité remarquable 
des profils protéiques et antigéniques de surface. La sous-espèce L. b. braziliensis semble 
donc présenter une homogénéité antigénique importante, ce qui corrobore les résultats 
obtenus par les analyses isoenzymatiques [12]. Par contre les sous-espèces de L. b. 
braziliensis, L. b. guyanensis et L.  b. pailantensis présentent des profils peptidiques très 
différents. Il serait intéressant d‘élargir cette étude à des souches d’origines plus diverses. 
Nous avons constaté une différence de masse moléculaire entre l’antigène majeur de 
L. b. braziliensis (72 kD) et les antigènes majeurs des autres souches Ctudiées, voisins de 
65 kD, ainsi qu’ils ont été décrits ([SI-[lo]). L’utilisation de gels peu réticulés (7%) est 
beaucoup plus discriminative que celle de gels à 10 ou 12% (généralement utilisés) pour 
différencier deux protéines de masses moléculaires voisines de 70 kD. En effet, lors de 
l’analyse en SDS-PAGE à 12% ( f ig .  3), les vitesses de migration des protéines de 72 et 
58 kD (L .  b. brazilieiisis) et de 65 kD ( L .  m. ainazonensis) sont confondues. 
Nos résultats préliminaires ne confirment pas les travaux de Colomer-Gould et coll. [lo] 
qui ont décrit un antigène majeur commun à diverses espèces et sous-espèces du genre 
Leishrnania (L.  b. braziliensis, L. b. guyanensis, L. inexicana et L. donovani). 
L‘antigène majeur de 72 kD que nous décrivons ici semble spécifique de la sous-espèce 
L. b. braziliensis car, d’une part, les sérums de patients africains atteints de leishmaniose 
viscérale ne reconnaissent pas cet antigène et, d’autre part, les sérums de patients atteints 
de leishmaniose cutanée et cutanéo-muqueuse ne reconnaissent aucun des antigènes 
majeurs de L. b. guyanensis, L. b. panamensis, L. m. amazonensis et L. d. chagasì. 
L‘étude de la spécificité de l’antigène de 72 kD devra être poursuivie en utilisant un 
plus grand nombre de sérums et des anticorps monoclonaux, cet antigène pourra être un 
bon candidat pour un test diagnostique des leishmanioses cutanées et cutanéo-muqueuses 
du Nouveav. Monde. 
Cette étude a pu être réalisée grâce à des subventions du Ministère des Relations extérieures (Service de la 
Coopération et du Développement), du Ministère de la Recherche et de l’Industrie (PVD/84/L-0689), de 
I’0.M.S. (Grant ID-850313) et de la Commission des Communautés Européennes (TSD-M-04ZBOL). 
Reçue le 30juin 1986, acceptée le 15 septembre 1986. 
RÉFÉRENCES RIRLIOGRAPHIQUES 
[l] M. A. MILES, R .  LAINSON, J. J. SHAW, M. POVOA et A. A. DE SOUZA, Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 
[2] R. S .  PACHECO, U. G. LOPES, C.  M. MOREL, G. Jr. GRIMALDI et H. MOMEN, Ann. Parasit. Hum. Comp. 
15, 1981, p. 524-529. 
(sous presse). 
, 612 C. R. Acad. Sc. Paris, t. 303, Série III, no 14, 1986 
[3] D. MCMAHON-PRATT, E. BENNETT et J. R. DAVID, J. Immunol., 129, 1982, p. 926-927. 
[4] E. HANDMAN et J. M. CURTISS, Exp. Parasitol., 54, 1982, p. 243-247. 
[5] P. R. GARDINER et D. M. DWYER, Mol. Biochem. Parasitol., 8, 1983, p. 283-295. 
[6] D. A. LEPAY, N. NOGUEIRA et Z. COHN, J.  Exp. Med., 157, 1983, p. 1562-1572. 
171 J. L. LEMESRE, F. S. RIZVI, D. AFCHAIN, M. SADIGURSKY, A. CAPRON et F. SANTORO, Infect. Immun., 
[8] P. R. GARDINER, C. L. JAFFE et D. M. DWYER, Infect. Immun., 43, 1984, p. 637-643. 
191 R. J. ETGES, J. BOUVIER, R. HOFFMAN et C. BORDIER, Mol. Biochem. Parasitol., 14, 1985, p. 141-149. 
[ll] J. A. MISLE, M. E. MARQUEZ et A. G. HERNANDEZ, . Parasitenkd., 71, 1985, p. 419-428. 
[I21 P. DESJEUX, F. LE PONT, S. MOLLINEDO et M. TIBAYRENC, Ann. Parasit. Hum. Comp. (sous presse). 
1131 The Leishmaniases, Report of a WHO Expert Committee, World Health Organization, Geneva, 1984. 
[14] P. J. FRAKER et J. C. SPECK, Biochem. Biophys. Res. Commun., 80, 1978, p. 849-857. 
[I51 C .  DISSOUS, C. DISSOUS et A. CAPRON, Mol. Biochem. Parasitol., 3, 1981, p. 215-225. 
50, 1985, p. 136-141. 
[lo] V. COLOMER-GOULD, . G. QUINTAO, J. KEITHLY et N. NOGUEIRA, J. Exp. Med., 162, 1985, p. 902-916. 
D. L. : Laboratoire de Chimie biologique et Unité associée au C.N.R.S. no 217, 
Université des Sciences et Tecliniques de Lille Flandres-Artois, 
59655 Villeneuve-d’Ascq Cedex, 
I.B.B.A., C/o Ambassade de France, Casilla 824, La Paz, Bolivia: 
P. D. : Institut Pasteur de Paris, 
I.B.B.A., C/o  Ambassade de France, Casilla 824, La Paz, Bolivia; 
F. L. P., S. F. B. : O.R.S.T.O.M., I.B.B.A., Casilla 8714, La Paz, Bolivia; 
E. P. ; I.B.B.A., C/o Ambassade de France, Casilla 824, La Paz, Bolivia. 
! 


Résultats préliminaires en faveur de l'existence d'un antigène majeur de surface, spécifique de LEISHMANIA BRAZILIENSIS BRAZILIENSIS

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Horizon / Pleins textes