Bonet, I.

Götzens, V. J.

Tejedo, A.

Torregrosa, M. A.

Revistes Catalanes amb Accés Obert

ORIGINALS 
ESTUDIO DE LAS NEOPLASIAS VESICALES MEDIANTE 
MARCADORES 
M.A. Torregrosa, I. Bonet, V.J. Gotzens, A. Tejedo 
Departamento de Cienciaj Morfologicas. Facultad de Medicina. Universidad de Barcelona 
RESUMEN 
Se analiza el valor de la inmunohis- 
toquimica como técnica complemen- 
taria en el estadiaje de 10s carcinomas 
transicionales de vejiga. 
Se determina la presencia y distribu- 
ción de CEA, HCG y laminina en cor- 
tes histológicos de tumores de diferen- 
tes grados y estadios en el momento 
del diagnostico. 
EI estudio estadístic0 indicar6 el tipo 
de relación entre estos marcadores y 
la evolución del tumor. 
La presencia de CEA y HCG se co- 
rrelaciona con el grado histológico de 
la neoplasia mientras que el grado de 
infiltración solo se correlaciona con la 
presencia de CEA en el tejido. La HCG 
seria, además, un indicarivo de la reci- 
diva posterior. 
Por lo que respecta a la laminina, su 
grado de estructuración en una mem- 
brana subepitelial continua indica el 
grado de invasividad del tumor. 
En 10s casos en 10s que la anatomia 
patológica del carcinoma transicional 
no ofrezca una idea clara de su com- 
portamiento posterior, el estudio com- 
binado de varios determinantes antigé- 
nicos relacionados con otros paráme- 
tros ya aceptados como criterios de 
malignidad, permite caracterizar con 
más detalle el comportamiento bioló- 
gico de cada uno de 10s tumores urote- 
liales. 
SUMMARY 
The value of immunohystochemistry 
as a complementary technique in the 
stagin of the urinary bladder's transitio- 
nal cell carcinoma is analyzed. 
The presence and distribution of 
CEA, HCG and laminin in hystologic 
sections from tumours of different gra- 
des and stages at the time of diagnosis 
are studied. 
A statistycal study shows the correla- 
tion between the presence of these 
markers with the tumour's evolution. 
The existence of CEA and HCG is  re- 
lated to the hystologic grade of the 
neoplasm, while the infiltration grade 
is only related to the presence of CEA 
in the tissue. The HCG is an indicator 
of future recurrence of the disease. 
The lamininets degree of structura- 
tion in a continuous subepithelial 
membrane shows the turnour's grade 
of invasion. 
Therefore, in cases in which the hys- 
tology of the transitional carcinoma 
does not give a clear idea of its deve- 
lopment, the combined study of seve- 
ral antigenic determinants in relation 
to other accepted criteria of malignan- 
cy, enables to characterize the biologi- 
cal behaviour of the urothelial tu- 
mours. 
El  carcinoma transicional representa 
mis del 90% del total de las neopla- 
sias vesicales. La subclasificación y es- 
tadiaje de estos tumores depende de 
varios parámetros tales como su confi- 
guración o no en papilas, grado de in- 
vasión y alteraciones citológicas 
(Brodsky, 1992). Este Último es uno de 
10s factores mis importantes que per- 
mite identificar a 10s pacientes con un 
mayor riesgo de progresión de la en- 
fermedad (Lützeyer et. al., 1982). 
Est6 en discusión el valor de 10s dife- 
rentes criterios diagnósticos al intentar 
ajustarlos al máximo al pronóstico de 
cada uno de 10s pacientes. Este proble- 
ma es mayor en 10s tumores papilares 
de bajo grado debido, en parte, a que 
el urotelio puede mostrar un espectro 
continuo de cambios proliferativos 
que van desde la hiperplasia urotelial 
simple sin atipia citológica hasta el car- 
'cinoma (Murphy y Soloway, 1982). 
  es te hecho genera diferencias conside- 
rables de opinión en el momento de 
establecer la categoria y grado de las 
neoplasias papilares. 
El establecimiento del grado histoló- 
gico de un tumor urotelial no est6 
exento de subjetividad (Helander et. 
al., 1984) con muy escaso valor pre- 
dictivo de su evolución en 10s grados 
intermedios (Jordan et. al., 1987). 
