Barneo Serra, L.

García Pravia, C.

Martínez Esteban, M.

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CARTAS AL DIRECTOR 
TRASPLANTE DE ISLOTES DE PANCREAS 
EN HICADO POR VIA PORTAL 
Desde que MOSKALEWSKI aisló islotes 
de Langerhans de cobaya, previa digestión 
del páncreas con colagenasa, hace ya 20 
años (Gen. Comp. Endocrinology 85, 218, 
1965), se vienen desarrollando intensas in- 
vestigaciones en este campo con dos finali- 
dades: el estudio «in vitron de las propieda- 
des fisiológicas de las células insulares y la 
posible aplicación práctica del trasplante 
de islotes como solución definitiva de la 
diabetes mellitus. 
Esta última finalidad es la que nos h e  
mos propuesto como línea directriz de 
nuestros trabajos experimentales, en los que 
se trata inicialmente de conseguir la remi- 
sión de la diabetes provocada en ratas por 
inyección de estreptozotocina, practicando 
a estos animales un trasplante de tejido in- 
sular. Paralelamente, el estudio de estos ani- 
males diabéticos con trasplante insular y su 
comparación con el de ratas diabéticas sin 
trasplante, brindan un excelente modelo ex- 
perimental para investigar la fisiopatogenia 
de las alteraciones y lesiones secundarias 
sistémicas de la diabetes. 
En la década de los años veinte, con el 
descubrimiento y la extracción de la insuli- 
na y su consiguiente aplicación clínica, m e  
joraron notablemente la super\livencia y la 
calidad de vida del diabético. Con ello, per- 
dieron interés transitoriamente los primeros 
experimentos de trasplante de páncreas, 
realizados ya entonces por algunos investi- 
gadores. 
Sin embargo, a lo largo de los años poste 
riores, se observó que la terapia insulínica, 
si bien prevenía la muerte por cetoacidosis, 
controlaba los síntomas y alargaba la espe 
ranza de vida del diabético, no curaba la 
enfermedad al no permitir un control per- 
fecto de la homeostasis de los hidratos de 
carbono. Al fallar ésta, aparecen y se desa- 
rrollan en el transcurso de los años lesiones 
secundarias sistémicas. res~onsabies de la 
severa morbilidad y mortal;dad que presen- 
ta aún actualmente la diabetes mellitus. 
Que el trasplante pancreático, ya sea de ór- 
gano completo, con anastomosis vascula- 
res, ya sea de tejido insular purificado, pue- 
de servir para lograr dicha homeostasis lo 
prueban algunos estudios clínicos y nume 
rosos experimentos en animales. 
La mayoría de los procedimientos actua- 
les de aislamiento de islotes de Langerhans 
se basan en el método descrito por LACY y 
KOSTIANOVSKY (Diabetes 76, 35,1967). En 
nuestras investigaciones utilizamos este m& 
todo con algunas modificaciones y además, 
en distintos experimentos, el de PAYNE 
(Ann. Surg. 189, 248, 1979) de obtención de 
tejido insular de ratas tratadas previamente 
con DL-Etionina, método muy útil por su 
sencillez y que la estancia de uno de nose 
tros en el Departamento de Cirugía de la 
Universidad de Minnesota, primer centro 
mundial de trasplante de páncreas, nos ha 
permitido reproducir. 
Para que los métodos utilizados y los r e  
sultados obtenidos en estas investigaciones 
sean reproducibles, es necesario tener en 
cuenta una serie de detalles. En primer lu- 
gar, hay que definir el estado de hiperglice 
mia experimental de las ratas que han de 
recibir el trasplante de los islotes. Si como 
fármaco diabetógeno se utiliza la estrepte 
zotocina, es necesario valorar la cepa, el 
sexo y la edad-peso del animal, pues varia- 
ciones de estos parámetros condicionarán 
estados diabéticos diferentes a igualdad de 
dosis de fármaco administrado (habitual- 
mente, de 30 a 65 mg por Kg de peso del 
animal). Dosis mayores que las indicadas 
provocan estados diabéticos muy intensos, 
con mortalidad elevada de los animales, 
que no permite el control de los mismos a 
mediano y largo plazo. Por el contrario, d e  
s i s  inferiores de estreptozotocina pueden ir 
seguidas de remisiones espontáneas de la 
diabetes provocada, imposibilitando estu- 
dios controlados (comparación de ratas 
trasplantadas con ratas diabéticas). Igual 
criterio de homogeneidad de los animales 
debe aplicarse a las ratas donantes de is le 
tes. 
En nuestros experimentos utilizamos 
siempre ratas albinas Wistar, machos de 250 
a 300 g de peso y de 3 a 5 meses de edad, 
isogénicas, procedentes del estabulario de 
nuestro Laboratorio, y alimentadas con la 
dieta corriente. El trasolante a las ratas re- 
ceptoras se practica a' las dos semanas de 
haberles provocado diabetes intensa, con 
niveles de glucemia superiores a 400 mg %. 
Las técnicas que utilizamos para aislar 
islotes de Langerhans comprenden la ex- 
tracción del páncreas, la digestión del mis- 
mo y la separación y obtención de los is le 
tes. La extracción del páncreas se ,realiza 
previa distensión del mismo con una disolu- 
ción fría de Hanks inyectada en el conduc- 
to biliar. A continuación, el páncreas extraí- 
do se trocea y se digiere con colagenasa 
[unos 4 mg por páncreas troceado) en un 
aparato de agitación mecánica, a 37O y du- 
rante unos 20 minutos. La digestión se det ie 