La utilización de técnicas comple- 
.mentarias, cada una de ellas con sus 
inconvenientes particulares, ayudan a 
incrementar el valor pronóstico del 
grado histológico. Como ejemplos 
pueden citarse la determinación del 
área nuclear (Helander et. al., 1884), 
volumen nuclear (Nielsen et. al., 
1986), uso de técnicas de citometria 
de flujo (Gustafson et. al., 1982) y estu- 
dios de la distribución de 10s antigenos 
de superficie AB0 (Javadpour, 1982). 
La mayoría de las células que consti- 
tuyen un tumor presentan algún grado 
determinado de detención en una u 
otra fase de su linea de citodiferencia- 
ción. Esto confiere al tumor una cierta 
homogeneidad en su estado de madu- 
rez celular lo que permite clasificar a 
10s tumores con un grado común (Lai- 
ner, 1981). 
En el presente estudio, se utiliza una 
bateria de determinantes antigenicos 
(CEA, HCG y laminina) que permitan 
precisar mejor el comportamiento bio- 
Iógico de 10s tumores uroteliales en el 
momento del diagnóstico. 
MATERIAL Y METODOS 
Se utiliza material de biopsia de pa- 
cientes intervenidos de tumor vesical 
desde 1980 a 1989 en el Servicio de 
Urologia del Hospital de la Cruz Roja 
de Barcelona. En todos 10s casos se si- 
guió la pauta siguiente: 
- Diagnóstico clinico 
- Resección transuretral 
- Diagnostico anatomopatológico 
- Seguimiento mediante cistoscopias. 
les (6 GI; 17 GII; 13Glll y 2 indiferen- 
ciados). Como controles se estudia 
urotelio normal obtenido mediante cis- 
toscopia de vegigas no neoplásicas. 
Ninguna de las muestras control pre- 
sento positividad para CEA ni para 
HCG mientras que la laminina aparece 
organizada en una Iámina continua su- 
bepitelial y alrededor de 10s vasos. 
lnmunohistoquímica 
CEA 
Piezas fijadas en formol e incluidas 
en parafina se procesan según el méto- 
do peroxidasa-antiperoxidasa (PAP) en 
tres estratos según la técnica descrita 
por Strenberger (1986). Antes de las in- 
cubaciones con 10s anticuerpos, 10s 
cortes se tratan con tripsina (0.1 '/O en 
PBS 10' a 37" C). Posteriormente se in- 
hibe la peroxidasa endógena con 
H202 al 0.3% en metanol (5' a tempe- 
ratura ambiente). 
Las incubaciones con 10s anticuer- 
pos se realizan a temperatura ambien- 
te y en cámara húmeda. Para CEA y 
HCG se utiliza una bateria comercial 
DAKO PAP KIT SYSTEM 20. Para la la- 
minina se utiliza un anticuerpo mono- 
clonal antilaminina humana obtenido 
en rata (Miles) a una dilución 1 :50 en 
PBS. 
El tiempo de las incubaciones es de 
1 h. Se revela con DAB (0.05% en PBS 
con 0.01 % de H202 15'). Se contrasta 
con hematoxilina y 10s cortes se mon- 
tan en DPX. 
Como controles negativos se sustitu- 
ye el anticuerpo primario por suero no 
inmune. 
RESULTADOS 
Se han estudiado 38 tumores vesica- 
Las células positivas al CEA presen- 
tan un patrón de citoplasma y tienden 
a localizarse agrupadas. 
Se han observado un total de 20 tu- 
mores positivos y 8 con reactividad fo- 
cal distribuidos de la siguiente mane- 
ra: 
a) Según el grado anatomopatológico: 
GI O casos; GI1 9(+) y 5(+/-); Glll 
9(+) y 3(+/-); indiferenciados 2(+). 
El estudio de la X2 demuestra dife- 
rencia~ significativas (X2=22.069; 
g.l.=6; p<0.01) que permiten rela- 
cionar la presencia de CEA con un 
mayor grado de malignidad. El mis- 
mo estudio estadístic0 no puede 
otorgar validez a la reactividad fo- 
cal (+I-). 
b) Según la infiltración en el momento 
del diagnóstico: limitados a muco- 
sa (2(+), 1 (+I-) y 2(-)); infiltrando 
Iámina propia (1 (+), 6(+/-) y 1 (-)); 
afectando muscular (3(+) y 1 (-)) y 
con invasión perivesical o metásta- 
sis a distancia (5(+)). Existe una co- 
rrelación estadística entre la expre- 
sión de CEA y el grado de infiltra- 
ción (X2=22.562; g.l.=6; 
p<O.001). 
C) Según la recidiva posterior: 12 ca- 
sos no recidivaron (8(+), 13(+/-) y 
Figura 1 
Inmunohistoquimica. CEA: La reactividad al CEA presenta un patrón citoplasmático en grupos 
de células con un alto grado de anaplasia distribuidos al azar en el seno del tumor. (X 90). 
I(-)) y 9 recidivaron en controles 
posteriores (4(+), 2(+/-) y 6 (-)I. 
No se demuestra correlación esta- 
dística. en este apartado. 
HCG 
Las células positivas pueden encon- 
trarse en la parte más superficial del 
epitelio neoplásico o bien en la interfa- 
se entre el estroma y el tumor o tam- 
bién adosadas a la pared de vasos san- 
guineos. Estas células tienden a encon- 
trarse aisladas y presentan un núcleo 
Único o múltiple de gran tamaño con 
citoplasma amplio, de forma ovoide 
pudiendo presentar prolongaciones 
dendriticas. La morfologia de estas cé- 
lulas remeda, en ocasiones, a la de las 
células sincitiales placentarias. Todos 
10s casos positivos para la HCG 10 fue- 
ron también para el CEA y la distribu- 
ción es la siguiente: 
a) Según grado histopatológico: GI O 
casos; GI1 S(+/-) ;  Glll 2(+) y 4(+/ 
-); indiferenciados 2(+). El test de 
la X2 (X2=23.053; g.l.=6; 
p<0.001) revela una correlación 
entre la presencia de células positi- 
vas a la HCG y el grado histológico. 
b) Según el grado de infiltración: de 11 
tumores limitados a mucosa solo 1 
present6 reactividad focal. De 10s 
19 afectando lámina propia (1 (+) y 
6(+/-). 3 tumores invadían muscu- 
lar (1 (+) y 1 (+I-)). Los casos con 
afectación perivesical o metástasis 
fueron 2(+), 2(-) y I(+/-). La X2 
no permite relacionar la HCG con 
el gade de infiltración. 
C) Según la recidiva posterior: 10s 12 ca- 
sos que no recidivaron fueron (-). De 
10s 12 que presentaron recidiva 2(+) 
y 3(+/-). Hay una relación entre la 
presencia de HCG y la recidiva pos- 
terior (X2=6.316; g.l.=2; p<0.05). 
Laminina 
A nivel de la lamina propia, en 
comparación con el urotelio nor- 
mal, la laminina presenta una reac- 
tividad mayor y en particular en la 
zona subyacente a la membrana 
basal del epitelio neoplásico. 
En 10s tumores limitados a muco- 
sa, la laminina se distribuye de for- 
ma continua a nivel de la membra- 
na basal presentando puntos de re- 
fuerzo o duplicación. 
En 10s tumores invasores, el mar- 
cador se distribuye sobre la mem- 
brana basal de forma discontinua. 
En las proximidades al punto de ro- 
tura de la Iámina basal, la laminina 
se negativiza pudiendo observarse 
una zona de transición en la que la 
reactividad va disminuyendo hasta 
no ser detectable en el punto de in- 
vasión. 
En 10s tumores más invasores y 
de mayor grado de malignidad, es 
frecuente encontrar una pérdida de 
la malla fibroconectiva tumoral y 
células tumorales con citoplasma 
positivo a la laminina. 
DISCUSION 
Las distintas subpoblaciones ce- 
lulares que forman un tumor serian 
un indicador de la inestabilidad ge- 
nética y del indice de mutabilidad 
de estas células (Isaacs et. al., 1982) 
rnás que una explicación de su ori- 
gen. 
El CEA no es un antigen0 especí- 
Figura 2 
Inmunohistoquimica. HCG: La HCG se encuentra en el citoplasma de células localizadas en 
la interfase entre el estroma y el tumor asi como adosadas a la pared de vasos de mediano 
calibre. Las células positivas son de gran tamaño, con frecuencia multinucleadas y remedan 
a las células sincitiales. (X 120). 
Figura 3 
Inmunohistoquimica. Laminina: En 10s tumores no invasores la larninina se localiza formando 
una banda continua a lo largo de la membrana basal y alrededor de las estructuras vasculares. 
(X 90). 