ne lavando el páncreas digerido con Iíquido 
de Hanks frío, se decanta la suspensión y se 
desecha el sobrenadante. E l  sedimento o b  
tenido, rico en islotes, se mezcla con una di- 
solución de HypaqueFicoll (HF) de densi- 
dad 1.100, por encima de la cual se añaden 
unos ml de líquido de Hanks. La mezcla se 
centrifuga durante unos 10 minutos a 800 g, 
y se obtiene una interfase HF-Hanks rica en 
islotes de Langerhans. Si se desea eliminar 
las impurezas existentes en esta interfase, se 
somete ésta a una nueva separación en HF. 
Por este método, con las técnicas descri- 
tas, se aislan unos 200 islotes de cada pán- 
creas de rata y se requieren de 6 a 8 anima- 
les donantes para remitir la diabetes de una 
rata receptora Con páncreas humano, dada 
su mayor proporción de tejido conectivo, el 
rendimiento sería mucho menor. 
Por el método de PAYNE, las ratas donan- 
tes reciben previamente, con el alimento y 
durante unas semanas, DL-Etionina que les 
provoca una atrofia del componente exocri- 
no del páncreas y un enriquecimieno relati- 
vo del páncreas endocrino. E l  procesado 
del páncreas es similar al descrito más arri- 
ba y, después de la digestión del órgano, 
se obtiene un tejido pancreático rico en 
contenido insular, que es inyectado al ani- 
mal diabético directamente. sin intentar 
previamente el aislamiento de islotes puros. 
Este método ofrece las ventaias orácticas 
de ser muy sencillo y requerir ;ólo'dos pán- 
creas para conseguir la curación de una 
rata diabética. Por otra oarte. tiene la des- 
, , 
ventaja teórica de que las impurezas del t e  
jido a trasplantar pueden provocar en el 
animal receotor reacciones secundarias no 
deseadas. 
Por esto y dada su sencillez, este método 
resulta muy útil para estudios de protocolos 
de inmunosupresión de trasplantes experi- 
mentales. 
Respecto al lugar de implantación del t e  
jido insular, KEMP (Diabetología 9, 486, 
19731 demostró aue la anidación de los is le 
tes dé páncreas en el hígado es la más efec- 
tiva. Inicialmente, nosotros aplicábamos la 
inyección directa del tejido insular en la 
vena porta, pero dada la elevada mortali- 
dad de este procedimiento lo desechamos, 
y actualmente realizamos el implante por 
inyección a través de una de las venas m e  
sentéricas del íleon terminal. 
Después de 4 o 5 anos de múltiples expe 
rimentos con resultados negativos o poco 
satisfactorios, hemos venido corrigiendo fa- 
llos y perfeccionando las distintas técnicas 
hasta conseguir finalmente, en los últimos 
meses. realizar con éxito todos los trasolan- 
tes pr&ramados. En nuestros experimentos 
con ratas diabéticas, el resultado y la efica- 
cia del trasplante se manifiestan en los días 
subsiguientes por una progresiva normaliza- 
ción de la glucemia y de la diuresis, con de 
saparición de la glucosuria, y por la deten- 
ción de la pérdida de peso y la ulterior recu- 
peración del mismo. 
La figura 1 corresponde a una microfote 
grafía del hígado de una rata, sacrificada a 
los dos meses de un trasplante de islotes de 
páncreas que resultó eficaz para compen- 
sar la intensa diabetes orovocada 15 días 
Fig. 1. Microfotografía de telido insular de páncreas 
implantado a nivel de un espacio portal del hígado de 
una rata diabética sacrificada dos meses después del 
trasplante. En el espaclo portal del centro de la rn~cro- 
fotografía se observan, arrlba y a la Izquierda un cana- 
antes por inyección de estreptozotocina. En 
el centro, debajo y hacia la derecha de un 
espacio portal con un trombo infiltrado de 
leucocitos y muy revascularizado, se obser- 
va un acúmulo de numerosas células insu- 
lares, que ofrecen su aspecto histológico 
normal y característico, bien distinto del de 
los hepatocitos que le rodean. En este caso, 
el trasplante se había practicado según el 
método de PAYNE, de ratas donantes trata- 
das con DL-Etionina y por inyección portal 
de tejido pancreático rico en islotes no puri- 
f icados. 
En la actualidad se prosigue la observa- 
ción y el estudio de los animales trasplanta- 
dos y se están realizando más experimentos 
de diabetogénesis y de trasplantes para in- 
crementar el número de animales de los 
Iículo blllar, en el centro un probable trombo muy re- 
vascular~zado y con dlscreta ~ n f ~ l t r a c ~ ó n  leucoc~tana, 
y debajo y hacla la derecha un acúmulo de numere 
sas células ~nsulares, blen distintas de los hepatocitos 
c~rcundantes 
distintos grupos. Se trata no sólo de contre 
lar a más largo plazo la eficacia del tras- 
plante de islotes pancreáticos para com- 
pensar la diabetes y prevenir sus lesiones 
secundarias, sino de investigar además, en 
nuestro modelo experimental, algunos pro- 
blemas fisiopatológicos de la diabetes m e  
Ilitus. 
Dres. LUIS BARNEO SERRA, 
MANUEL MARTINEZ ESTEBAN 
y CARMEN CARCIA PRAVIA 
Departamento l nterfacultativo de 
Fisiología de la Universidad de Oviedo 
Dirección postal: Dr. Luis Barneo Serra, 
C/ Hermanos Pidal, 34, 8P B 
33005 OVIEDO 


CARTAS AL DIRECTOR. Trasplante de islotes de páncreas en hígado por vía portal

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