Figura 4 
Inmunohistoquímica. Laminina. En tos tumores invasores, la laminina se negativiza en las zo- 
nas próximas a la ruptura de la membrana basal y se localiza en forma de acúmulos dispues- 
tos irregularmente en el estroma subyacente. (X 120). 
fico de un tipo determinado de tu- 
mor. Su utilidad y significado varían 
de un tumor a otro aunque en lí- 
neas generales se considera asocia- 
do a las neoplasias de caracter rnás 
agresivo y de crecimiento rápido 
(Parbhoo, 1987). 
Los resultados obtenidos relacio- 
nan la presencia de CEA con el gra- 
do de malignidad local. Estos resul- 
tados encuentran un paralelismo 
en 10s obtenidos por Asamoto et. 
al. (1989) que descartan las posi- 
bles reacciones cruzadas entre 10s 
anticuerpos antiCEA y 10s tumores 
uroteliales. Puede pensarse que la 
presencia de CEA indicaria, si  no 
un grado determinado de diferen- 
ciación celular, un tipo concreto de 
organización histológica. 
La HCG es una hormona gluco- 
protéica sintetizada normalmente 
por el sincitiotrofoblasto de la pla- 
centa (Mann y Karl, 1983). 
La subunidad beta de la HCG es 
uno de 10s marcadores más repre- 
sentativos de 10s tumores malignos 
de células germinales (Brown, 
1983). 
El significado biológico de la 
HCG puede buscarse en el hecho 
de que la diferenciación a trofoblas- 
to a partir de 10s blastómeros ocu- 
rre antes de establecer el contacto 
con el endometrio matern0 y que, 
precisamente, éstas son las celulas 
encargadas de establecer la interfa- 
se feto-materna. Las células trofo- 
blásticas tienen unas propiedades 
de membrana únicas haciéndolas 
muy resistentes a 10s mecanismos li- 
ticos de las células citotóxicas. 
Cabe atiadir que el trofoblasto sin- 
tetiza moléculas inmunosupresoras 
a elevadas concentraciones locales 
capaces de evitar la respuesta in- 
munitaria (Lala et. al., 1986). 
Los resultados obtenidos permiten 
relacionar la presencia de HCG con 
un grado más indiferenciado y no con 
el grado de infiltración de las neopla- 
sias uroteliales. Estos datos, junto a las 
observaciones de Wurgel et. al. (1987) 
que detectan células positivas a la 
HCG en carcinomas in situ vesicales, 
además de en 10s de mayor grado, Ile- 
van a pensar que la HCG seria el pro- 
ducto de una línea de citodiferencia- 
ción, adoptada por las células neoplá- 
sicas menos maduras, rnás que el re- 
sultado de un avance en la secuencia 
de hechos que definen el desarrollo de 
una neoplasia. 
La observación de células positivas 
a la HCG puede interpretarse como 
una forma muy primitiva de establecer 
contacto con 10s tejidos del huésped 
además de intervenir en la formación 
de un entorno celular permisivo para 
el desarrollo y proliferación de 10s teji- 
dos inmaduros. 
La laminina es una glicoproteína sin- 
tetizada por las células epiteliales y se 
localiza en las membranas basales so- 
bre las que descansan estas células. 
Las celulas tumorales inbasoras pue- 
den afectar a la matriz extracelular de 
diferentes maneras: sintetizando enzi- 
mas proteoliticos específicos para 10s 
componentes de la membrana basal; 
inducir en las células del huésped una 
acumulación de componentes matri- 
ciales o bien puede darse la síntesis de 
10s componentes de la membrana ba- 
sal por parte de las células tumorales 
(Liotta, 1984). 
En el presente trabajo, en 10s tumo- 
res que presentaron algún tipo de infil- 
tración, no se observó una reactividad 
continua a lo largo de la membrana 
basal. Al igual que en 10s estudios rea- 
lizados con colágeno IV se ha observa- 
do que las interrupciones en la tinción 
aumentan a medida que aumenta la 
profundidad de invasión y que el tu- 
mor es menos diferenciado (Zuk et. 
al., 1989). 
El hecho de encontrar acúmulos de 
laminina en el espacio intercelular de 
la neoplasia y células positivas a la la- 
minina en 10s tumores de más alto gra- 
do apoyan la idea de que predornina- 
ria una organización defectuosa matri- 
cial sobre un incremento en la degra- 
dación en las neoplasias vesicales. 
BIBLIOGRAFIA 
1. ASAMOTO, M.; FUKUSHIMA, S.; TATEMOTO, Y.; YAMADA, K.; YUBA, R and MORI, M.: 
lmmunohistochemical evaluation of nonespecific cross reactive antigen and carcinoembr- 
yonic antigen (CEA) in urinary bladder carcinoma. Anticancer Res., 9:319-326, 1989. 
2. BRODSKY, G.L.: Pathology of bladder carcinoma. Hematol. Oncol. Clinics North Ameri- 
ca, 6: 59-80, 1992. 
3. BROWN, PN.: The origin of germ cell tumors of the testis. Cancer, 51 : 1610-1614, 1983. 
4. GUSTAFSON, M.; TRIBUKAIT, B. and EPOSTI, P.L.: DNA pattern, histological grade and 
multiplicity related to recurrence rate in superficial bladder tumours. Scand. 1. Urol. Nep- 
hrol, 16: 135-139, 1982. 
5. HELANDER, K.; MOFER, PA. and HOLMBERG, C.: Karyometric investigations on urinary 
bladder carcinoma. Correlations to histopathological grading. Virchows Archiv. (Pathol. 
Anat.), 403: 117-125, 1984. 
6. ISAACS, J.T.; WAKE, N.; COFFEY, D.S. and SANDBERG, A.A.: Genetic instability coupled 
to clonal selection as a mechanism for tumor progression in the Dunning R-3327 rat pros- 
tatic carcinoma system. Cancer Res., 42: 2353-2361, 1982. 
7. JAVADPOUR, N.: Oncofetoproteins and others markers in genitourinary cancer. In: Re- 
cent advances in urologic cancer. Williams and Wilkins. Baltimore, p. 47, 1982. 
8. JORDAN, A.; WEINGARTEN, 1. and MURPHY, W.M.: Transitional cell neoplasm of the uri- 
nary bladder. Cancer, 60: 2766-2774, 1987. 
9. LAINER, L.L.; WARNER, N.L.; LEDBATTER, J.A. and HERGENBERG, L.: Quantitative im- 
munofluorescent analysis of surface phenotypes of murine beta cell lymphomas and plas- 
macytomas with monoclonal antibodies. J. Immunol., 127: 1691 -1697, 1981. 
10. LALA, P.K.; KEARNS, M.; PARHAS, R.S.; SCODRAS, J. and JOHNSON, S.: lmmunological 
role of the cellular constituents of the decidua in the maintenance of semiallogenic preg- 
nancy. In: Nidation. K. Yoshinaga (ed.). Ann.N.Y. Acad. Sci., 476: 183-205, 1986. 
11. Liotta, L.A.: Tumor invasion and metastases: Role of the basernent membrane. Amer. J. Pat- 
hol., 117: 339-347, 1984. 
12. Lützeyer, W.; Rübben, M. and Dahrn, H.: Prognostic parameters in superficial bladder 
cancer: an analysis of 315 cases. J. Urol., 127: 250-252, 1982. 
13. MANN, K. and KARL, H.J.: Molecular heterogeneity of human chorionic gonadotropin 
and its subunits in testicular cancer. Cancer, 52: 654-660, 1983. 
14. MURPHY, W.M. and SOLOWAY, M.S.: Developing carcinoma (dysplasia) of the urinary 
bladder. Pathol..Annu., 17: 197, 1982. 
15. NIELSEN, K.; COLSTRUP, M.; NILSSON, T. and GUNDERSEN, H.G.J.: Stereological esti- 
mates of nuclear volume correlated with histopathological grading and prognosis of the 
bladder tumours. Virchows Archiv (Cell Pathol.), 52: 41 -54, 1986. 
16. PARBHOO, S.P.: Clinical pointers to rapid growth. In: Pointers to Cancer Prognosis. B.A. 
Stoll (ed.) Martinus Nijhoff Publishers. Netherlands, p.p. 3-19, 1987. 
17. STRENBERGER, L.A.: Immunocytochemistry. Third Edition. John Wiley and sons. New 
York, p.p. 90-209, 1986. 
18. WURGEL; R.S.; YAMADA, H.T. and NICH, P.T.: Ectopic production of human chorionic 
gonadotropin by poorly differentiated transitional cell tumors of the urinary tract. J. Urol., 
137: 502-504, 1987. 
19. ZUK, R.).; BAITHUN, S.I.; MARTINS, I.E.; COX, E.L. and REVELL, P.A.: The immunocyto- 
chernical demostration of basement rnembrane deposition in transitional cell carcinoma 
of bladder. Virchows Arch. (Pathol. Anat.), 414: 447-452, 1989. 


ORIGINALS. Estudio de las neoplasias vesicales mediante marcadores.

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Revistes Catalanes amb Accés Obert